專利名稱：抗人n-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2雙抗體夾心elisa試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種ELISA試劑盒，具體涉及一種抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2雙抗體夾心ELISA試劑盒及其應(yīng)用，屬于病毒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶(ppGalNAc-T)家族是催化蛋白質(zhì)肽鏈上絲氨酸或蘇氨酸殘基以合成O-糖鏈的起始酶之一,在腫瘤標(biāo)志抗原(Tn antigen)合成中扮演重要角色。其中ppGalNAc-T2負(fù)責(zé)血清IgAI鉸鏈區(qū)的糖基化(參見(jiàn)J Biol Chem，2003, 278
(8):5613)，近年來(lái)研究表明，ppGalNAc-T2在多種人腫瘤組織中存在異常表達(dá)，例如在鱗狀癌變組織中ppGalNAc-T2表達(dá)升高；在結(jié)腸癌中發(fā)現(xiàn)了 ppGalNAc-T2表達(dá)的異常升高；郭向紅應(yīng)用RT PCR法研究白血病細(xì)胞株k562與SH1-1糖基轉(zhuǎn)移酶mRNA表達(dá)的差異而探討了白血病細(xì)胞株K562與SH1-1糖基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的差異，發(fā)現(xiàn)在K562和SH1-1中存在ppGalNAc-T2較高水平的表達(dá)(參見(jiàn):郭向紅等中國(guó)血液流變學(xué)雜志2005; 15(1):32);重要的是針對(duì)這些發(fā)現(xiàn)可以推斷，這些存在于腫瘤中ppGalNAc-T2的異常表達(dá)情況可成為潛在的腫瘤診斷依據(jù)。來(lái)自日本的Takuhiro Kohsaki等用兔抗人ppGalNAc_T2多克隆抗體檢測(cè)結(jié)腸癌細(xì)胞及組織，發(fā)現(xiàn)PpGalNAc_T2存在明顯高表達(dá)(參考:J Gastroenterol 2000 35:840)；丹麥的Ulla Mandel研究小組就成功制備了鼠抗人ppGalNAc_T2單克隆抗體并命名為UH4(IgGl)，可用于間接免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫熒光流式細(xì)胞分析法和免疫共沉淀法，該研究小組還對(duì)該抗體作了較為細(xì)致深入的研究(參考=Glycobiology 19999(1):43)。另一方面，應(yīng)用雙抗體夾心ELISA試劑盒的方法對(duì)各種蛋白質(zhì)等大分子的檢測(cè)，受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于其余測(cè)試方法，具有操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)。應(yīng)用雙抗體夾心ELISA法對(duì)腫瘤患者的糖基轉(zhuǎn)移酶篩查已經(jīng)有相關(guān)報(bào)道，如像巖藻糖轉(zhuǎn)移酶、唾液酸轉(zhuǎn)移酶等ELISA試劑盒已經(jīng)用于腫瘤患者血清的篩查，均表現(xiàn)出了良好的應(yīng)用價(jià)值與前景。但是尚未見(jiàn)到有關(guān)于抗人ppGalNAc-T2雙抗體夾心ELISA試劑盒以及利用其對(duì)抗人ppGalNAc-T2蛋白體外檢測(cè)的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種特異性強(qiáng)、精確度高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)快速的抗人ppGalNAc-T2雙抗體夾心ELISA試劑盒，并公開(kāi)了其應(yīng)用方法。為達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2雙抗體夾心ELISA試劑盒，包括洗滌液、樣品稀釋液、顯色液、終止液，其特征在于，它還包括:
(I)包被抗體的酶標(biāo)板:以抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2單克隆抗體為包被抗體，用包被液將單抗稀釋到lOPg/ml，每孔加入lOOPL，4°C冰箱中過(guò)夜，用洗滌液洗滌2 4次，再向酶標(biāo)板中加入封閉液，ΙΟΟμ ν孔，37°C下反應(yīng)I 2h，洗滌液洗滌2 4次制得；所述封閉液為1%牛血清白蛋白、5%牛血清白蛋白、1%馬血清、5%馬血清或者5%脫脂奶
粉；
(2)檢測(cè)抗體:兔源抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體；
(3)酶標(biāo)抗體:辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔酶標(biāo)抗體；
