專利名稱：一種測試片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于檢測裝置領(lǐng)域，具體地涉及一種包括熒光物質(zhì)層的測試片。
背景技術(shù)：
1990年，Beggs等綜合膠體金和免疫分析技術(shù)，建立了膠體金免疫層析法(GICA)，用于檢測人尿和血清中的HCG。由于該方法只需肉眼觀察即可，非專業(yè)人士也可操作，使急診、基層醫(yī)院、病人床邊和現(xiàn)場等遠(yuǎn)離大型實(shí)驗(yàn)室的地方開展相關(guān)檢測成為可能，所以應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。這種免疫分析技術(shù)已經(jīng)超過20年的發(fā)展，但其基本的工作原理并未改變，它只用于定性或半定量檢測(根據(jù)測試區(qū)部分灰度深淺定量)，且靈敏度不夠，因此，限制了該方法的進(jìn)一步應(yīng)用。后來，對現(xiàn)有的膠體金層析方法進(jìn)行了改進(jìn)，在膠體金免疫層析法中結(jié)合使用了熒光定量分析的方法，即采用帶有熒光的測試區(qū)，當(dāng)膠體金結(jié)合測試區(qū)的熒光物質(zhì)后，影響熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度，從而定量檢測待測物。然而，該改進(jìn)方法中測試區(qū)的熒光強(qiáng)度弱或熒光分布不均，常常會影響測試結(jié)果的可比性，不利于批量處理測試結(jié)果。因此，本領(lǐng)域仍然需要研發(fā)一種適用于該改進(jìn)的層析法且測試區(qū)熒光強(qiáng)、分布均勻的測試片。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供包括一熒光物質(zhì)層的測試片，所述測試片的測試區(qū)熒光穩(wěn)定、強(qiáng)度一致且分布均勻，非常適用突光分析方法。本實(shí)用新型提供了一種測試片，其包括:背襯片以及位于背襯片上的樣品墊、結(jié)合墊、膜片、熒光物質(zhì)層和吸收墊；其中，所述樣品墊貼附于所述背襯片的一端；所述吸收墊貼附于所述背襯片的另一端；所述結(jié)合墊貼附于所述背襯片上，且與所述樣品墊部分重疊；所述膜片貼附于所述背襯片上，且分別與所述結(jié)合墊和所述吸收墊部分重疊；所述膜片上設(shè)置有測試區(qū)，所述測試區(qū)位于所述結(jié)合墊和所述吸收墊之間；所述熒光物質(zhì)層貼附于所述背襯片上，且位于所述膜片的下方。在另一優(yōu)選例中，所述熒光物質(zhì)層位于所述測試區(qū)的下方。在另一優(yōu)選例中，所述膜片上還設(shè)置有對照區(qū)，所述對照區(qū)位于所述測試區(qū)和所述吸收墊之間或位于所述測試區(qū)和所述結(jié)合墊之間，且與所述測試區(qū)不相連。在另一優(yōu)選例中，所述熒光物質(zhì)層位于所述測試區(qū)和所述對照區(qū)的下方。在另一優(yōu)選例中，所述熒光物質(zhì)層為背襯片的膠面或?yàn)閱为?dú)的薄膜。應(yīng)理解，在本實(shí)用新型范圍內(nèi)中，本實(shí)用新型的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
