一種土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法，包括以下步驟：安裝分離裝置，將土樣放入；將裝有土樣的分離裝置放入承載容器，在承載容器中加入溫度為42℃～48℃、濃度為4.8％～5.2％鹽水，鹽水的液面沒過分離裝置中篩網(wǎng)面上的棉紙；將承載容器放置于溫度為42℃～48℃的溫箱或水浴箱中，放置1.5～2小時；取出分離裝置，將承載容器中的液體倒出，自然沉淀15～20分鐘；倒去上清液，得到含有鉤蟲幼蟲的沉淀液。采用本發(fā)明的技術方案，能提高鉤蚴回收率，并能抑制自由線蟲活性，減少沉淀液中自由線蟲的數(shù)量。本發(fā)明的方法實用有效、結果可靠，同時操作簡便、方便鑒別。
【專利說明】一種土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法。
【背景技術】
[0002]寄生蟲病是嚴重影響我國人民身體健康的重要公共衛(wèi)生問題之一，而鉤蟲病又是其中危害較為嚴重的寄生蟲病。鉤蟲的幼蟲和成蟲都可對人體造成嚴重損害。
[0003]鉤蟲幼蟲在體外發(fā)育包括桿狀蝴和絲狀蝴的階段，其中感染期幼蟲為絲狀蝴(以下簡稱鉤蝴)。鉤蟲的生活史包括幼蟲在外界土壤中的發(fā)育和在人體內的發(fā)育兩個階段。鉤蟲卵隨感染者糞便排出體外，在溫度適宜的情況下經(jīng)5-6天發(fā)育成為感染期幼蟲，與人體皮膚或粘膜接觸后進入人體，隨后經(jīng)在肺泡、支氣管、小腸等不同組織器官中發(fā)育成為成蟲。人們使用新鮮的糞便施肥或隨地大便，使得鉤蟲卵在適宜的環(huán)境條件下發(fā)育成感染期幼蟲。
[0004]根據(jù)鉤蟲生活史，土壤鉤蝴污染情況可作為人群鉤蟲感染監(jiān)測工作的一項重要指標。2011年全國土源性線蟲病(主要指鉤蟲病、蛔蟲病、鞭蟲病)監(jiān)測方案中已將土壤鉤蝴污染情況納入監(jiān)測內容中。
[0005]20世紀90年代起，針對土壤鉤蝴調查的方法主要有紗墊法、銅絲篩分離法、5%鹽水分離法、棉紙自來水分離等方法。這些方法操作復雜、費時。由于土壤中自由生活的線蟲(以下簡稱自由線蟲)較多，棉紙自來水分離法不能有效去除自由線蟲。5%鹽水分離方法雖然在一定程度上抑制了自由線蟲的活力，但在分離用紙和篩網(wǎng)規(guī)格上各地區(qū)各不相同。同時，實驗中發(fā)現(xiàn)部分土壤樣本分離后沉淀液中存在絮狀沉淀的現(xiàn)象。
[0006]目前的分離方法均具有不足之處。因此，需要一種準確、便捷、適合現(xiàn)場監(jiān)測工作的土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法。
【發(fā)明內容】
[0007]為此，本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種結果可靠、操作簡便、方便鑒別的土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法，以克服現(xiàn)有技術存在的不足。
[0008]為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下的技術方案:
[0009]一種土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法，包括以下步驟:
[0010]安裝分離裝置，將土樣放在分離裝置中的棉紙上；
[0011]將裝有土樣的分離裝置放入承載容器，在承載容器中加入溫度為42°C?48°C、濃度為4.8%?5.2%鹽水，鹽水的液面沒過分離裝置中篩網(wǎng)面上的棉紙；
[0012]將承載容器放置于溫度為42V?48°C的溫箱或水浴箱中，放置1.5?2小時；
[0013]取出分離裝置，將承載容器中的液體倒出，將液體自然沉淀15?20分鐘；
[0014]倒去上清液，得到含有鉤蟲幼蟲的沉淀液。
[0015]采用上述的分離方法，所述分離裝置中篩網(wǎng)面的目數(shù)為10?30目。
[0016]采用上述的分離方法，所述棉紙的厚度為38?40 μ m,密度為12.8?16.0g/m2,所述棉紙的使用層數(shù)為3層。
[0017]采用上述的分離方法，所述土樣采自于早上十點前且近期未噴過殺蟲劑的表層2?3cm的土壤。
[0018]采用上述的分離方法，將承載容器在溫箱或水浴箱中放置1.5小時。
[0019]采用上述的分離方法，將承載容器中的液體倒出后自然沉淀15分鐘。
[0020]采用上述的分離方法，所述沉淀液為50ml。
