專利名稱：趕黃祛斑膠囊中丹參酮Ⅱ_A的含量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑中活性成分的含量檢測方法，具體來說，涉及的是一種治療黃褐斑的中藥膠囊制劑中丹參酮II A的含量檢測方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
本發(fā)明具體涉及的治療黃褐斑的中藥膠囊制劑即趕黃祛斑膠囊，由趕黃草835g和丹參300g制成稠膏后，經(jīng)加入適當(dāng)?shù)妮o料制備得到，其具體制備方法及用途已記載于公開號為CN101700276的發(fā)明專利中，該制劑具有退黃、化瘀、祛斑的作用，臨床上擬用于治療由于肝氣郁結(jié)引起的女性黃褐斑的治療。趕黃祛斑膠囊中含有趕黃草和丹參，經(jīng)研究證明，趕黃草的主要有效成分一槲皮素具有祛斑、抗炎、抗過敏，增強皮膚毛細血管通透性功能；丹參中的主要成分有丹參酮II Λ和丹酚酸B，其中:丹參酮II 4具有抗炎的功能，丹酚酸B具有強大的抗氧化的作用。在對趕黃祛斑膠囊的分析中也發(fā)現(xiàn)本品中的主要有效成分為槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B。通過查詢目前國內(nèi)外的相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)，僅有單獨測定趕黃草制劑中的槲皮素或單獨測定丹參制劑中的丹參酮II八和丹酚酸B的報道，還沒有關(guān)于對由趕黃草、丹參兩味藥組成的復(fù)方制劑中的槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B進行檢測的文獻報道。為了更好的控制趕黃祛斑膠囊的質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性，有必要建立一套完整的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以更好的控制本品的質(zhì)量。趕黃祛斑膠囊的制備工藝中主要涉及的稠膏制備方法為:丹參300g，加90%乙醇回流1.5小時，濾過，濾液回收乙醇至稠膏；丹參藥渣與趕黃草835g，加水煎煮2次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.15 1.18 (60 65°C)的清膏，冷卻，力口乙醇使含醇量達60%，攪拌，靜置，濾過，沉淀用60%乙醇洗滌三次，合并洗液與濾液，回收乙醇并濃縮成相對密度1.30 1.32的稠膏；合并上述兩種稠膏，備用。取稠膏，加入適量淀粉、微晶纖維素、滑石粉、硬脂酸鎂等，混勻，制粒干燥后分裝或浸膏直接干燥后打成粉末直接分裝，即得。這里得到的其實是膠囊的內(nèi)容物，經(jīng)過分析可以得知，整個生產(chǎn)工藝中質(zhì)量控制比較簡單和粗糙，可能會因為生產(chǎn)批次的不一樣，或者就算是同一批次也會生產(chǎn)出含量各不相同、品質(zhì)不均勻的廣品。如果在內(nèi)容物制備完成或者在內(nèi)容物制備過程中，就對內(nèi)容物進行適當(dāng)?shù)蔫b別和含量檢測，這無疑對產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定和療效穩(wěn)定起著至關(guān)重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對目前國內(nèi)還沒有上市的藥物制劑趕黃祛斑膠囊，提供一種可以全面檢測該制劑有效成分之一丹參酮II A的含量檢測方法，確保了該藥物制劑的安全有效。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的具體技術(shù)方案如下:趕黃祛斑膠囊中丹參酮IIA的含量檢測方法，其特征在于:以丹參酮IIA為對照品，以甲醇的水溶液為流動相，水:甲醇v/v=25:75，用高效液相色譜法測定。所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(75:25)為流動相，檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按丹參酮II A峰計算應(yīng)不低于2000。所述含量檢測方法的具體步驟如下:
A對照品溶液的制備:精密稱取丹參酮11八對照品適量，加甲醇制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液；
B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇，精密稱定重量后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，即得；
C液相色譜測定:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。發(fā)明人對含量測定方法的可行性進行了驗證研究；具體實驗資料如下:
丹參酮II A的高效液相含量測定研究
方法:高效液相色譜法
1.儀器與實驗藥
Alltech-426型高效液相，CQX25-06超聲波清洗器。甲醇，乙腈為色譜級。丹參酮II A對照品為中國藥品生物制品檢定所提供，趕黃祛斑膠囊由成都力思特藥物研究有限公司提供。2.方法與結(jié)果
2.1色譜條件:
色譜柱:月旭 XB-C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流動相:甲醇-水(75:25)
檢測波長:270nm 流速:1.0ml/min
2.2溶液制備
2.2.1精密稱取丹參酮II A對照品適量，加甲醇溶液制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液液。2.2.2供試品溶液制備:稱取供試品約0.5g，精密稱定，置錐形瓶內(nèi)，加入50ml純甲醇溶液，精密稱定后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇溶液補足失去的重量，搖勻，濾過。即得。2.3系統(tǒng)適用性實驗:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結(jié)果丹參酮II Α的保留時間為17.021min，丹參酮IIa峰與前后色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板以丹參酮IIa計算為6754。2.4線性關(guān)系:分別精密吸取2.2.1項下對照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面 積，以峰面積積分值A(chǔ)對進樣量C進行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=98754C-9008 r=0.9997，結(jié)果表明丹參酮IIa進樣量在0.1-0.8ng范圍內(nèi)峰面積與進樣量有良好的線性關(guān)系。