專利名稱：一種巴旦油脂肪酸成分指紋圖譜的構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥指紋圖譜的建立方法，具體涉及巴旦油脂肪酸成分GC-MS指紋圖譜的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
巴旦仁為巴旦杏干燥成熟的種子，巴旦杏communis L.),又稱扁桃，維吾爾名為巴旦姆、巴達(dá)姆等，英文名Almond,是薔薇科Qioseiceeie')李亞科iPmnoideae')桃屬(Amygdalus L.)喬木,原產(chǎn)西亞和中亞山區(qū),尤以美國加利福尼亞種植面積最大，中國主要集中在西北和西南地區(qū)，又以新疆天山以南的阿克蘇，喀什、和田、庫爾勒、阿圖什種植的較多。巴旦仁，商品名為美國大杏仁，不僅作為營養(yǎng)豐富的堅(jiān)果可直接食用，還研發(fā)出巴旦仁酒、飲料等產(chǎn)品；同樣巴旦仁也具有較高的藥用價(jià)值，在新疆喀什的維吾爾醫(yī)藥中，60%的維吾爾醫(yī)藥制劑都配有它。巴旦仁收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊(cè)》，其氣微，味甘；具有助護(hù)營養(yǎng)力，強(qiáng)身健腦，明目養(yǎng)顏，潤腸止咳的功效；用于身體虛弱，咳嗽多痰，胸悶便秘，視弱面暗?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，巴旦仁具有抗氧化、降低血膽固醇、預(yù)防心血管疾病、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫能力、保肝等作用。巴旦仁主要含脂肪油、皂苷類、蛋白質(zhì)、留醇類、磷脂類等化學(xué)成分，其中脂肪油占55-66%。巴旦油是通過壓榨提取或有機(jī)溶劑提取得到的脂肪油，目前主要應(yīng)用于食品、化妝品領(lǐng)域，巴旦油中的脂肪酸以不飽和脂肪酸為主，主要有油酸、亞油酸、亞麻酸等成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)的研究表明，巴旦油具有抗氧化、降低血脂、血膽固醇、保肝等作用，這些作用與其所含的不飽和防酸成分有著直接關(guān)系。然而巴旦杏的產(chǎn)地分布較廣，種植品的種類繁多，僅在新疆喀什種植品就有十幾種，因此不同產(chǎn)地、不同品種的巴旦仁其含油量、脂肪酸成分也有不同；同時(shí)，受自然氣候、種植條件等多種因素的影響，同一地區(qū)同一品種的巴旦油之間也會(huì)產(chǎn)生不同程度的差異。鑒于巴旦仁的食、藥兩用價(jià)值，有必要對(duì)巴旦油的質(zhì)量進(jìn)行控制，目前對(duì)巴旦油的研究很多，主要集中在脂肪油的提取方法、成分分析、藥理活性這三方面，沒有關(guān)于巴旦油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究方面的報(bào)道，特別是從整體特征面貌上把握巴旦油的品質(zhì)和質(zhì)量。因此，本發(fā)明為了控制巴旦油的質(zhì)量，利用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(GC-MS)建立了巴旦油指紋圖譜的方法，并確立了巴旦油的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種巴旦油脂肪酸成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法是由巴旦油提取，甲酯化供試品溶液的制備，GC-MS分析，分析巴旦油供試品溶液，得到巴旦油脂肪酸成分的指紋圖譜這幾個(gè)步驟完成，通過對(duì)比所得巴旦油的GC-MS指紋圖譜，確定共有峰9個(gè)，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征面貌上控制巴旦油的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，以此彌補(bǔ)巴旦油質(zhì)量控制的空白，從而為巴旦油的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。本發(fā)明所述的一種巴旦油脂肪酸成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，按下列步驟進(jìn)行:
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，過20目篩，置錐形瓶中，加入正己烷，室溫下超聲50分鐘，濾過，濾液揮干，即得黃色透明巴旦油狀液體；
b、甲酯化供試品溶液的制備:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入2mL石油醚和甲苯的混合溶劑，輕輕振搖2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下靜置10-15 min，待溶液澄清后加蒸餾水定容，旋轉(zhuǎn)容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液懸浮至容量瓶頸上部，再在上清液中加無水乙醇使其迅速澄清，取上清液經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，作為供試品溶液；
C、氣相色譜質(zhì)譜分析:精密吸取供試品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色譜儀，色譜條件為:色譜柱:HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度260°C;進(jìn)樣量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升溫程序:起始溫度為100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升溫至180°C，保持2min，以2V /min升溫至220°C，保持5min ；
質(zhì)譜條件:電離方式為EI，電離能量為70eV，離子源發(fā)生器溫度為230°C，質(zhì)量掃描范圍為 30-350amu ；
d、分析巴旦油供試品溶液，通過對(duì)12批次巴旦仁建立的指紋圖譜的分析比較，確定了9 個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分鐘，由這9個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。步驟a中巴旦仁粉末與正己烷的料液質(zhì)量體積比為1:20。步驟b石油醚和甲苯的混合溶劑的體積比1:1。本發(fā)明還提供了一種由上述構(gòu)建方法得到的巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，該標(biāo)準(zhǔn)圖譜是通過對(duì)12批次不同產(chǎn)地的巴旦仁采用上述構(gòu)建方法得到的色譜圖進(jìn)行分析比較，確定了 9個(gè)共有特征峰，9個(gè)共有峰的保留時(shí)間分別為14.460，14.991，16.559，17.102 ,19.035 ,19.674 ,20.705 ,24.613，25.207 分鐘，由這 9 個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明的有益效果在于:通過巴旦油脂肪酸成分的指紋圖譜，可反映出巴旦油樣品中脂肪酸的主要成分及其比例，能從化學(xué)成分的整體面監(jiān)控巴旦油的質(zhì)量，且本方法簡單、重現(xiàn)性好、精密度高，能應(yīng)用于快速、準(zhǔn)確的檢測。