(4)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照蛋白:包括標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白，標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照大腸桿菌菌體蛋白。上述技術(shù)方案中，所述抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2單克隆抗體由保藏編號(hào)為CCTCC NO:C2010106的雜交瘤細(xì)胞株LW-5F3分泌制得，制備方法已被中國(guó)發(fā)明專利CN102061287B 公開(kāi)。上述技術(shù)方案中，所述抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體的制備方法為:將抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白與弗氏完全佐劑進(jìn)行1:1混合進(jìn)行純化，選擇2.0 2.5 kg之間的大白兔進(jìn)行四次免疫，時(shí)間分別為第I天，第14天，第28天和第42天，第4次免疫后一周進(jìn)行頸動(dòng)脈采血，分離血清，即得兔源抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體。上述技術(shù)方案中，所述包被液的制備方法為:1.59g Na2C0jP2.93g NaHCO3加水充分溶解后，加去離子水定容為1L。本發(fā)明還公開(kāi)了上述雙抗體夾心ELISA試劑盒在抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白體外檢測(cè)中的應(yīng)用， 包括以下步驟:
(1)加待檢樣品:取試劑盒中的包被抗體的酶標(biāo)板，向其中加入經(jīng)過(guò)處理的待檢樣品，IOOPL/孔，同時(shí)分別設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，37°C下反應(yīng)45 75min，洗滌液洗滌2 4次；
(2)添加檢測(cè)抗體:取試劑盒中的檢測(cè)抗體，與樣品稀釋液按1: 100的體積比稀釋后加入到上述酶標(biāo)板中，ΙΟΟμ ν孔，37°C下反應(yīng)25 35min，洗滌液洗滌2 4次；
(3)添加酶標(biāo)抗體:取試劑盒中的酶標(biāo)抗體，用洗滌液按照1: 500的比例進(jìn)行稀釋并混勻，IOOPL/孔，37°C下反應(yīng)45 75min，以洗滌液洗滌2 4次；
(4)顯色:加入顯色液，ΙΟΟμ ν孔,在室溫下顯色10 15min,用終止液終止顯色；
(5)測(cè)光密度值:用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)量，測(cè)光密度值。本發(fā)明中洗滌液、樣品稀釋液、顯色液、終止液屬于現(xiàn)有技術(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)需要配置，本發(fā)明優(yōu)選:
洗滌液-M NaCl 8g、KH2PO4 0.27g、Na2HPO4 1.42g、KCl 0.2g，用 800mL 雙蒸水溶解后加入0.5mL Tween-20，充分混勻，調(diào)整PH至7.2，定容至IOOOmL ；
樣品稀釋液-M NaCl 8g、KH2PO4 0.27g、Na2HPO4 1.42g、KCl 0.2g，用 800mL 雙蒸水溶解后加入IOg標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白BSA，充分溶解混勻，調(diào)整PH至7.2，定容至IOOOmL ；
顯色液包括底物液A和底物液B，其中底物液A:取3，3’，5’，5-四甲基聯(lián)苯二胺0.2g，無(wú)水乙醇IOOmL,加雙蒸水定容至IOOOmL ;底物液B:取Na2HPO4 14.6g，檸檬酸9.3g，0.75%過(guò)氧化氫尿素溶液6.4mL,加雙蒸水800mL,調(diào)節(jié)PH至5.2,補(bǔ)充雙蒸水定容至IOOOmL ；終止液:2M H2SO4溶液。
本發(fā)明利用抗人ppGalNAc_T2單克隆抗體和抗人ppGalNAc_T2多克隆抗體，制備抗人PpGalNAc-T2雙抗體夾心ELISA試劑盒；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法，用該試劑盒定量檢測(cè)患者血清中抗人ppGalNAc-T2的含量，尤其是白血病患者。通過(guò)對(duì)不同類(lèi)型白血病患者血清中抗人PpGalNAc-T2的含量，并與正常人血清抗人ppGalNAc-T2含量比較，借助這些差異給白血病早期發(fā)現(xiàn)提供一個(gè)重要的參考依據(jù)。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn):