[0021]采用上述技術方案，本發(fā)明的分離方法能使鉤蝴回收率提高，并能抑制自由線蟲活性，減少或去除沉淀液中自由線蟲的數(shù)量。此外，本發(fā)明的分離方法操作簡便、方便鑒別。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0022]下面結合附圖和【具體實施方式】對本發(fā)明進行詳細說明:
[0023]圖1為本發(fā)明分離方法的流程圖。
【具體實施方式】
[0024]分離土壤中的鉤蟲幼蟲，采用以下分離方法:
[0025]早上10點前選取近期未噴過殺蟲劑的土壤采樣點，用土鏟取土壤表層2?3cm土樣，在500ml塑料燒杯中定量至300ml刻度處(約300g)后放入保鮮袋；
[0026]組裝好分離裝置，在分離裝置中的棉紙上倒入300g 土樣，用大鑷子將顆粒較大的土壓細，去除石子、草等雜質后，將土鋪展均勻；
[0027]將裝有土樣的分離裝置放入承載容器中，并在容器中加入溫度為42°C?48°C、濃度為4.8%?5.2%的鹽水，鹽水的液面沒過分離裝置中篩網(wǎng)面上方的棉紙即可，篩網(wǎng)面的目數(shù)為10?30目；
[0028]將承載容器置于溫度為42V?48°C的溫箱或水浴箱中，放置1.5小時；
[0029]取出分離裝置，將承載容器中的液體倒入三角量杯，自然沉淀15分鐘；
[0030]緩緩棄去上清液(傾倒過程不要讓液體回流),傾倒至底部留50ml液體；
[0031]將液體混勻，連同全部沉淀物倒入平皿，解剖鏡下進行觀察后，顯微鏡下鑒別鉤蝴。
[0032]如果分離后沉淀中含有絮狀沉淀不便觀察，應采取如下步驟進行第二次分離:
[0033]將分離裝置放入承載容器，在容器中加入溫度為42°C?48°C、濃度為4.8%?5.2%的鹽水，至鹽水的液面沒過分離裝置中篩網(wǎng)面的棉紙為止。
[0034]在分離裝置中倒入第一次分離后的全部沉淀液，將承載容器置42°C?48°C溫箱或水浴箱中，放置20min (無需泥土)。
[0035]取出分離裝置，將承載容器中的液體倒入三角量杯，自然沉淀15分鐘。
[0036]緩緩棄去上清液(傾倒過程不要讓液體回流),傾倒至底部留50ml液體。
[0037]將液體混勻，連同全部沉淀物倒入平皿，解剖鏡下進行觀察后，顯微鏡下鑒別鉤蝴。
[0038]本發(fā)明的分離方法，所述的棉紙選定以樹皮、棉花作為紙漿材料，采用傳統(tǒng)手工制作方法制造，具體參數(shù)見表I。
[0039]表I棉紙參數(shù)規(guī)格范圍
【權利要求】
1.一種分離土壤中鉤蟲幼蟲的分離方法，包括以下步驟: 安裝分離裝置，將土樣放在分離裝置中的棉紙上； 將裝有土樣的分離裝置放入承載容器，在承載容器中加入溫度為42°c~48°C、濃度為4.8%~5.2%鹽水，鹽水的液面沒過分離裝置中篩網(wǎng)面上的棉紙； 將承載容器放置于溫度為42°C~48°C的溫箱或水浴箱中，放置1.5~2小時； 取出分離裝置，將承載容器中的液體倒出，自然沉淀15~20分鐘； 倒去上清液，得到含有鉤蟲幼蟲的沉淀液。
2.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于所述分離裝置中篩網(wǎng)面的目數(shù)為10~30目。
3.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于所述棉紙的厚度為38~40μ m，密度為 12.8 ~16.0g/m2。
4.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于所述棉紙的使用層數(shù)為3層。
5.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于所述土樣采自于早上十點前且近期未噴過殺蟲劑的表層2~3cm的土壤。
6.根據(jù)權利要求1 所述的分離方法，其特征在于將承載容器在溫箱或水浴箱中放置1.5小時。
7.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于將承載容器中的液體倒出后自然沉淀15分鐘。
8.根據(jù)權利要求1所述的分離方法，其特征在于所述沉淀液為50ml。
【文檔編號】G01N1/34GK104020034SQ201310064485
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2013年3月1日 優(yōu)先權日:2013年3月1日
【發(fā)明者】王國飛, 陳穎丹, 王聚君, 周長海 申請人:中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所