圖1為本實(shí)用新型的測試片結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本實(shí)用新型的測試片膜片處的剖面圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)在測試片的測試區(qū)下或包含測試區(qū)的部位下設(shè)置一熒光物質(zhì)層，使得該測試片具有高強(qiáng)度且強(qiáng)度分布均勻的熒光，更適用于熒光分析方法。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人完成了本實(shí)用新型。測試片現(xiàn)在更詳細(xì)地描述本實(shí)用新型測試片的構(gòu)造和制法。應(yīng)注意，測試片的具體構(gòu)造可以變化，這取決于意圖用測試片來進(jìn)行的具體測試。在實(shí)施例之外的測試片構(gòu)造，也落于本實(shí)用新型范圍之中。如圖1和圖2所示，測試片可包括背襯片2，其長度與測試片相同。加樣區(qū)3位于測試片的一端，樣品墊31位于加樣區(qū)，可通過粘合劑粘貼于加樣區(qū)。吸收區(qū)7位于測試片的另一端，在加樣區(qū)的遠(yuǎn)端，吸收墊71位于吸收區(qū)。結(jié)合區(qū)4位于加樣區(qū)和吸收區(qū)之間，在加樣區(qū)的近端和吸收區(qū)的遠(yuǎn)端，結(jié)合墊4粘貼于結(jié)合區(qū)，所述結(jié)合墊緊鄰樣品墊、且與所述樣品墊部分重疊(例如將所述結(jié)合墊的一段置于樣品墊和背襯片之間)。在結(jié)合區(qū)和吸收區(qū)之間設(shè)置有一膜片56 (也稱層析膜)，該膜片粘貼于背襯片，且分別與結(jié)合墊和吸收墊部分重疊(例如將膜片的一端置于所述結(jié)合墊和背襯片之間；將膜片的另一端置于所述吸收墊和背襯片之間)。測試區(qū)5 (也稱檢測線T)位于該膜片56上。較佳地，所述測試區(qū)與結(jié)合墊/或吸收墊之間均具有適當(dāng)?shù)目臻g(如約5 — 8mm)。優(yōu)選地，所述膜片上還設(shè)置有對照區(qū)6 (也稱質(zhì)控線C)，所述對照區(qū)可以位于測試區(qū)和吸收區(qū)之間，也可以位于測試區(qū)和結(jié)合區(qū)之間，并與測試區(qū)之間有適當(dāng)?shù)目臻g(如約3 — 5mm)。所述測試片還包括熒光物質(zhì)層8，所述熒光物質(zhì)層緊密地粘附于背襯片和膜片之間，例如通過粘貼劑粘貼于背襯片和膜片之間。該熒光物質(zhì)層的長度與膜片的長度相同，或者基本相同(優(yōu)選地，所述膜片的長度略長于該熒光物質(zhì)層，從而使得膜片的兩端可粘附于背襯片上)。更優(yōu)選地，所述的熒光物質(zhì)層僅位于測試區(qū)和對照區(qū)下方，或者僅位于測試區(qū)的下方。應(yīng)理解，在保證測試區(qū)下方存在熒光物質(zhì)層的基礎(chǔ)上，發(fā)明人可任意設(shè)置該熒光物質(zhì)層的長度，所述的熒光物質(zhì)層還可延長至測試片的其它部位，例如熒光物質(zhì)層可位于結(jié)合墊和膜片下，膜片和吸收墊下，結(jié)合墊、膜片和吸收墊下，或者位于樣品墊、結(jié)合墊、膜片和吸收墊下(即與測試片長度相同)。 該熒光物質(zhì)可以來自于背襯片的膠面，也可以是單獨(dú)的薄膜。背襯片可以用任何穩(wěn)定的、無孔的已知材料制成，其強(qiáng)度應(yīng)足以支承材料和粘于其的測試片。因?yàn)樵S多測定用水作為擴(kuò)散介質(zhì)，因此背襯片較佳地是基本上不透水的。在一個優(yōu)選例中，背襯片是用聚氯乙烯膜制成的(如PVC膠板)。[0033]樣品墊可用任何已知的吸收性材料制成。可使用的材料例子包括:纖維素、硝酸纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維、尼龍、聚電解質(zhì)離子交換膜、丙烯共聚物/尼龍、和聚醚砜。結(jié)合墊或膜片可以用任何已知的材料制成，只要該材料有足夠孔隙度從而允許在表面和內(nèi)部發(fā)生流體的毛細(xì)管作用。結(jié)合墊或膜片應(yīng)有足夠的孔隙度，從而允許涂有抗體或抗原的顆粒移動。