一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的測(cè)定方法。其步驟是先用溶劑提取血漿樣品，所得樣品液用固相萃取技術(shù)處理，將上述處理好的固相萃取小柱，用醋酸和甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)眉状既芙猓吹霉┰嚻啡芤?，用HPLC-MS/MS進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定羊血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素的含量。青蒿琥酯最低檢測(cè)線為0.1ng·mL-1，二氫青蒿素最低檢測(cè)線為1ng·mL-1。本發(fā)明減少了雜質(zhì)的影響，富集了樣品濃度，專屬性強(qiáng)，分離效果好，方法線性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率試驗(yàn)均達(dá)較好的技術(shù)要求，該方法為藥物在生物體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)及生物等效性研究奠定了方法學(xué)基礎(chǔ)。
【專利說(shuō)明】一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于藥物分析領(lǐng)域涉及一種運(yùn)用固相萃取前處理技術(shù)和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]在亞洲和非洲國(guó)家青蒿素及其衍生物青蒿琥酯等被廣泛用于瘧疾的治療，特別是惡性瘧原蟲(chóng)的治療。青蒿琥酯及其在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物二氫青蒿素血藥濃度的檢測(cè)方法在國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。目前報(bào)道的青蒿琥酯含量的檢測(cè)方法主要有HPLC-UV檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)、HPLC-蒸發(fā)光檢測(cè)。但由于青蒿琥酯的分子結(jié)構(gòu)決定了它的紫外吸收很弱，紫外檢測(cè)限高，很難滿足生物樣品檢測(cè)的要求，并且檢測(cè)方法復(fù)雜，操作困難。為了解決血漿樣品中青蒿琥酯及二氫青蒿素的含量測(cè)定問(wèn)題，必須同時(shí)在生物樣品前處理過(guò)程和分析檢測(cè)技術(shù)中尋求突破，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
[0005]固相萃取技術(shù)是一種樣品預(yù)處理技術(shù)，由液固萃取和柱液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái)，主要用于樣品的分離、純化和濃縮，與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率，更有效的將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過(guò)程，得到高純度和濃縮的分離物。
[0006]HPLC — MS/MS (液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜)聯(lián)用技術(shù)是當(dāng)前比較新穎的技術(shù)，因其結(jié)合了液相色譜的高效分離能力和質(zhì)譜的準(zhǔn)確定性能力，近年來(lái)成為最可靠實(shí)用的分析手段。該分析技術(shù)需樣量少、檢測(cè)限低，尤其適用于藥物在機(jī)體代謝等因素的作用下所產(chǎn)生的分解物或代謝物的結(jié)構(gòu)研究和量的變化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]鑒于上述，本發(fā)明的目的在于提供一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的測(cè)定方法。該方法將固相萃取前處理技術(shù)與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)聯(lián)合使用，成功排除了復(fù)雜生物樣品體系中雜質(zhì)對(duì)青蒿琥酯及二氫青蒿素含量測(cè)定的干擾，能準(zhǔn)確的同時(shí)測(cè)定動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素的含量。
[0008]本發(fā)明目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其步驟是:
a.精密稱取青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品、二氫青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得內(nèi)標(biāo)溶液；b.取動(dòng)物空腹靜脈血漿，加入上述a得到的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40-50s，得血漿樣品；取給藥后的動(dòng)物血漿，加入內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40-50s，得供試樣品；
c.將b步驟所得的血漿樣品和供試樣品分別加入2倍體積乙腈沉淀蛋白，渦旋震蕩30-40s，離心，取上清液；
d.固相萃取小柱處理(WatersOasis HLB固相萃取小柱),加Iml甲醇和Iml IM醋酸沖洗，再用Iml甲醇沖洗，備用；
e.將c步驟得到的上清液分別上處理好的固相萃取小柱，用IM醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)眉状蓟蛞译嫒芙猓吹脴?biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液，備用；