1.本發(fā)明采用抗人ppGalNAc-T2單克隆抗體和抗人ppGalNAc_T2多克隆抗體作為試劑盒的主要試劑，有力地排除了多種非特異性的干擾，特異性強(qiáng)，并且能夠檢測(cè)同一抗原的不同表位，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。2.本發(fā)明的檢測(cè)儀器簡(jiǎn)單，操作步驟簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)成本低，適用于大量樣品的檢測(cè)，易于推廣普及。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
實(shí)施例一:兔源抗人ppGalNAc-T2多克隆抗體的制備
用中國(guó)發(fā)明專利CN102061287B公開(kāi)的重組抗人ppGalNAc_T2蛋白(lmg/mL)作為免疫原，取該抗原100 μ L，與弗氏完全佐劑進(jìn)行1:1混合。在旋渦振蕩儀上將抗原和佐劑完全混合形成穩(wěn)定的乳劑(油包水)，將該乳劑在兔子雙肩周?chē)钠つw下進(jìn)行皮下注射和后大腿進(jìn)行肌肉注射，每個(gè)區(qū)域大約用1/4的免疫原，這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應(yīng)答?？乖⑸湟郧靶枰占恍┱Ｑ澹糜跈z測(cè)抗體時(shí)作為陰性對(duì)照。注射四天后進(jìn)行兔耳動(dòng)脈取血，取血量3ml。首次免疫用FCA，以后都用FIA。采用初次免疫的注射方法，間隔2周后再于上述部位選不同點(diǎn)注射(不要選擇臨近位點(diǎn)，否則潰瘍愈合不好)。每次免疫的抗原量相同，免疫四次。可在初次免疫一周后，兔耳緣靜脈取血ImL檢測(cè)抗體效價(jià)。采用ELISA方法，具體操作步驟:取免疫兔血清和正常兔血清各50μ L作為待檢抗體，檢測(cè)前一天將ppGalNAc-T2重組蛋白用包被液按1:20稀釋以100 μ L每孔包被至酶標(biāo)板中，4°C過(guò)夜包被，然后用0.01 PBS洗滌液洗滌3次，然后封閉孵育2h，經(jīng)洗滌后加入100 μ L (1:500)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔二抗，顯色15min后終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀測(cè)0D450，以陰陽(yáng)孔OD比值作陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，P/N > 2.1為陽(yáng)性，其中P為待檢樣品的OD值，N為陰性對(duì)照的OD值。最后一次免疫后取血可以采用頸動(dòng)脈放血，具體操作如下:家兔仰臥于兔架上固定頭部，用紗布固定四肢，頭部略放低以暴露頸部，剃毛并消毒皮膚，沿頸部中線用手術(shù)刀切開(kāi)皮膚約10cm，分離皮下結(jié)締組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌，用直頭止血鉗分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動(dòng)脈后用彎頭眼科鑷使之游離，剝離神經(jīng)和結(jié)締組織，于動(dòng)脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠(yuǎn)心及近心端，結(jié)扎遠(yuǎn)心端的絲線，近心端的動(dòng)脈用血管夾夾住，用小拇指墊在血管下，用尖頭眼科手術(shù)剪在兩根絲線間的動(dòng)脈璧上剪一小口(勿剪斷)，插入塑料放血管，再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫，松開(kāi)止血鉗，使血液流入容器中。將血樣室溫靜置2h，然后3000rpm離心20min,吸取上層透明血清即可，將血清分裝，_80°C保存。實(shí)施例二:酶標(biāo)抗體的制備 取40ml兔血清置于燒杯中，加入40ml 0.0lM pH7.2 PBS混勻，然后逐滴加入80ml飽和硫酸銨溶液，邊加邊攪拌，室溫靜置30分鐘，3000rpm離心30分鐘，去上清留沉淀。在沉淀中加入80mlPBS溶解沉淀，再加飽和硫酸銨溶液達(dá)到33%飽和度，邊加邊攪拌，室溫靜置30分鐘，3000rpn離心20分鐘去上清留沉淀，如此反復(fù)2 3次。再將沉淀物溶于12ml水中.對(duì)0.07M pH6.3磷酸鹽緩沖液4°C透析，直至外液與奈氏試劑或I %的BaCl反應(yīng)呈陰性為IP。透析完畢，3000rpm離心5分鐘，去上清即為粗提的IgG溶液(酶標(biāo)抗體)。實(shí)施例三:酶標(biāo)板反應(yīng)均一性檢測(cè)
隨機(jī)選擇3塊酶標(biāo)板，按照I μ g/ml兔的IgM (G)UOO μ L/孔加入，4°C過(guò)夜，棄去進(jìn)行洗滌，重復(fù)洗滌3次，將酶標(biāo)板拍干，加入牛血清封閉液(10%)200 μ L/孔進(jìn)行37°C封閉I小時(shí)，洗去封閉液(同上)，然后100 μ L/孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔抗體(1:500)，37°C孵育lh，洗滌；然后加入100 μ L/孔顯色液避光15min，加入50 μ L/孔終止液，酶標(biāo)儀測(cè)OD值，計(jì)算各孔間變異系數(shù)，檢測(cè)酶標(biāo)板均一性。實(shí)施例四:包被單抗最佳包被濃度和多抗最佳工作濃度確定