結(jié)合墊或膜片還可被含待檢測分析物的樣品中所用的液體潤濕(例如，對于水性液體具有親水性，對于有機(jī)溶劑具有疏水性)。通過例如在美國專利N0.4，340，482或N0.4，618，533中所述的方法(這些方法描述了將疏水表面轉(zhuǎn)變成親水表面)，可以改變其疏水性從而使其具有親水性以便用于水性液體?？捎糜谥圃旖Y(jié)合墊或膜片的材料例子包括:聚脂膜、纖維素、硝酸纖維素、乙酸纖維素、玻璃纖維、尼龍、聚電解質(zhì)離子交換膜、丙烯共聚物/尼龍、和聚醚砜(polyethersulfone)。在一個優(yōu)選例中，結(jié)合墊是用聚脂膜制成的，膜片是用硝酸纖維素制成的。吸收墊可以用任何能吸收作為樣品和緩沖液的液體的已知材料制成。吸收墊的吸收能力應(yīng)足夠大，以便吸收添加至測試片的液體。適用于吸收墊的材料的例子包括纖維素、玻璃纖維和厚吸水紙。制作方法本測試片的制作方法可采用現(xiàn)有的測試片制作方法，如圖1所示:分別將樣品墊、結(jié)合墊、膜片、吸收墊、熒光物質(zhì)層通過粘合劑粘貼于背襯片?，F(xiàn)對本實(shí)用新型測試片的制作方法作進(jìn)一步地說明:方法1:1.1選擇帶有膠面的PVC板，作為背襯片，所述PVC板的膠面中含有熒光物質(zhì)，在一定激發(fā)光照射下可發(fā)出熒光，所述膠面作為熒光物質(zhì)層。1.2將層析膜(作為膜片)粘貼于PVC板，然后按圖1所示依次將吸收墊、結(jié)合墊(如膠體金結(jié)合墊)、樣品墊粘貼于PVC板。1.3在層析膜上設(shè)置測試區(qū)和任選地設(shè)置對照區(qū)。優(yōu)選地所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一側(cè)，所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間。方法I制得的測試片中，熒光物質(zhì)層的長度與測試片長度一致，即所述熒光物質(zhì)層位于樣品墊、結(jié)合墊、膜片和樣品墊下。方法2:2.1選擇帶有膠面的PVC板，作為背襯片；2.2按圖1所示，首先將含有熒光物質(zhì)的薄膜(作為熒光物質(zhì)層)粘貼于PVC板，再將層析膜覆蓋于該薄膜上，層析膜長度略長于該薄膜且完全覆蓋該薄膜，層析膜兩端超出薄膜的部分粘貼于PVC板上；其中，所述的薄膜兩面均為光面。2.3按圖1所示，依次將吸收墊、結(jié)合墊(如膠體金結(jié)合墊)、樣品墊粘貼于PVC板即可。2.4在層析膜上設(shè)置測試區(qū)和任選地設(shè)置對照區(qū)。優(yōu)選地所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一側(cè)，所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間。方法2制得的測試片中，所述熒光物質(zhì)層位于所述膜片下，略短于所述膜片。方法3:[0052]3.1選擇帶有膠面的PVC板，作為背襯片；3.2選擇含有熒光物質(zhì)的薄膜，作為熒光物質(zhì)層，所述的薄膜一面是光面，另一面是膠面；3.3按圖1所示，首先將熒光薄膜粘貼于PVC板，薄膜的膠面朝上，光面朝下(即光面朝向背襯片)；再將層析膜粘貼于熒光薄膜的膠面；3.4按圖1所示，依次將吸收墊、結(jié)合墊(如膠體金結(jié)合墊)、樣品墊粘貼于PVC板即可。3.5在層析膜上設(shè)置測試區(qū)和任選地設(shè)置對照區(qū)。優(yōu)選地所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一側(cè)，所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間。方法3制得的測試片中，所述熒光物質(zhì)層位于所述膜片下，其長度與所述膜片相同或略短于所述膜片。