專利名稱：一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
當(dāng)前，生物反應(yīng)系統(tǒng)被廣泛應(yīng)用于基因組研究、醫(yī)學(xué)研究和藥學(xué)研究等生命科學(xué)的各個(gè)研究領(lǐng)域，并逐步向新藥開發(fā)、臨床診斷、健康預(yù)測(cè)、疾病治療、司法鑒定、軍事防護(hù)、食品衛(wèi)生監(jiān)督、商貿(mào)檢驗(yàn)檢疫、環(huán)境監(jiān)測(cè)防治及農(nóng)林牧漁作物的優(yōu)選優(yōu)育等各大領(lǐng)域滲透。特別是在疾病檢測(cè)診斷方面，生物反應(yīng)系統(tǒng)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。在一張載體上可以同時(shí)對(duì)多個(gè)患者進(jìn)行多種疾病或指標(biāo)的檢測(cè)，從而在短時(shí)間內(nèi)為醫(yī)務(wù)人員提供大量的疾病診斷信息。例如對(duì)遺傳疾病、腫瘤和傳染性疾病等常見病和多發(fā)病的臨床檢驗(yàn)，均可以應(yīng)用生物反應(yīng)技術(shù)。今后人們甚至可以擁有“個(gè)人化驗(yàn)室”，隨時(shí)隨地可以對(duì)自己的健康狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
生物反應(yīng)系統(tǒng)是根據(jù)生物分子間特異相互作用的原理，將生化分析過程集成于載體表面，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)以及其他生物成分的高通量快速檢測(cè)。目前制備生物反應(yīng)系統(tǒng)主要采用表面化學(xué)的方法或組合化學(xué)的方法來處理固相基質(zhì)如聚苯乙烯板、硅片、纖維素膜或尼龍膜等，然后使DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)以及其他生物成分按特定要求排列在載體上。但是檢測(cè)中常常遇到本底值高、信號(hào)強(qiáng)度差的問題。申請(qǐng)?zhí)枮?00710132686.X的中國(guó)發(fā)明專利公開了一種生物芯片載玻片，該生物芯片載玻片的制作包括如 下步驟:(1)室溫條件下，先將石英砂與碳酸鈉混勻；(2)加入MnO2、硼砂、NaNO3、碳粉、二氧化二砷、K2CO3，攪拌混勻；(3)將上述混合料投入熔爐，加熱熔成漿狀，并連續(xù)攪拌I小時(shí)；(4)迅速冷卻到25 40°C; (5)切片；(6)拋光，成型。該發(fā)明片基的本底值優(yōu)于普通載玻片片基，信號(hào)強(qiáng)度方面，該發(fā)明載玻片平均信號(hào)強(qiáng)度勝于普通載玻片。但是這些優(yōu)點(diǎn)都有待進(jìn)一步提升。由于玻璃載體本身固有的缺點(diǎn)，使之具有局限性，目前大多數(shù)的生物檢測(cè)試劑盒采用的是聚苯乙烯板載體、濾膜類的載體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為解決上述技術(shù)問題，提供了一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法。本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的:
一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，在生物反應(yīng)前，對(duì)生物反應(yīng)載體進(jìn)行上色處理。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述生物反應(yīng)載體是可以與包被生物物質(zhì)相結(jié)合的載體。所述上色處理所用的上色劑是載體上色后可以顯著降低載體在生物反應(yīng)時(shí)的本底、提聞檢測(cè)靈敏度的上色劑。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯或硅橡膠材料制成的承載體；所述上色處理為載體在制造過程中，采用有色物質(zhì)分散于制造所述載體的原料中，經(jīng)成型工藝使得所述有色物質(zhì)均勻融合于載體中。