用包被液將純化的抗人PpGalNAc-T2單克隆抗體進(jìn)行稀釋，比例依次為:1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400、1:10000、1:12800、1:25600 ;分別包被板過(guò)夜(4°C )。用含1%胎牛血清的PBS稀釋液將純化的兔多抗按照1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600、1:3200、1:6400、1:10000 進(jìn)行稀釋，按照方陣進(jìn)行加樣。用 L929-ppGalNAc_T2 細(xì)胞裂解蛋白做陽(yáng)性樣品、L929-M0CK做陰性對(duì)照，進(jìn)行夾心ELISA，每組設(shè)3復(fù)孔。比較各組的OD平均值，按照陰陽(yáng)性比值P/N > 2.1確定最適單抗包被濃度和最適多抗?jié)舛?。?shí)施例五:封閉液和封閉時(shí)間優(yōu)化
以最適單抗?jié)舛?°C過(guò)夜包被酶標(biāo)板，洗滌后，分別以1% BSA、5%BSA、1%馬血清、5%馬血清、5%脫脂奶粉5種不同的封閉液封閉，200 μ I/孔，37°C封閉2小時(shí)，進(jìn)行雙抗夾心ELISA，比較各組陰陽(yáng)性樣品的OD值，以確定不同封閉液的封閉效果。以最適單抗?jié)舛?°C過(guò)夜包被酶標(biāo)板，洗滌后，200 μ I/孔加入最佳封閉液37°C封閉，封閉時(shí)間選擇0.5、1.0、1.5、2、3小時(shí)，分別進(jìn)行ELISAdIU OD值。比較各組陰陽(yáng)性樣品的OD值，以確定最佳封閉時(shí)間。實(shí)施例六:抗體稀釋液優(yōu)化
以最適單抗?jié)舛群桶粭l件包被酶標(biāo)板，經(jīng)過(guò)封閉后加入陰陽(yáng)性樣品，多抗和酶標(biāo)二抗分別三各比例稀釋液1:100、1:500和1:3000稀釋，第I組用I % BSA PBST，第2組用5 %，第3組用5%馬血清PBST，37〃C下反應(yīng)2小時(shí)后，經(jīng)洗滌，加底物顯色15分鐘終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀測(cè)定0D450值，以確定最佳抗體稀釋液。實(shí)施例七:檢測(cè)極限確定
用5pg/ml的單抗包被好的酶標(biāo)板，將臨床血清進(jìn)行1:10、1:50,1 =IOOU:500、1:1000、1:2000,1:5000,1:10000的8個(gè)稀釋度進(jìn)行ELISA測(cè)定，同時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照。實(shí)施例八:重復(fù)性試驗(yàn)鑒定
板內(nèi)重復(fù)性驗(yàn)證:用單抗包被板置于37°C lh，然后4°C過(guò)夜，洗滌后封閉，在同一塊板內(nèi)檢測(cè)6份不同的樣品:3份陽(yáng)性對(duì)照品和3份陰性樣品，每份樣本重復(fù)3孔，按照優(yōu)化的最佳條件進(jìn)行ELISA檢測(cè)，計(jì)算同一份樣本0D450值的變異系數(shù)CV%，用來(lái)評(píng)價(jià)板內(nèi)檢測(cè)樣品的重復(fù)性。
板間重復(fù)性驗(yàn)證:用6塊包被好的酶標(biāo)板在相同條件下，不同時(shí)間點(diǎn)重復(fù)檢測(cè)6份樣品:3份陽(yáng)性對(duì)照品和3份陰性樣品，每份樣本重復(fù)3孔，按照優(yōu)化的最佳條件進(jìn)行ELISA檢測(cè)，計(jì)算同一份樣本0D450值的變異系數(shù)CV%，用來(lái)評(píng)價(jià)板內(nèi)檢測(cè)樣品的重復(fù)性。以CV%低于10%，且無(wú)顯著性差異為臨界判斷標(biāo)準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2雙抗體夾心ELISA試劑盒，包括洗滌液、樣品稀釋液、顯色液、終止液，其特征在于，它還包括: (1)包被抗體的酶標(biāo)板:以抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2單克隆抗體為包被抗體，用包被液將單抗稀釋到lOPg/ml，每孔加入lOOPL，4°C冰箱中過(guò)夜，用洗滌液洗滌2 4次，再向酶標(biāo)板中加入封閉液，ΙΟΟμ ν孔，37°C下反應(yīng)I 2h，洗滌液洗滌2 4次制得； 