本實(shí)用新型的測試片用于現(xiàn)有的結(jié)合使用熒光定量分析方法的膠體金免疫層析法中，具體地工作流程例如:(1.1)將捕獲劑(如鏈親和素，即Streptavidin或SA)固定于檢測線處。(1.2)將待測物樣品加在樣品墊(如玻璃纖維)上，樣品中的待測物(如抗原)在毛細(xì)作用下向吸水墊方向移動，途經(jīng)載有結(jié)合劑(如針對抗原的金標(biāo)抗體、biotin標(biāo)記的抗體)的結(jié)合墊后，將所述結(jié)合劑完全復(fù)溶，層析過程中抗原與結(jié)合劑形成“金標(biāo)抗體-抗原-biotin抗體”的3元復(fù)合物,被檢測線處的捕獲劑(如Streptavidin)捕獲；3元復(fù)合物中的金淬滅檢測線處的熒光。(1.3)多余的游離金標(biāo)抗體繼續(xù)前移，被固定在質(zhì)控線處的對照劑(如抗金標(biāo)抗體的抗體)捕獲，呈現(xiàn)紅色，說明檢測有效。(1.4)分別測定膜條檢測線處的熒光強(qiáng)度Ft及檢測線與質(zhì)控線中間處的熒光強(qiáng)度F。，計算&/FT的值，值越大說明待測物濃度越高，反之則越低；如樣本中無待測物時，不能形成3元復(fù)合物，則Fe/FT ^ I。熒光物質(zhì)和吸光物質(zhì)的選擇如上所述的工作流程中，本實(shí)用新型測試片的結(jié)合墊含有特異性結(jié)合待測物(如抗原)的膠體金標(biāo)記的結(jié)合劑(稱為金標(biāo)抗體)，其中，當(dāng)作為吸光物質(zhì)的膠體金在測試區(qū)富集時，影響測試區(qū)的熒光強(qiáng)度，從而定量檢測待測物。應(yīng)理解，所述結(jié)合墊上還可含有其它已知的吸光物質(zhì)。當(dāng)然，用于本實(shí)用新型測試片的熒光物質(zhì)和吸光物質(zhì)應(yīng)配合使用，基本原則是熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與吸光物質(zhì)的吸收光譜部分或完全重疊。最優(yōu)的是完全重疊，如此會有較高的檢測靈敏度。代表性的熒光物質(zhì)是本領(lǐng)域現(xiàn)有的熒光物質(zhì)，例如包括(但并不限于):熒光素、羧基突光素、2-甲氧基突光素、4,5-二甲氧基突光素、羅丹明、藻紅蛋白(Phycoerythrin,PE)、量子點(diǎn)、稀土元素離子(如Eu3+)及其螯合物等組合，只要所選熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜與所選吸光物質(zhì)的吸收光譜有重疊即可。代表性的吸光物質(zhì)是本領(lǐng)域現(xiàn)有的吸光物質(zhì)，例如包括(但并不限于):膠體金、納米金棒、納米銀棒等組合，只要所選吸光物質(zhì)的吸收光譜與所選熒光物質(zhì)的激發(fā)或發(fā)射光譜重疊即可。下面結(jié)合具體實(shí)施，進(jìn)一步闡述本實(shí)用新型。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本實(shí)用新型而不用于限制本實(shí) 用新型的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例1測試片I[0065]1.1選擇帶有膠面的PVC板，作為背襯片，所述PVC板的膠面中含有熒光物質(zhì)羅丹明B，在一定激發(fā)光照射下可發(fā)出熒光，所述膠面作為熒光物質(zhì)層；1.2將硝酸纖維素膜(作為膜片)粘貼于PVC板，然后按圖1所示依次將厚吸水紙、膠體金結(jié)合墊、玻璃纖維粘貼于PVC板；1.3在硝酸纖維素膜上設(shè)置一測試區(qū)和一對照區(qū)；所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一偵牝所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間，測試區(qū)和對照區(qū)之間的距離為5mm，即得制得測試片I。