f.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)測(cè)定供試品溶液，測(cè)定條件用碳十八烷基鍵合硅膠固定相色譜柱，流動(dòng)相A:B=60:40 (v:v)，其中A:乙腈；B:純凈水(lmmol乙酸銨，0.1%甲酸，0.02%乙酸)，流速0.4mL.mirT1，電噴霧離子化(ESI)模式，正(+ )離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，毛細(xì)管出口端電壓:45v ;碰撞能量:25v ；deta EMV+:200v ;干燥氣體(N2)流速101^1^11-1，噴霧器30?8丨，氣體溫度3501:，毛細(xì)管電壓4000 V。
[0009]g.將e得到的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液按f所述色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，得到總離子流圖和質(zhì)譜圖，測(cè)定峰面積。分別以青蒿琥酯和二氫青蒿素濃度(X)為橫坐標(biāo)，青蒿琥酯、二氫青蒿素分別與內(nèi)標(biāo)青蒿素的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，計(jì)算待測(cè)物濃度。
[0010]上所述固相萃取小柱填料可為鍵合硅膠填料，或?yàn)榫酆衔镂教盍希驗(yàn)槭挤聪嗵盍稀?br> [0011]上述固相萃取小柱填料為由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體聚合成的大孔共聚物填料。
[0012]上述動(dòng)物可為羊，牛。
[0013]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明采用對(duì)供試樣品應(yīng)用固相萃取技術(shù)處理后，復(fù)雜生物樣品中微量的被測(cè)組分萃取完全并達(dá)到了很好的富集，得到了高純度和濃縮的分離物。方法可靠，回收率在95%左右，RSD(%)小于3%，滿足分析檢測(cè)要求。
[0014]2、本發(fā)明采用將HPLC-MS/MS技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)，被測(cè)組分檢測(cè)靈敏度提高，檢測(cè)限低(青蒿琥酯最低檢測(cè)線為0.1 ng.mL-1，二氫青蒿素最低檢測(cè)線為Ing ?mL—1)，青蒿琥酯、青蒿素及二氫青蒿素峰分離度好，峰形好，分析時(shí)間短(9分鐘之內(nèi)完成整個(gè)檢測(cè))，需樣量少(僅需I μ I )，溶劑用量少，成本低，含量測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性、穩(wěn)定性好。
[0015]3、二氫青蒿素是青蒿琥酯在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，采用本發(fā)明的方法，能方便快捷、準(zhǔn)確的同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中原藥青蒿琥酯及其代謝物二氫青蒿素的含量，為青蒿琥酯在動(dòng)物體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性研究奠定了方法學(xué)基礎(chǔ)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0016]圖1為本發(fā)明空白血漿總離子流圖(TIC圖)。
[0017]圖2為本發(fā)明青蒿琥酯、二氫青蒿素及青蒿素在血漿樣品中的總離子流圖(TIC圖)。
[0018]圖3為本發(fā)明青蒿琥酯母離子掃描圖。
[0019]圖4為本發(fā)明二氫青蒿素母離子掃描圖。
[0020]圖5為本發(fā)明青蒿素母離子掃描圖。
[0021]
【具體實(shí)施方式】
[0022]下面列舉實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，該實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而對(duì)本發(fā)明并沒(méi)有限制。
[0023]實(shí)施例:
本發(fā)明使用的青蒿琥酯納米乳(主要成份為青蒿琥酯，輔料為油酸乙酯、吐溫-80、正丁醇、超純水，產(chǎn)地:蘭州)是蘭州畜牧與獸藥研究所自主研制的新型抗動(dòng)物寄生蟲(chóng)獸藥(國(guó)家發(fā)明專利號(hào):ZL 200810150303.4)，在獸醫(yī)臨床上主要用于治療牛羊泰勒焦蟲(chóng)病，療效顯著。
[0024]1、儀器
Agilent 1200/6410 Triple Quad LC/MSMS ;C18 色譜柱(大連依利特公司);0ASiS HLB固相萃取柱；美國(guó)Millipore水純化系統(tǒng)；KL512型氮吹儀(北京康林科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品)；Thermo離心機(jī)，渦旋振蕩儀(Heros ΒΙ0);針筒式微孔濾膜過(guò)濾器(上海興亞凈化材料廠產(chǎn)品，孔徑0.22 μ m)。
[0025]2、藥品與試劑
青蒿琥酯納米乳(蘭州畜牧與獸藥研究所自主研制)；青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品、青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品、二氫青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；冰乙酸(分析純，上海中美化學(xué)試劑有限公司)；乙腈(色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)；甲醇(分析純，天津市百世化工有限公司)；乙酸乙酯(色譜純，國(guó)藥集團(tuán))；乙酸銨(分析純，國(guó)藥集團(tuán))；甲酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán))；1-氯丁烷(分析純，國(guó)藥集團(tuán))。
[0026]3、分析條件
3.1液相色譜條件:0DS色譜柱(250 X 4.6mm, 5 μ m);流動(dòng)相A:B=60:40 (v:v),其中A:乙腈；B:純凈水(lmmol乙酸銨，0.1%甲酸,0.02%乙酸),流速0.4mL.mirT1 ,進(jìn)樣量I μ L,柱溫室溫。