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、硅橡膠材料制成的承載體中的任意一種；所述上色處理是在制作生物檢測(cè)試劑之前，采用浸染或涂染的工藝，將所述載體浸潰于染液中或涂覆上染液，使得所述載體成為有色載體。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、硅橡膠材料制成的承載體中的任意一種；所述上色處理是在制作生物檢測(cè)試劑的過程中，采用浸染或涂染的工藝，將所述載體浸潰于染液中或涂覆上染液，使得所述載體成為有色載體。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述載體為微孔濾膜。所述纖維素類微孔濾膜是指硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、醋酸纖維素與硝酸纖維素的混合物制成的膜、纖維素膜、玻璃纖維素膜等。所述聚氟乙烯類微孔濾膜是指聚偏氟乙烯膜或聚四氟乙烯膜。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述上色劑是直接染料、不溶性偶氮染料、活性染料、還原染料、可溶性還原染料、硫化染料、硫化還原染料、酞菁染料、氧化染料、縮聚染料、分散染料、酸性染料、酸性媒介及酸性含媒染料、堿性及陽離子染料、涂料。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述上色方法為浸染。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述上色處理是:先將所述載體浸泡于的吐溫-20溶液中，室溫浸泡后取出；把所述載體用去離子水沖洗；浸入染液中開始染色，升高溫度并保溫；取出載體，在染液中加HAC，放入載體，高溫保溫；倒去染液，用去離子水沖洗；浸泡于去離子水中一段時(shí)間；倒去去離子水，用洗滌液洗；倒去洗滌液，用去離子水沖洗；取出洗好的載體烘干。作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)選，所述上色處理是:先將所述載體浸泡于0.1 0.5%的吐溫-20溶液中，室溫浸泡3小時(shí)后取出；把所述載體用去離子水沖洗；浸入染液中開始染色，按2 4°C /min升高溫度,升至90 95°C保溫20min,期間每8 IOmin輕輕搖晃一次；取出載體，在染液中加HAC，放入載體，90 95°C保溫15 20min ;倒去染液，用去離子水沖洗；浸泡于去離子水中，室溫12小時(shí)以上；倒去去離子水，用洗滌液洗3 5小時(shí)；倒去洗滌液，用去離子水沖洗；取出洗好的載體35 37°C烘干。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述上色處理是在制作所述載體時(shí)，將0.1 5%的染料混入原料中進(jìn)行上色。作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)選，所述上色處理是在制作所述載體時(shí)，將0.1 0.5%的染料混入原料中進(jìn)行上色。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)選，所述上色處理:是在封閉液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 5%的染料對(duì)載體表面進(jìn)行封閉；所述生物檢測(cè)試劑是不同種生物物質(zhì)包被于載體表面的載體，經(jīng)裝配成的生物檢測(cè)試劑。作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步優(yōu)選，所述上色處理:是在封閉液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 0.5%的染料對(duì)載體表面片進(jìn)行封閉；所述生物檢測(cè)試劑是不同種生物物質(zhì)包被于載體表面的載體，經(jīng)裝配成的生物檢測(cè)試劑。本發(fā)明具有以下有益效果:
本發(fā)明可以顯著降低載體在生物反應(yīng)時(shí)的本底、提高檢測(cè)靈敏度、另外本發(fā)明還具有成本低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。


