專利名稱：趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑中活性成分的質(zhì)量檢測方法，具體來說，涉及的是一種治療黃褐斑的中藥膠囊制劑中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明具體涉及的治療黃褐斑的中藥膠囊制劑即趕黃祛斑膠囊，由趕黃草835g和丹參300g制成稠膏后，經(jīng)加入適當(dāng)?shù)妮o料制備得到，其具體制備方法及用途已記載于公開號(hào)為CN101700276的發(fā)明專利中，該制劑具有退黃、化瘀、祛斑的作用，臨床上擬用于治療由于肝氣郁結(jié)引起的女性黃褐斑的治療。趕黃祛斑膠囊中含有趕黃草和丹參，經(jīng)研究證明，趕黃草的主要有效成分一槲皮素具有祛斑、抗炎、抗過敏，增強(qiáng)皮膚毛細(xì)血管通透性功能；丹參中的主要成分有丹參酮II Λ和丹酚酸B，其中:丹參酮II 4具有抗炎的功能，丹酚酸B具有強(qiáng)大的抗氧化的作用。在對趕黃祛斑膠囊的分析中也發(fā)現(xiàn)本品中的主要有效成分為槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B。通過查詢目前國內(nèi)外的相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，僅有單獨(dú)測定趕黃草制劑中的槲皮素或單獨(dú)測定丹參制劑中的丹參酮II八和丹酚酸B的報(bào)道，還沒有關(guān)于對由趕黃草、丹參兩味藥組成的復(fù)方制劑中的槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B進(jìn)行檢測的文獻(xiàn)報(bào)道。為了更好的控制趕黃祛斑膠囊的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性，有必要建立一套完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以更好的控制本品的質(zhì)量。趕黃祛斑膠囊的制備工藝中主要涉及的稠膏制備方法為:丹參300g，加90%乙醇回流1.5小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至稠膏；丹參藥渣與趕黃草835g，加水煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.15 1.18 (60 65°C)的清膏，冷卻，力口乙醇使含醇量達(dá)60%，攪拌，靜置，濾過，沉淀用60%乙醇洗滌三次，合并洗液與濾液，回收乙醇并濃縮成相對密度1.30 1.32的稠膏；合并上述兩種稠膏，備用。取稠膏，加入適量淀粉、微晶纖維素、滑石粉、硬脂酸鎂等，混勻，制粒干燥后分裝或浸膏直接干燥后打成粉末直接分裝，即得。這里得到的其實(shí)是膠囊的內(nèi)容物，經(jīng)過分析可以得知，整個(gè)生產(chǎn)工藝中質(zhì)量控制比較簡單和粗糙，可能會(huì)因?yàn)樯a(chǎn)批次的不一樣，或者就算是同一批次也會(huì)生產(chǎn)出含量各不相同、品質(zhì)不均勻的廣品。如果在內(nèi)容物制備完成或者在內(nèi)容物制備過程中，就對內(nèi)容物進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔫b別和含量檢測，這無疑對產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定和療效穩(wěn)定起著至關(guān)重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對目前國內(nèi)還沒有上市的藥物制劑趕黃祛斑膠囊，提供一種可以全面鑒別及檢測該試劑有效成分之一槲皮素的質(zhì)量檢測方法，確保了該藥物制劑的安全有效。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下: 趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:以槲皮素為對照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物為展開劑，甲苯:乙酸乙酯:甲酸v/v/v=5:2:1，用薄層色譜法進(jìn)行鑒另O，并以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物為流動(dòng)相，磷酸水溶液:甲醇v/v=54:46，用高效液相色譜法測定含量。所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)為流動(dòng)相，檢測波長為370nm，理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。所述磷酸水溶液的濃度為質(zhì)量百分比。所述薄層色譜法鑒別的具體步驟如下:
A供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸干，殘?jiān)尤?ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；
B對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素對照品適量，以甲醇制成每Iml中含0.5mg的對照品溶液；
C薄層色譜法鑒別:分別吸取供試品溶液與對照品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開后取出，晾干，噴以顯色劑，并在105°C加熱2-20分鐘后取出，置365nm的紫外燈下檢視，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜中顯相同顏色的斑點(diǎn)。所述含量檢測的具體步驟如下:
A對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇水溶液制成每Iml中含
0.04mg的對照品溶液；
B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置錐形瓶內(nèi)，加入80%鹽酸甲醇溶液50ml，精密稱定后在水浴條件下回流1.0小時(shí)，取出，放冷，再次精密稱定并采用80%甲醇水溶液補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
C液相色譜測定含量:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。步驟B所述80%鹽酸甲醇溶液由甲醇3份、鹽酸I份混合而成。發(fā)明人對鑒別方法和含量測定方法的可行性進(jìn)行了驗(yàn)證研究；具體實(shí)驗(yàn)資料如下:
1、槲皮素的薄層鑒別研究 方法:薄層色譜法
樣品和對照品處理方法:取趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物約30g，精密稱定，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸干，殘?jiān)尤?ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品適量，以甲醇制成每Iml中含0.5mg的對照品溶液。薄層板:硅膠G薄層板，
展開劑:甲本:乙Ife乙酷:甲Ife =5:2: I,
顯色劑:3%三氯化鋁乙醇溶液
顯色方法:噴以顯色劑。在105°C加熱2-20分鐘后取出。結(jié)果:在擬定條件下，樣品中有與對照品斑點(diǎn)呈現(xiàn)一致性的斑點(diǎn)，并且申請人通過改變薄層展開劑確認(rèn)了斑點(diǎn)純度。2、槲皮素的高效液相含量測定研究2.1儀器與實(shí)驗(yàn)藥
Alltech-426型高效液相，CQX25-06超聲波清洗器。甲醇為色譜級(jí)，磷酸為分析純。槲皮素對照品為中國藥品生物制品檢定所提供，趕黃祛斑膠囊由成都力思特藥物研究有限公司提供。2.2方法與結(jié)果
色譜條件:
色譜柱:月旭 XB-C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流動(dòng)相:甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)
檢測波長:370nm 流速:1.0ml/min 2.3溶液制備