所述封閉液為1%牛血清白蛋白、5%牛血清白蛋白、1%馬血清、5%馬血清或者5%脫脂奶粉； (2)檢測(cè)抗體:兔源抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體； (3)酶標(biāo)抗體:辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔酶標(biāo)抗體； (4)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照蛋白:包括標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白，標(biāo)準(zhǔn)陰性對(duì)照大腸桿菌菌體蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗體夾心ELISA試劑盒，其特征在于:所述抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2單克隆抗體由保藏編號(hào)為CCTCC NO:C2010106的雜交瘤細(xì)胞株LW-5F3分泌制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗體夾心ELISA試劑盒，其特征在于:所述抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體的制備方法為，將抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白與弗氏完全佐劑進(jìn)行1:1混合進(jìn)行純化，選擇2.0 2.5Kg之間的大白兔進(jìn)行四次免疫，時(shí)間分別為第I天，第14 天，第28天和第42天，第4次免疫后一周進(jìn)行頸動(dòng)脈采血，分離血清，即得兔源抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2多克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙抗體夾心ELISA試劑盒，其特征在于，所述包被液的制備方法為:1.59g Na2CO3和2.93g NaHCO3加水充分溶解后，加去離子水定容為1L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1 4中任意一項(xiàng)所述的雙抗體夾心ELISA試劑盒在抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2蛋白體外檢測(cè)中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟: (1)加待檢樣品:取試劑盒中的包被抗體的酶標(biāo)板，向其中加入經(jīng)過(guò)處理的待檢樣品，IOOPL/孔，同時(shí)分別設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，37°C下反應(yīng)45 75min，洗滌液洗滌2 4次； (2)添加檢測(cè)抗體:取試劑盒中的檢測(cè)抗體，與樣品稀釋液按1: 100的體積比稀釋后加入到上述酶標(biāo)板中，ΙΟΟμ ν孔，37°C下反應(yīng)25 35min，洗滌液洗滌2 4次； (3)添加酶標(biāo)抗體:取試劑盒中的酶標(biāo)抗體，用洗滌液按照1: 500的比例進(jìn)行稀釋并混勻，IOOPL/孔，37°C下反應(yīng)45 75min，以洗滌液洗滌2 4次； (4)顯色:加入顯色液，ΙΟΟμ ν孔,在室溫下顯色10 15min,用終止液終止顯色； (5)測(cè)光密度值:用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)量，測(cè)光密度值。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種抗人N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2雙抗體夾心ELISA試劑盒及其應(yīng)用，所述試劑盒包括洗滌液、樣品稀釋液、顯色液、終止液、包被抗體的酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、酶標(biāo)抗體以及標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照蛋白；其檢測(cè)方法為將待檢樣品放入包被抗體的酶標(biāo)板，再依次添加捕獲抗體、酶標(biāo)抗體反應(yīng)后加顯色劑顯色，測(cè)OD值。本發(fā)明采用單克隆抗體和多克隆抗體作為試劑盒的主要試劑，有力地排除了多種非特異性的干擾，特異性強(qiáng)，并且能夠檢測(cè)同一抗原的不同表位，使檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確；本發(fā)明的檢測(cè)儀器簡(jiǎn)單，操作步驟簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)成本低，適用于大量樣品的檢測(cè)，易于推廣普及。
文檔編號(hào)G01N33/577GK103163300SQ20131006596
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2013年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月1日
發(fā)明者吳士良, 劉春亮, 林丹丹, 華東, 徐嵐, 姜智 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)