[0027]3.2質(zhì)譜條件:電噴霧離子化(ESI)模式，檢測(cè)離子為正(+ )離子，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，干燥氣體(N2)流速101^1^11-1，噴霧器30?8丨，氣體溫度3501:，毛細(xì)管電壓4000 V。
[0028]4、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
4.1對(duì)照品溶液:精密稱取青蒿琥酯、二氫青蒿素各lmg，分別置于IOOmL棕色容量瓶中，用色譜甲醇配制成濃度為10 μ g.ml/1的儲(chǔ)備液。分別取該兩種儲(chǔ)備液置于IOmL容量瓶中，用甲醇配制成濃度為lug-mr1的青蒿琥酯和I μ g.ml/1 二氫青蒿素的對(duì)照品混合溶液。由于其在室溫下暴露在空氣中不穩(wěn)定，置于_80°C冰箱保存。
[0029]4.2內(nèi)標(biāo)溶液:精密稱取青蒿素lmg，置于IOOmL棕色容量瓶中，用色譜甲醇配制成濃度為10 μ g -mL-1的儲(chǔ)備液。取該儲(chǔ)備液置于IOmL容量瓶中，加甲醇配制成I μ g -mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液。[0030]5、血樣采集及處理
5.1動(dòng)物給藥
取健康成年小尾寒羊I只，分別在給藥前稱重、禁飼。取1.5%的青蒿琥酯納米乳，通過(guò)肌肉注射給藥，給藥劑量為5mg/kg體重。
[0031]5.2空白血漿的采集
在給藥前使用一次性EDTA真空采血管頸靜脈采集小尾寒羊血液，采血量為5 ml，離心10 min，分離血漿，吸取上清液，得得空白血漿，于離心管中保存在-20 1:待分析。
[0032]5.3血漿樣品的采集
在給藥后30min使用一次性EDTA真空采血管頸靜脈采集小尾寒羊血液，采血量為5ml，離心10 min，分離血漿，吸取上清液，得血漿樣品，于另一離心管中保存在-80 °C待分析。
[0033]6、空白血漿溶液和標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液的制備
取固相萃取小柱(Waters Oasis HLB固相萃取小柱),加Iml甲醇和Iml IM醋酸沖洗，再用Iml甲醇沖洗，備用。
[0034]精密吸取ImL空白血漿，加入1ml乙腈，渦旋震蕩30s，離心10min，取上清液上處理好的固相萃取小柱，用IM醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈?，在干燥的提取物中加?50mL甲醇復(fù)溶，得空白血漿溶液，備用。
[0035]精密吸取ImL空白血漿，加入10 μ L對(duì)照品混合溶液，再加入10 μ L內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，加入1ml乙腈，渦旋震蕩30s，離心10min，取上清液上處理好的固相萃取小柱，用IM醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈桑诟稍锏奶崛∥镏屑尤?50mL甲醇復(fù)溶，得標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液，備用。
[0036]7、供試品溶液的制備
精密吸取Iml血漿樣品，加入10 μ I內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，加入1ml乙腈，渦旋震蕩30s，離心lOmin，取上清液上處理好的固相萃取小柱，用IM醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈桑诟稍锏奶崛∥镏屑尤?50mL甲醇復(fù)溶，備用。
[0037]8、標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢測(cè)限
分別配置0.5，I, 2，4，10，12，16 μ g -πι-1的青蒿琥酯和二氫青蒿素的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按步驟“6”操作下進(jìn)行處理，按“3”項(xiàng)下色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。青蒿琥酯和二氫青蒿素濃度(X)為橫坐標(biāo)，以青蒿琥酯、二氫青蒿素分別與內(nèi)標(biāo)青蒿素的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。
[0038]分別配置不同濃度的青蒿琥酯和二氫青蒿素的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按步驟“6”操作下進(jìn)行處理，按“3”項(xiàng)下色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，分別測(cè)定青蒿琥酯和二氫青蒿素的最低檢測(cè)限(S/N=3)。
[0039]9、精密度與準(zhǔn)確度
配制高、中、低三種濃度的青蒿琥酯和二氫青蒿素標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，處理方法同“6”，得到三種濃度(5、40、100 ng.πι-1)的血漿樣品溶液，按” 3”色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，三種濃度樣品在I天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣5次，連續(xù)5天進(jìn)樣，進(jìn)行濃度測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)變異系數(shù)、日間變異系數(shù)。[0040]10、回收率
取Iml血漿樣品(n=6)，分別精密加入高、中、低三種濃度為5、40、100 ng.ml—1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1ml，處理方法同“6”，按”3”色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，分別計(jì)算低、中、高3種濃度的回收率。
[0041]11、含量測(cè)定
分別吸取空白血漿溶液、標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液和供試品溶液各10μ 1，用0.22μπ?微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)HPLC-MS/MS分析。