圖1為本發(fā)明的巴旦油樣品脂肪酸成分的指紋圖譜，其中圖中標(biāo)示了 9個(gè)共有特征峰的峰號(hào)。圖2為本發(fā)明的巴旦油脂肪酸成分標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其中圖中標(biāo)示了 9個(gè)共有特征峰的峰號(hào)。
具體實(shí)施例方式以下通過一具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。儀器:Agilent7890A-5975C GC-MS (美國 Agilent 公司)，色譜柱:HP_INN0WAX 毛細(xì)管柱(30 mX0.25mmX0.25 u m)；
樣品:12批巴旦仁經(jīng)鑒定為薔薇科扁桃屬植物扁桃的干燥成熟種子；
試藥:正己烷、甲苯為分析純；
實(shí)施例1
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，過20目篩，置錐形瓶中，加入正己烷，室溫下超聲50分鐘，濾過，濾液揮干，即得黃色透明巴旦油狀液體，其中巴旦仁粉末與正己烷的料液質(zhì)量體積比為1:20 ；
b、甲酯化供試品溶液的制備:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入體積比為1:1石油醚和甲苯的混合溶劑2 mL，輕輕振搖2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下靜置10-15 min，待溶液澄清后加蒸餾水定容，旋轉(zhuǎn)容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液懸浮至容量瓶頸上部，再在上清液中加無水乙醇使其迅速澄清，取上清液經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，作為供試品溶液；
C、氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)分析:精密吸取供試品溶液0.2 u L，注入GC-MS色譜儀，色譜條件為:色譜柱:HP-1NNOWAX毛細(xì)管柱30 mX 0.25mmX 0.25 y m，載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度260°C ;進(jìn)樣量0.2iiL;分流比100:1 ;升溫程序:起始溫度為100°C，保持2min，以溫度IO0C /min的速率程序升溫至180°C，保持2min，以溫度2V /min升溫至220°C，保持5min ；
質(zhì)譜條件:電離方式為EI，電離能量為70eV，離子源發(fā)生器溫度為230°C，質(zhì)量掃描范圍為 30-350amu ；
d、分析巴旦油供試品溶液，通過對(duì)12批次巴旦仁建立的指紋圖譜的分析比較，確定了9 個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674,20.705 ,24.613，25.207分鐘，由這9個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
對(duì)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的共有峰的歸屬:精密吸取棕櫚酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、硬脂酸甲酯對(duì)照品溶液，在步驟c的色譜條件下進(jìn)樣分析，對(duì)比相對(duì)保留時(shí)間可知，指紋圖譜中第1、5、6、7號(hào)共有峰分別為棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯色譜峰。實(shí)施例2
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，過20目篩，置錐形瓶中，加入正己烷，室溫下超聲50分鐘，濾過，濾液揮干，即得黃色透明巴旦油狀液體，其中巴旦仁粉末與正己烷的料液質(zhì)量體積比為1:20 ；
b、甲酯化供試品溶液的制備:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入體積比為1:1石油醚和甲苯的混合溶劑2 mL，輕輕振搖2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下靜置10-15 min，待溶液澄清后加蒸餾水定容，旋轉(zhuǎn)容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液懸浮至容量瓶頸上部，再在上清液中加無水乙醇使其迅速澄清，取上清液經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，作為供試品溶液；
C、氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)分析:精密吸取供試品溶液0.2 ii L，注入GC-MS色譜儀，色譜條件為:色譜柱:HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱30 mX0.25mmX0.25 y m，載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度2600C ;進(jìn)樣量0.2iiL;分流比100:1 ;升溫程序:起始溫度為100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升溫至180°C，保持2min，以2V /min升溫至220°C，保持5min ； 質(zhì)譜條件:電離方式為EI，電離能量為70eV，離子源發(fā)生器溫度為230°C，質(zhì)量掃描范圍為 30-350amu ；
d、分析巴旦油供試品溶液，通過對(duì)12批次巴旦仁建立的指紋圖譜的分析比較，確定了9 個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分鐘，由這9個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
對(duì)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的共有峰的歸屬:精密吸取棕櫚酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、硬脂酸甲酯對(duì)照品溶液，在步驟c的色譜條件下進(jìn)樣分析，對(duì)比相對(duì)保留時(shí)間可知，指紋圖譜中第1、5、6、7號(hào)共有峰分別為棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯色譜峰。 實(shí)施例3