2.5精密度研究，精密吸取2.2.1項下對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復(fù)進樣6次，測得丹參酮IIa峰面積RSD為0.87%，表明儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性研究，精密吸取2.2.2項下對照品溶液20 μ 1，分別在O, 2,4,6,8小時注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，測得丹參酮II A峰面積RSD為1.09%,表明供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。2.7重復(fù)性實驗精密吸取2.2.2項下樣品溶液20μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重復(fù)進樣6次，測得丹參酮IIa峰面積RSD為0.89%，表明儀器精密度良好。2.8回收率實驗:精密稱取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3組，每組3份，分別緊密添加丹參酮II A對照溶液適量，在、按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，按照上述色譜條件測定峰面積，計算回收率，回收率為99.85%，RSD=0.99%。實驗結(jié)果表明本品具有良好的回收率。本發(fā)明的優(yōu)點是:采用高效液相色譜法對丹參酮II A的含量進行檢測，方法更科學(xué)，檢測手段更先進，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替丹參投料生產(chǎn)的情況，從而保證該藥品的質(zhì)量，保證人民用藥安全有效。本發(fā)明的另一優(yōu)點是，通過對丹參酮II Α含量檢測，可以在膠囊填充之前就進行質(zhì)量控制，以便生產(chǎn)出質(zhì)量合格的產(chǎn)品，同時，也可以為市售的流通產(chǎn)品提供一種科學(xué)合理的檢測方法，以便從生產(chǎn)和流通領(lǐng)域控制產(chǎn)品質(zhì)量。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明技術(shù)方案僅限于以下實施例。實施例1丹參酮II Α的含量測定
用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(75:25)為流動相；檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按丹參酮II A峰計算應(yīng)不低于2000。精密稱取丹參酮II A對照品適量,力口甲醇溶解并制成每Iml中含0.04mg的溶液，作為對照品溶液。稱取本品內(nèi)容物粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶內(nèi)，加50ml純甲醇溶液，精密稱定重量后超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇溶液補足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。實施例2
趕黃祛斑膠囊中丹參酮II A的含量檢測方法，以丹參酮II A為對照品，以甲醇的水溶液為流動相，水:甲醇ν/ν=25:75，用高效液相色譜法測定。所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水(75:25)為流動相，檢測波長為270nm ;理論板數(shù)按丹參酮II A峰計算應(yīng)不低于2000。所述含量檢測方法的具體步驟如下:
A對照品溶液的制備:精密稱取丹參酮11八對照品適量，加甲醇制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液；
B供試品溶液的制備:稱取趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇，精密稱定重量后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，即得；
C液相色譜測定:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
權(quán)利要求
1.趕黃祛斑膠囊中丹參酮II八的含量檢測方法，其特征在于:以丹參酮IIA為對照品，以甲醇的水溶液為流動相，水:甲醇v/v=25:75，用高效液相色譜法測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中丹參酮IIa的含量檢測方法，其特征在于:所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比75:25的甲醇-水為流動相，檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮II A峰計算不低于2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中丹參酮IIa的含量檢測方法，其特征在于:具體步驟如下: A對照品溶液的制備:精密稱取丹參酮11八對照品適量，加甲醇制成每Iml中含0.04mg的對照品溶液； B供試品溶液的制備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物0.5g，置于錐形瓶內(nèi)，加入50ml甲醇，精密稱定重量后，超聲提取30分鐘，取出，放冷，再精密稱定并采用甲醇溶液補足失去的重量，搖勻，濾過，即得； C液相色譜測定:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種趕黃祛斑膠囊中丹參酮ⅡA的含量檢測方法，屬于藥品質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以丹參酮ⅡA為對照品，趕黃祛斑膠囊內(nèi)容物為供試品，通過高效液相色譜法進行的含量測定。高效液相色譜條件為以甲醇-水(7525)為流動相，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，檢測波長為270nm，理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計算應(yīng)不低于2000。本發(fā)明采用高效液相色譜法對丹參酮ⅡA的含量進行檢測，方法更科學(xué)，檢測手段更先進，定性定量更準(zhǔn)確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕采用其他藥材代替丹參投料生產(chǎn)的情況，從而確保了該藥品的質(zhì)量，保證了用藥的安全有效。
文檔編號G01N30/02GK103105443SQ20131002941
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者張玲, 張熠, 趙力科 申請人:成都力思特藥物研究有限公司