實(shí)施例2測試片22.1選擇帶有膠面的PVC板，作為背襯片；2.2按圖1所示，首先將含有羅丹明B的薄膜(作為熒光物質(zhì)層)粘貼于PVC板；再將硝酸纖維素膜(作為膜片)覆蓋于羅丹明B薄膜上，層析膜長度略長于羅丹明B薄膜且完全覆蓋該薄膜，層析膜兩端超出該薄膜的部分粘貼于PVC板上；其中，所述的羅丹明B薄膜兩面均為光面；2.3按圖1所示，依次將吸收墊、膠體金結(jié)合墊、樣品墊粘貼于PVC板；2.4在硝酸纖維素膜上設(shè)置一測試區(qū)和一對照區(qū)；所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一偵牝所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間，測試區(qū)和對照區(qū)之間的距離為5mm，即得測試片2。實(shí)施例3測試片33.1選擇帶有膠面的PV C板，作為背襯片；
3.2選擇含有熒光物質(zhì)(如羅丹明B)的薄膜，作為熒光物質(zhì)層，所述的薄膜一面是光面，另一面是膠面；3.3按圖1所示，首先將熒光薄膜粘貼于PVC板，薄膜的膠面朝上，光面朝下(即光面朝向背襯片)；再將硝酸纖維素膜(作為膜片)粘貼于熒光薄膜的膠面；3.4按圖1所示，依次將吸收墊、膠體金結(jié)合墊、樣品墊粘貼于PVC板；3.5在硝酸纖維素膜上設(shè)置一測試區(qū)和一對照區(qū)；所述測試區(qū)在靠近結(jié)合墊的一偵牝所述對照區(qū)在測試區(qū)和吸收墊之間，測試區(qū)和對照區(qū)之間的距離為5mm，即得測試片3。實(shí)施例4檢測試驗(yàn)取實(shí)施例1制備的測試片1，定量檢測血清中甲胎蛋白(AFP)的濃度。4.1、金標(biāo)抗體的制備4.1.1膠體金-抗體保存液
權(quán)利要求1.種測試片，其特征在于，包括:背襯片以及位于背襯片上的樣品墊、結(jié)合墊、膜片、熒光物質(zhì)層和吸收墊； 其中，所述樣品墊貼附于所述背襯片的一端； 所述吸收墊貼附于所述背襯片的另一端； 所述結(jié)合墊貼附于所述背襯片上，且與所述樣品墊部分重疊； 所述膜片貼附于所述背襯片上，且分別與所述結(jié)合墊和所述吸收墊部分重疊； 所述膜片上設(shè)置有測試區(qū)，所述測試區(qū)位于所述結(jié)合墊和所述吸收墊之間； 所述熒光物質(zhì)層貼附于所述背襯片上，且位于所述膜片的下方。
2.權(quán)利要求1所述的測試片，其特征在于，所述熒光物質(zhì)層位于所述測試區(qū)的下方。
3.權(quán)利要求1所述的測試片，其特征在于，所述膜片上還設(shè)置有對照區(qū)，所述對照區(qū)位于所述測試區(qū)和所述吸收墊之間或位于所述測試區(qū)和所述結(jié)合墊之間，且與所述測試區(qū)不相連。
4.權(quán)利要求4所述的測試片，其特征在于，所述熒光物質(zhì)層位于所述測試區(qū)和所述對照區(qū)的下方。
5.權(quán)利要求1所述的測試片，其特征在于，所述熒光物質(zhì)層為背襯片的膠面或?yàn)閱为?dú)的薄膜。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種測試片。具體地，本實(shí)用新型公開的測試片包括背襯片、樣品墊、結(jié)合墊、膜片以及吸收墊等，可用于生物樣本的定量檢測。
文檔編號G01N33/558GK202929039SQ201220624739
公開日2013年5月8日 申請日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:李家奕