[0042]12、結(jié)果
12.1方法專屬性
空白血漿溶液、標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液和供試品溶液按“3”所述述色譜質(zhì)譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，得到的總離子流圖見(jiàn)圖1-2。從圖中可以看出血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)及其他雜質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定，AS、DHA、AR三者分離良好，保留時(shí)間分別為5.2、6.2、7.8min，分析時(shí)間短。
[0043]標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品溶液按“3”所述述色譜質(zhì)譜條件分別進(jìn)行測(cè)定，得到的質(zhì)譜圖見(jiàn)圖3-5。從圖中分析得，青蒿琥酯、二氫青蒿素和青蒿素在ESI正離子模式下形成的質(zhì)子化分子是[M+Na] +，母離子分別為[407.2]+、[307.2]+和[305.2]+。
[0044]12.2線性關(guān)系考察
分別以青蒿琥酯、二氫青蒿素與青蒿素峰面積比值為縱坐標(biāo)，青蒿琥酯和二氫青蒿素濃度為橫坐標(biāo)做線性回歸，得青蒿琥酯回歸方程y=0.0467χ-0.0162，R2=0.9990 ;二氫青蒿素回歸方程y=0.0068x+0.073，R2=0.9992。線性范圍為5_160ng.mL—1，青蒿琥酯最低檢測(cè)線為0.1 ng.mL—1 ,二氫青蒿素最低檢測(cè)線為Ing.mL'
[0045]12.3精密度與準(zhǔn)確度
對(duì)高、中、低三個(gè)濃度的血漿樣品的日內(nèi)、日間精密度進(jìn)行考察，結(jié)果表明，在本試驗(yàn)條件下該方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0046]表1青蒿琥酯、二氫青蒿素在血漿樣品中測(cè)定的精密度
【權(quán)利要求】
1.一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其步驟是: a.精密稱取青蒿琥酯標(biāo)準(zhǔn)品、二氫青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得標(biāo)準(zhǔn)品溶液；精密稱取青蒿素標(biāo)準(zhǔn)品，置于棕色容量瓶中，用色譜甲醇或乙腈配制得內(nèi)標(biāo)溶液； b.取動(dòng)物空腹靜脈血漿，加入上述a得到的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40-50S，得血漿樣品；動(dòng)物給藥后取靜脈血漿，加入上述a得到的內(nèi)標(biāo)溶液，渦旋混合40_50s,得供試樣品； c.將b步驟所得的血漿樣品和供試樣品分別加入2倍體積乙腈沉淀蛋白，渦旋震蕩30-40s，離心，取上清液； d.固相萃取小柱處理為取固相萃取小柱，加Iml甲醇和ImlIM醋酸沖洗，再用Iml甲醇沖洗，備用； e.將c步驟得到的上清液分別上處理好的固相萃取小柱，用IM醋酸和20%甲醇醋酸溶液沖洗，最后用乙酸乙酯和1-氯丁烷(V:V=2:3)洗脫，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)眉状蓟蛞译嫒芙猓吹脴?biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液，備用； f.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MS/MS)測(cè)定供試品溶液，測(cè)定條件用碳十八烷基鍵合硅膠固定相色譜柱，流動(dòng)相A:B=60:40 (v:v)，其中A:乙腈；B:純凈水(lmmol乙酸銨，0.1%甲酸，0.02%乙酸)，流速0.4mL.mirT1，電噴霧離子化(ESI)模式，正(+ )離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，毛細(xì)管出口端電壓:45v ;碰撞能量:25v ；deta EMV+:200v ;干燥氣體(N2)流速10L.MIN-1，噴霧器30?8丨，氣體溫度3501:，毛細(xì)管電壓4000 V ； g.將e得到的標(biāo)準(zhǔn)血漿溶液和供試品溶液按f所述色譜質(zhì)譜條件進(jìn)樣，得到總離子流圖和質(zhì)譜圖，測(cè)定峰面積，分別以青蒿琥酯和二氫青蒿素濃度(X)為橫坐標(biāo)，青蒿琥酯、二氫青蒿素分別與內(nèi)標(biāo)青蒿素的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，計(jì)算待測(cè)物濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱填料可為鍵合硅膠填料，或?yàn)榫酆衔镂教盍?，或?yàn)槭挤聪嗵盍稀?br> 3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述固相萃取小柱為Waters Oasis HLB固相萃取小柱，填料為由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體聚合成的大孔共聚物填料。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物血漿中青蒿琥酯及二氫青蒿素含量的方法，其特征在于，所述動(dòng)物可為羊，牛。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103940918SQ201310024689
【公開(kāi)日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2013年1月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月23日
【發(fā)明者】李冰, 張繼瑜, 周緒正, 牛建榮, 魏小娟, 李金善, 李劍勇, 楊亞軍, 劉希望, 張 杰 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所