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，過20目篩，置錐形瓶中，加入正己烷，室溫下超聲50分鐘，濾過，濾液揮干，即得黃色透明巴旦油狀液體，巴旦仁粉末與正己烷的料液質(zhì)量體積比為 1:20 ；
b、甲酯化供試品溶液的制備:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入體積比1:1石油醚和甲苯的混合溶劑2 mL,輕輕振搖2 min,使油脂溶解,再加入3 mL 0.4 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下靜置10-15 min，待溶液澄清后加蒸餾水定容，旋轉(zhuǎn)容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液懸浮至容量瓶頸上部，再在上清液中加無水乙醇使其迅速澄清，取上清液經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，作為供試品溶液；
C、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析:精密吸取供試品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色譜儀，色譜條件為:色譜柱:HP-1NN0WAX毛細(xì)管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度260°C;進(jìn)樣量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升溫程序:起始溫度為100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升溫至180°C，保持2min，以2V /min升溫至220°C，保持5min ；
質(zhì)譜條件:電離方式為EI，電離能量為70eV，離子源發(fā)生器溫度為230°C，質(zhì)量掃描范圍為 30-350amu ；
d、分析巴旦油供試品溶液，通過對(duì)12批次巴旦仁建立的指紋圖譜的分析比較，確定了9 個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分鐘，由這9個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；
對(duì)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中的共有峰的歸屬:精密吸取棕櫚酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯、硬脂酸甲酯對(duì)照品溶液，在步驟c的色譜條件下進(jìn)樣分析，對(duì)比相對(duì)保留時(shí)間可知，指紋圖譜中第1、5、6、7號(hào)共有峰分別為棕櫚酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亞油酸甲酯色譜峰。
權(quán)利要求
1.一種巴旦油脂肪酸成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行: a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，過20目篩，置錐形瓶中，加入正己烷，室溫下超聲50分鐘，濾過，濾液揮干，即得黃色透明巴旦油狀液體； b、甲酯化供試品溶液的制備:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入2mL石油醚和甲苯的混合溶劑，輕輕振搖2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，室溫下靜置10-15 min，待溶液澄清后加蒸餾水定容，旋轉(zhuǎn)容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液懸浮至容量瓶頸上部，再在上清液中加無水乙醇使其迅速澄清，取上清液經(jīng)無水硫酸鈉干燥后，作為供試品溶液； C、氣相色譜質(zhì)譜分析:精密吸取供試品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色譜儀，色譜條件為:色譜柱:HP-1NNOWAX毛細(xì)管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度260°C;進(jìn)樣量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升溫程序:起始溫度為100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升溫至180°C，保持2min，以2V /min升溫至220°C，保持5min ； 質(zhì)譜條件:電離方式為EI，電離能量為70eV，離子源發(fā)生器溫度為230°C，質(zhì)量掃描范圍為 30-350amu ； d、分析巴旦油供試品溶液，通過對(duì)12批次巴旦仁建立的指紋圖譜的分析比較，確定了9 個(gè)共有特征峰，其保留時(shí)間分別為 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674,20.705 ,24.613，25.207分鐘，由這9個(gè)共有峰構(gòu)成巴旦油脂肪酸成分的指紋特征，作為巴旦油脂肪酸成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟a中巴旦仁粉末與正己烷的料液質(zhì)量體積比為1:20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟b中石油醚和甲苯的混合溶劑的體積比 1:1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種巴旦油脂肪酸成分指紋圖譜的構(gòu)建方法，該方法是由巴旦油提取，甲酯化供試品溶液的制備，GC-MS分析，分析巴旦油供試品溶液，得到巴旦油脂肪酸成分的指紋圖譜步驟完成，通過對(duì)比所得巴旦油的GC-MS指紋圖譜，確定共有峰9個(gè)，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征面貌上控制巴旦油的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，以此彌補(bǔ)巴旦油質(zhì)量控制的空白，從而為巴旦油的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103175923SQ201310077220
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2013年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月12日
發(fā)明者阿吉艾克拜爾·艾薩, 徐江玲 申請(qǐng)人:中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所