羅丹明b的快速檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，包括如下步驟：（1）提取：稱取待測(cè)樣品1份，加入4-10倍重量體積比的二次蒸餾水超聲提取1-5min，提取液移至離心管，離心，將上清液取出備用；（2）凈化：上清液加入2-5倍重量體積比的有機(jī)溶劑萃取，萃取完全后將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移到離心管中，離心，再將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移至試管中，吹干；（3）檢測(cè)往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤脒m量二次蒸餾水，震蕩后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入10-100ul納米粒子溶膠及適量無機(jī)鹽絮凝劑，混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明具有無機(jī)溶劑使用少，且適合實(shí)際樣品的快速檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】羅丹明B的快速檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]羅丹明B(Rhodamine B)，又名玫瑰紅B、堿性玫瑰精，俗稱花粉紅，分子式為C28H31C1N203，分子量為479.28。是一類工業(yè)堿性染料，曾用作食品添加劑，但根據(jù)國(guó)際癌癥研究署(IARC)化學(xué)品致癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)表明:攝取、吸入以及皮膚接觸羅丹明B均會(huì)造成急性和慢性的中毒傷害，有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，該物質(zhì)吸入時(shí)有致癌作用，可能引起誘變或致畸，因其潛在的致癌和致突變性，于2008年被衛(wèi)生部列入第一批《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》，嚴(yán)禁在食品中使用。1993年起，歐美等國(guó)家和地區(qū)就已禁止將羅丹明B染料用于食品加工，日本也禁止使用該物質(zhì)在食品中使用。但羅丹明B具有價(jià)格低廉、色澤紅艷、穩(wěn)定性強(qiáng)等特點(diǎn)，常被不法商家在辣椒、花椒、辣椒面、辣椒油等調(diào)味品中用作替代食品添加劑的著色劑，以次充好，以假冒真，欺騙消費(fèi)者，給人們的飲食安全帶來極大隱患，而且此類食品安全事件在近幾年層出不窮，如2011年重慶羅丹明B食品安全事件、2012年長(zhǎng)沙羅丹明B染色辣椒事件等。開展食品中羅丹明B的檢測(cè)顯得十分必要。目前，在我國(guó)羅丹明B的檢測(cè)還沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，也沒有快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，針對(duì)羅丹明B的分析檢測(cè)，僅有國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布SN/T2430 - 2010《進(jìn)出口食品中羅丹明B的檢測(cè)方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。在該標(biāo)準(zhǔn)中，樣品提取后采用經(jīng)凝膠色譜凈化系統(tǒng)(GPC)凈化，用液相色譜一熒光檢測(cè)器或液相色譜一質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測(cè)定和確證，但凝膠色譜凈化系統(tǒng)價(jià)格昂貴，且操作復(fù)雜、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，很難在基層單位普及，更無法用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)；而在羅丹明B快速檢測(cè)方法方面，目前市面上也有根據(jù)固相萃取原理所開發(fā)的羅丹明B快速檢測(cè)方法，但該方法主要是根據(jù)肉眼觀察固相萃取柱上的紅色條帶進(jìn)行判斷是否含有羅丹明B，易出現(xiàn)假陽性，準(zhǔn)確度低，檢測(cè)靈敏度也不高。
[0003]定量檢測(cè)痕量羅丹明6G的方法申請(qǐng)?zhí)?CN201010591599.2 一種利用拉曼光譜儀定量檢測(cè)痕量羅丹明6G的方法，包括以下步驟:采用交流電化學(xué)沉積法制備多個(gè)銀納米線陣列:以硝酸銀/硼酸混合水溶液為電解液向AAO模板的孔洞中限域沉積銀納米線，形成銀納米線陣列；制備銀納米顆粒，并分別與不同濃度的羅丹明6G溶液混合，分別滴在制備好的銀納米線陣列上，形成SERS增強(qiáng)“三明治”體系；待“三明治”體系自然干燥后，在拉曼光譜儀上對(duì)其進(jìn)行拉曼光譜測(cè)試，得到不同濃度羅丹明6G溶液的SERS譜；計(jì)算不同濃度羅丹明6G溶液SERS譜的特征峰強(qiáng)度，得到羅丹明6G的SERS強(qiáng)度-濃度的關(guān)系曲線，此曲線是作為羅丹明6G定量檢測(cè)的依據(jù)；將未知濃度的羅丹明6G溶液SERS強(qiáng)度與羅丹明6G的SERS強(qiáng)度-濃度關(guān)系曲線進(jìn)行對(duì)照，以得出羅丹明6G溶液的濃度。