2.3.1精密稱取槲皮素對 照品適量，加80%甲醇水溶液制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液液。2.3.2供試品溶液制備:稱取供試品0.5g，精密稱定，置錐形瓶內(nèi)，加50ml 80%鹽酸甲醇溶液，精密稱定后在水浴條件下回流1.0小時(shí)，取出，放冷，再精密稱定并采用80%甲醇水溶液補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn):分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果槲皮素的保留時(shí)間為15.627min,槲皮素峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板以槲皮素峰計(jì)算為7654。.2.5線性關(guān)系:分別精密吸取2.2.1項(xiàng)下對照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值A(chǔ)對進(jìn)樣量C進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=647847C+11214 r=0.9995，結(jié)果表明槲皮素進(jìn)樣量在0.1-0.8ng范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。2.6精密度研究，精密吸取2.2.1項(xiàng)下對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得槲皮素峰面積RSD為1.02%，表明儀器精密度良好。2.7穩(wěn)定性研究，精密吸取2.2.2項(xiàng)下對照品溶液20 μ 1，分別在O，2,4,6,8小時(shí)注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，測得槲皮素峰面積RSD為0.82%，表明供試品溶液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密吸取2.2.2項(xiàng)下樣品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得槲皮素峰面積RSD為0.92%，表明儀器精密度良好。2.9回收率實(shí)驗(yàn):精密稱取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3組，每組3份，分別緊密添加槲皮素對照溶液適量，在、按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測定峰面積，計(jì)算回收率，回收率為98.25%，RSD=0.99%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本品具有良好的回收率。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:采用薄層色譜法對槲皮素進(jìn)行鑒別以及采用高效液相色譜法對槲皮素的含量進(jìn)行檢測，方法更科學(xué)，檢測手段更先進(jìn)，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替趕黃草投料生產(chǎn)的情況，從而保證該藥品的質(zhì)量，保證人民用藥安全有效。本發(fā)明的另一優(yōu)點(diǎn)是，通過對槲皮素的鑒別和含量檢測，可以在膠囊填充之前就進(jìn)行質(zhì)量控制，以便生產(chǎn)出質(zhì)量合格的產(chǎn)品，同時(shí)，也可以為市售的流通產(chǎn)品提供一種科學(xué)合理的檢測方法，以便從生產(chǎn)和流通領(lǐng)域控制產(chǎn)品質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明技術(shù)方案僅限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1 槲皮素的鑒別
取趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物適量研細(xì)，稱取粉末3.0g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸干，殘?jiān)尤?ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品適量，用甲醇制成每Iml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取上述兩種溶液各3 μ 1，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱2-20分鐘后取出，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例2 槲皮素的含量測定
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)為流動(dòng)相；檢測波長為370nm ;理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇水溶液制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液。取趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物粉末約
0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加50ml 80%鹽酸甲醇溶液(配制方法:取甲醇3份，鹽酸溶液I份混合而成)，精密稱定后在水浴條件下回流1.0小時(shí)，取出，放冷，再次精密稱定并采用80%甲醇水溶液補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
權(quán)利要求
1.趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:以槲皮素為對照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物為展開劑，甲苯:乙酸乙酯:甲酸v/v/v=5:2:1，用薄層色譜法進(jìn)行鑒別，并以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物為流動(dòng)相，磷酸水溶液:甲醇v/v=54:46，用高效液相色譜法測定含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比46:54的甲醇-0.4%磷酸水溶液為流動(dòng)相，檢測波長為370nm，理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算不低于2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述薄層色譜法鑒別的具體步驟如下: A供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸干，殘?jiān)尤?ml甲醇使溶解，作為供試品溶液； B對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素對照品適量，以甲醇制成每Iml中含0.5mg的對照品溶液； C薄層色譜法鑒別:分別吸取供試品溶液與對照品溶液，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開后取出，晾干，噴以顯色劑，并在105°C加熱2-20分鐘后取出，置365nm的紫外燈下檢視，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品色譜中顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:所述含量檢測的具體步驟如下: A對照品溶液的制備:精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇溶液制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置于錐形瓶內(nèi)，加入80%鹽酸甲醇溶液50ml，精密稱定后在水浴條件下回流1.0小時(shí)，取出，放冷，再次精密稱定并采用80%甲醇溶液補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測定含量:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，其特征在于:步驟B所述80%鹽酸甲醇溶液由甲醇3份、鹽酸I份混合而成。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質(zhì)量檢測方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。以槲皮素為對照品，趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物為供試品，分別通過薄層色譜法、高效液相色譜法進(jìn)行鑒別和含量檢測。高效液相色譜條件為用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸水溶液(4654)為流動(dòng)相，檢測波長為370nm，理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。本發(fā)明采用薄層色譜法、高效液相色譜法分別對槲皮素進(jìn)行鑒別和含量檢測，方法更科學(xué)，檢測手段更先進(jìn)，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替趕黃草投料生產(chǎn)的情況，從而確保了該藥品的質(zhì)量，保證了用藥的安全有效。
文檔編號(hào)G01N30/06GK103115974SQ201310029038
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者張玲, 張熠, 趙力科 申請人:成都力思特藥物研究有限公司