專利名稱：一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
甲型病毒性肝炎，簡稱甲型肝炎、甲肝，是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的，以肝臟炎癥病變?yōu)橹鞯膫魅静?，主要通過糞-口途徑傳播，臨床上以疲乏，食欲減退，肝腫大，肝功能異常為主要表現(xiàn)，部分病例出現(xiàn)黃疸，主要表現(xiàn)為急性肝炎，無癥狀感染者常見。任何年齡均可患本病，但主要為兒童和青少年。成人甲肝的臨床癥狀一般較兒童為重。冬春季節(jié)常是甲肝發(fā)病的高峰期。本病病程呈自限性，無慢性化，引起急性重型肝炎者極為少見。目前對甲型肝炎病毒檢測的主要方法是對血液樣本進(jìn)行采集檢測抗體，在膠體金的檢測方法中，有檢測甲型肝炎病毒IgG的報道，但使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測尚未有相關(guān)報道。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優(yōu)點。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的是提供一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，具有采樣容易、操作簡便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場檢測等優(yōu)點。本實用新型提供一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊 (1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記甲型肝炎病毒特異性的抗原VPl的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素(NC)膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測線T (5)為包被在NC膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在NC膜上的抗甲型肝炎病毒特異性的抗原VPl的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸樣墊(4)形成試紙。所述的一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于其抗體的包被方法為:以0.0lM pH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被甲型肝炎病毒特異性蛋白VPl抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2-5小時。將標(biāo)記好甲型病毒特異性抗原VPl的膠體金顆粒制成膠體金墊，與包被抗體的硝酸纖維素膜和其他輔料制備成試紙條。所述的一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于其檢測方法為:用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復(fù)上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結(jié)果。本實用新型的有益效果是:提供一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒。和傳統(tǒng)試劑相比，使用口腔液拭子進(jìn)行IgG檢測具有采樣容易，減少患者的痛苦，減少檢測人員的工作量的優(yōu)點。

:圖1使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒試紙結(jié)構(gòu)示意圖。附圖符號說明:1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測線Tl ；6:質(zhì)控(C)線；7:塑料支撐板。圖2采集口腔液拭子結(jié)構(gòu)示意圖附圖符號說明:1:尼龍墊端；2:手持端。
具體實施方式
實施例:制備甲型肝炎的檢測試劑盒試紙將甲型肝炎病毒特異性抗原VPl使用膠體金標(biāo)記，制成膠體金墊，以0.0lM pH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗人IgG抗體配制成5mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1-1.5ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時在NC膜上部包被甲型肝炎病毒特異性蛋白VPl抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2_5小時。將膠體金墊和包被好的NC·膜和其他輔料裝配成試紙條。將50例已確診甲肝病毒IgG抗體陽性的病人作為待檢者，將50例已確診甲肝病毒IgG抗體陰性的健康人作為對照組待檢者。用口腔拭子尼龍墊端從嘴的上牙齦一角開始，從左慢慢壓拭到右，用時5到6秒，然后，從右慢慢壓拭到左，用時5到6秒，反復(fù)3次，然后反轉(zhuǎn)口腔拭子，從嘴的下牙齦一角開始，重復(fù)上述過程，壓拭力度，以受檢者有酸脹感，且無明顯不適為準(zhǔn)；壓拭后，立即將口腔拭子浸入樣本緩沖液中，先后讓拭子的兩面緊貼試管壁，上下刮擦6-8次，管內(nèi)液體即為口腔液樣本，將試紙條平放，在上樣墊上加入IOOul樣品，使膠體金溶解并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在15分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結(jié)果。檢測結(jié)果的解釋:如果對照區(qū)內(nèi)的對照線沒有出現(xiàn)，檢測結(jié)果無效，如果僅在對照區(qū)出現(xiàn)一條線對照線，結(jié)果為陰性。如果檢測線和對照線都出現(xiàn)，即試紙上出現(xiàn)兩條線，則檢測結(jié)果為陽性。通過臨床血清檢測，IgG為陽性的樣本和IgG為陰性的樣本，本試劑檢測和臨床診斷結(jié)果完全一致。臨床檢測表明本試劑的性能和現(xiàn)有診斷手段相比無顯著性差異，適合用于臨床檢測。
權(quán)利要求1.一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，其特征在于塑料支撐板(7) —端連接上樣墊(1)，上樣墊(I)的一端緊密壓接含有標(biāo)記甲型肝炎病毒特異性的抗原的膠體金墊(2)，膠體金墊(2) —端緊密壓接硝酸纖維素膜(3)，硝酸纖維素膜包被有相互分離的檢測線T線(5)和質(zhì)控C線(6)，檢測線T (5)為包被在硝酸纖維素膜上的抗人IgG抗體，質(zhì)控(C)線(6)為包被在硝酸纖維素膜上的甲型肝炎病毒特異性抗原VPl的抗體，硝酸纖維素膜的另一端連接吸 樣墊(4)形成試紙。
專利摘要本實用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種使用拭子采集體液檢測甲型肝炎的檢測試劑盒，采用拭子采集口腔液，用膠體金標(biāo)記甲型肝炎病毒特異性重組抗原，包被抗人IgG抗體實現(xiàn)對口腔液中抗甲型肝炎病毒IgG抗體的檢測。具有操作簡便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟(jì)實用等優(yōu)點。
文檔編號G01N33/576GK203101398SQ20122059684
公開日2013年7月31日 申請日期2012年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月12日
發(fā)明者祁軍, 于佳, 關(guān)淳, 劉振宇, 柴宏森, 蘇麗, 韓婧娜, 劉寅 申請人:中華人民共和國天津出入境檢驗檢疫局