[0004]但該方法測(cè)的是純羅丹明6G。而不是混入食品中的羅丹明B。由于在實(shí)際食物樣品中，食品加工企業(yè)在考慮到風(fēng)味、口感、保質(zhì)期等因素往往會(huì)添加各種食用添加劑及色素，這些基質(zhì)的存在會(huì)對(duì)混入食品中的羅丹明B的檢測(cè)照成巨大干擾，如果不經(jīng)過任何前處理而直接采用檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的方法進(jìn)行檢測(cè)，是無法檢測(cè)出混入食品中的低濃度羅丹明B。本方法在考慮了上述問題之后，結(jié)合簡(jiǎn)便的液液萃取前處理方法及SERS檢測(cè)方法實(shí)現(xiàn)了混入食物中羅丹明B的快速檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題。
[0006]本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
[0007]一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，包括如下步驟:
[0008](I)、提取:稱取待測(cè)樣品I份，加入4-10倍重量體積比的二次蒸餾水超聲提取l-5min,提取液移至離心管，離心，將上清液取出備用；
[0009](2)、凈化:上清液加入2-5倍重量體積比的有機(jī)溶劑萃取,萃取完全后將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移到離心管中，離心，再將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移至試管中，吹干；
[0010](3)、檢測(cè):往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤脒m量二次蒸餾水，震蕩后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1-1OOul納米粒子溶膠及適量無機(jī)鹽絮凝劑，混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
[0011]其中，步驟(I)所述的待測(cè)樣品包括辣椒(干辣椒、新鮮辣椒)、花椒、辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬、辣椒面、辣椒油等市面上有可能被添加羅丹明B的食品。
[0012]其中，步驟(I)的離心優(yōu)選在8000r/min-12000r/min下離心l_5min。
[0013]其中，步驟(2)有機(jī)溶劑優(yōu)選為弱極性，其包括正丁醇、四氫呋喃、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、乙醚、異丙醚、正丁醚、三氯乙烯、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳、環(huán)己烷、正己烷、石油醚等中的至少一種。在以上溶劑中優(yōu)選環(huán)己烷或己烷。
[0014]其中，步驟(2)的離心優(yōu)選在8000r/min-12000r/min下離心l_8min。
[0015]其中，步驟(2)的吹干采用氮?dú)饣蚨栊詺怏w。優(yōu)選采用氮?dú)狻?br> [0016]其中，所述的納米粒子溶膠包括裸露的納米粒子或是SHINERS納米粒子。其中，裸露的納米粒子為拉曼光譜檢測(cè)領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，通常為金納米粒子、銀納米粒子或是銅納米粒子。SHINERS粒子(殼層隔絕納米粒子增強(qiáng)拉曼光譜，Shell-1solatednanoparticle-enhanced Raman spectroscopy, SHINERS)由廈門大學(xué)田中群等(Nature,464 (7287) =392-395,2010.03.18)發(fā)明，在金屬納米粒子表面包覆一外殼材料，外殼材料為二氧化硅，氧化鋁、氮化硅或二氧化鈦等惰性材料。在該論文中，為無針孔的SHINERS粒子。本發(fā)明使用的另一 SHINERS納米粒子為在此基礎(chǔ)上發(fā)展的帶針孔的納米粒子。
[0017]其中，所述的無機(jī)鹽絮凝劑包括碘化鉀、碘化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、氯化鋁、氯化鋇、硫酸鉀、硫酸鈉、硫酸鎂、磷酸鉀、磷酸鈉、碳酸鉀或碳酸鈉等溶液中的至少一種。
[0018]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下:
[0019]1、目前羅丹明B的檢測(cè)中，在辣椒前處理方法上，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)是利用凝膠色譜凈化，成本高；而商業(yè)公司常用的辣椒前處理方法主要是采用過固相萃取柱(SPE)方法，需經(jīng)過活化-上樣-清洗-解吸等步驟，要使用多種有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑使用量都在20-30ml左右，相對(duì)本發(fā)明方法，有機(jī)溶劑使用量較多，且為了獲得較好的分離效果，在過柱時(shí)需控制流速，操作繁瑣。本發(fā)明利用簡(jiǎn)單的液液萃取代替過SPE柱進(jìn)行羅丹明B的凈化、提純。只需采用簡(jiǎn)單的液液萃取，并使用單一、少量的有機(jī)溶劑(僅需2-5ml)，操作簡(jiǎn)便，容易上手，子的制備
；為外殼的殼層納米粒子的溶膠，且二氧化I"孔，該溶膠的溶劑為水。
欠溶液，攪拌條件下加熱至沸騰，然后加入寺微沸40111111，溶液由淡黃色逐漸變?yōu)樽丶t勺為55 ± 1011111的金納米粒子溶膠。取30此VI的氨基硅烷水溶液，室溫下攪拌15111111，然I，攪拌2分鐘后轉(zhuǎn)移至溫度約為981的水二氧化娃包金核殼結(jié)構(gòu)納米粒子溶膠，其中
殼層納米粒子的金納米粒子內(nèi)核表面包覆
品；12011111 81111161-8 ；圖 2)然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖2.[0040]實(shí)施例3圖3為湖南某質(zhì)監(jiān)局實(shí)際檢測(cè)的樣品；55nmAu-shiners ；
[0041]1、提取(待測(cè)樣品:辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬)
[0042]稱取辣椒末、辣椒粉或豆瓣醬Ig (精確至0.0lg)于25mL燒杯中，加入5mL 二次水(提取劑)超聲lmin。浸泡液移至5mL離心管,在10000r/min下離心lmin,將上清液取出待凈化。
[0043]2、凈化
[0044]將上清液移至25mL四氟分液漏斗中，加入3mL正己烷萃取。萃取時(shí)先振蕩2min，靜置I分鐘后再振蕩約2min。靜置Imin后將正己烷轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，在10000r/min下離心5min，將正己烷層轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)獯蹈伞?br> [0045]3、檢測(cè)
[0046]往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤?50ul 二次水，震蕩20s后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1ul金屬溶膠(實(shí)施例1制備的shiners粒子)及無機(jī)鹽絮凝劑1ullM KI混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖 3.[0047]實(shí)施例4圖4為湖南某質(zhì)監(jiān)局實(shí)際檢測(cè)的樣品；120nm Ag檢測(cè)；
[0048]1、(待測(cè)樣品:辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬)
[0049]稱取辣椒末、辣椒粉或豆瓣醬Ig (精確至0.0lg)于25mL燒杯中，加入5mL 二次水(提取劑)超聲lmin。浸泡液移至5mL離心管,在10000r/min下離心lmin,將上清液取出待凈化。
[0050]2、凈化
[0051]將上清液移至25mL四氟分液漏斗中，加入3mL正己烷萃取。萃取時(shí)先振蕩2min，靜置I分鐘后再振蕩約2min。靜置Imin后將正己烷轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，在10000r/min下離心5min，將正己烷層轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)獯蹈伞?br> [0052]3、檢測(cè)
[0053]往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤?50ul 二次水，震蕩20s后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1ul金屬溶膠(120nm裸露的Ag納米粒子，現(xiàn)有技術(shù))及無機(jī)鹽絮凝劑1ullM KI混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖4.[0054]實(shí)施例5為湖南某質(zhì)監(jiān)局實(shí)際檢測(cè)的樣品；120nm Ag檢測(cè)；
[0055]1、提取(待測(cè)樣品:辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬)
[0056]稱取辣椒末、辣椒粉或豆瓣醬Ig (精確至0.0lg)于25mL燒杯中，加入5mL 二次水(提取劑)超聲lmin。浸泡液移至5mL離心管,在10000r/min下離心lmin,將上清液取出待凈化。
[0057]2、凈化
[0058]將上清液移至25mL四氟分液漏斗中，加入3mL正己烷萃取。萃取時(shí)先振蕩2min，靜置I分鐘后再振蕩約2min。靜置Imin后將正己烷轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，在10000r/min下離心5min，將正己烷層轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)獯蹈伞0059]3、檢測(cè)
[0060]往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤?50ul 二次水，震蕩20s后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1ul金屬溶膠(120nm裸露的Au納米粒子，現(xiàn)有技術(shù))及無機(jī)鹽絮凝劑1ullM KI混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖5.[0061]實(shí)施例6 (圖6為湖南某質(zhì)監(jiān)局實(shí)際檢測(cè)的樣品；55nm Au檢測(cè))
[0062]1、提取(待測(cè)樣品:辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬)
[0063]稱取辣椒末、辣椒粉或豆瓣醬Ig (精確至0.0lg)于25mL燒杯中，加入5mL 二次水(提取劑)超聲lmin。浸泡液移至5mL離心管,在10000r/min下離心lmin,將上清液取出待凈化。
[0064]2、凈化
[0065]將上清液移至25mL四氟分液漏斗中，加入3mL正己烷萃取。萃取時(shí)先振蕩2min，靜置I分鐘后再振蕩約2min。靜置Imin后將正己烷轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，在10000r/min下離心5min，將正己烷層轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)獯蹈伞?br> [0066]3、檢測(cè)
[0067]往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤?50ul 二次水，震蕩20s后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1ul金屬溶膠(55nm裸露的Au納米粒子，現(xiàn)有技術(shù))及無機(jī)鹽絮凝劑1ullM KI混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖6.[0068]實(shí)施例7 (辣椒空白，圖7 )
[0069]1、提取
[0070]干辣椒剪碎，稱取Ig (精確至0.0lg)于25mL燒杯中，加入5mL 二次水(提取劑)超聲lmin。浸泡液移至5mL離心管,在10000r/min下離心lmin,將上清液取出待凈化。
[0071]2、凈化
[0072]將上清液移至25mL四氟分液漏斗中，加入3mL正己烷萃取。萃取時(shí)先振蕩2min，靜置I分鐘后再振蕩約2min。靜置Imin后將正己烷轉(zhuǎn)移到5mL離心管中，在10000r/min下離心5min，將正己烷層轉(zhuǎn)移至試管中，氮?dú)獯蹈伞?br> [0073]3、檢測(cè)
[0074]往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤?50ul 二次水，震蕩20s后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入1ul金屬溶膠(55nm裸露的Au納米粒子，現(xiàn)有技術(shù))及無機(jī)鹽絮凝劑1ullM KI混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，拉曼光譜儀功率60mw，激光波長(zhǎng)785nm，掃描范圍200-2000nm。結(jié)果見圖7。
[0075]上述僅為本發(fā)明的具體實(shí)施例，但本發(fā)明的設(shè)計(jì)構(gòu)思并不局限于此，凡利用此構(gòu)思對(duì)本發(fā)明進(jìn)行非實(shí)質(zhì)性的改動(dòng)，均應(yīng)屬于侵犯本發(fā)明保護(hù)范圍的行為。
【權(quán)利要求】
1.一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，包括如下步驟： (1)、提?。悍Q取待測(cè)樣品1份，加入4-10倍重量體積比的二次蒸餾水超聲提取.l-5min,提取液移至離心管，離心，將上清液取出備用； (2)、凈化：上清液加入2-5倍重量體積比的有機(jī)溶劑萃取，萃取完全后將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移到離心管中，離心，再將有機(jī)溶劑層轉(zhuǎn)移至試管中，吹干； (3)、檢測(cè)：往氮?dú)獯蹈傻脑嚬苤屑尤脒m量二次蒸餾水，震蕩后取出放入玻璃檢測(cè)池，之后加入IO-IOOul納米粒子溶膠及適量無機(jī)鹽絮凝劑，混勻，然后放在便攜拉曼光譜儀檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1)所述的待測(cè)樣品包括辣椒、花椒、辣椒末、辣椒粉、豆瓣醬、辣椒面或辣椒油。
3.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（1)在8000r/min_12000r/min 下離心 l-5min。
4.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)有機(jī)溶劑包括正丁醇、四氫呋喃、甲酸甲酯、乙酸乙酯、碳酸二甲酯、乙醚、異丙醚、正丁醚、三氯乙烯、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳、環(huán)己烷、正己烷、石油醚等中的至少一種。
5.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)的離心為8000r/min-12000r/min 離心 l_8min。
6.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)有機(jī)溶劑采用環(huán)己烷或正己烷。
7.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：步驟（2)的吹干采用氮?dú)饣蚨栊詺怏w。
8.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述的納米粒子溶膠包括裸露的納米粒子或是SHINERS納米粒子。
9.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：其中SHINERS納米粒子為帶針孔的納米粒子；或是不帶針孔的納米粒子。
10.如權(quán)利要求1所述的一種羅丹明B的快速檢測(cè)方法，其特征在于：所述的無機(jī)鹽絮凝劑包括碘化鉀、碘化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、氯化鋁、氯化鋇、硫酸鉀、硫酸鈉、硫酸鎂、磷酸鉀、磷酸鈉、碳酸鉀或碳酸鈉溶液中的至少一種。
【文檔編號(hào)】G01N1/34GK104034713SQ201310069928
【公開日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2013年3月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月5日
【發(fā)明者】康懷志, 劉國(guó)坤, 曾勇明, 陳啟振, 陳宏炬, 田中群 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)