圖1為未上色與已上色的生物反應(yīng)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)圖像；
圖2為實(shí)驗(yàn)圖像的結(jié)果分析表。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的解釋。圖1中，Il和I 2孔均為陰性樣本JII I和III 2孔均為陽性樣本。試驗(yàn)數(shù)據(jù)具體如圖2所示，從圖1可以看出，IIII中背景色是灰蒙蒙的較為模糊，III 2中背景色干凈清亮；從圖2的表中的數(shù)據(jù)也可以看出，經(jīng)上色處理的膜載體具有提高信噪比和降低背景信號(hào)值的優(yōu)點(diǎn)，且與未上色的對(duì)比，差異很明顯。
實(shí)施例一 基因芯片的制備 (I) NC膜染色:
①將NC膜浸泡于0.2%吐溫-20溶液中，室溫浸泡3小時(shí)后取出；把浸泡后的膜浸入染料中，85°C染I小時(shí)，期間每5min輕輕搖晃一次；②倒去染液，用去離子水沖洗3次；
③將沖洗好的膜浸泡于去離子水，室溫12小時(shí)以上；
④倒去去離子水，并用去離子水沖洗兩遍后，加入洗滌液(0.2M PBS-T)，50°C洗5小
時(shí)；
⑤倒去洗滌液，用去離子水沖洗3次；
⑥加入去離子水，50°C，浸泡I小時(shí),并再重復(fù)一次；
⑦取出洗好的膜，用去離子水沖洗一遍后，37°C烘干，備用。(2)包被:將不同的核酸探針以一定的要求包被于硝酸纖維素膜表面。(3)裝配:包被完成后將含有生物物質(zhì)的硝酸纖維素膜，裝配成基因芯片。(4)封閉:以每孔IOOul的封閉液對(duì)生物芯片進(jìn)行封閉。(5)干燥:生物芯片封閉完后在干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。(6)包裝:生物芯片干燥完畢后進(jìn)行密封包裝。
實(shí)施例二
免疫芯片(熒光法)的制備
(I)包被:將不同種生物物質(zhì)以一定的要求包被于醋酸纖維素膜表面。(2)裝配包被完成后將含有生物物質(zhì)的醋酸纖維素膜，裝配成免疫芯片。(3)上色液調(diào)制:苯胺藍(lán)(aniline blue)0.5克溶于IOOml的蒸懼水中，煮沸后冷卻，再加入桔黃G I克，酸性品紅1.5克，用HCC校正pH至1.9，即可使用。(4)封閉:封閉液中添加1.0%上色液，以每孔IOOul的封閉液對(duì)免疫芯片進(jìn)行封閉。(5)干燥:免疫芯片封閉完后在干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。(6)包裝:免疫芯片干燥完畢后進(jìn)行密封包裝。
實(shí)施例三 生物芯片的制備
(I)包被:將不同種生物物質(zhì)以一定的要求包被于硝酸纖維素膜表面。(2)裝配包被完成后將含有生物物質(zhì)的硝酸纖維素膜，裝配成生物芯片。(3)封閉:封閉液中添加0.4%甲基紫，以每孔IOOul的封閉液對(duì)生物芯片進(jìn)行封閉。(4)干燥:生物芯片封閉完后在干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。(5)包裝:生物芯片干燥完畢后進(jìn)行密封包裝。
實(shí)施例四 生物芯片的制備 (O載體的制作:
①將尼龍膜浸泡于0.2%吐溫-20溶液中，室溫浸泡3小時(shí)后取出；②把浸泡后的尼龍膜浸用去離子水沖洗3次；
③浸入染料中，40°C始染色,按3°C/min升高溫度,升至95°C保溫20min ;期間每IOmin輕輕搖晃一次；
④取出尼龍膜，在染液中加HAC，放入尼龍膜，95°C保溫20min；
⑤倒去染液，用去離子水沖洗3次；
⑥將沖洗好的膜浸泡于去離子水，室溫12小時(shí)以上；
⑦倒去去離子水，并用去離子水沖洗兩遍后，加入洗滌液(0.2M PBS-T)，40°C洗5小
時(shí)；
⑧倒去洗滌液，用去離子水沖洗3次；
⑨加入去離子水，40°C，浸泡I小時(shí),并再重復(fù)一次；
⑩取出洗好的膜，用去離子水沖洗一遍后，37°C烘干，備用。(2)包被:將不同種生物物質(zhì)以一定的要求包被于染色后的尼龍膜表面。(3)裝配包被完成后將含有生物物質(zhì)的尼龍膜，裝配成生物芯片。(4)封閉:以每孔IOOul的封閉液對(duì)生物芯片進(jìn)行封閉。(5)干燥:生物芯片封閉完后在干燥箱內(nèi)進(jìn)行干燥。(6)包裝:生物芯片干燥完畢后進(jìn)行密封包裝。
實(shí)施例五
生物檢測(cè)試劑的制備
(I)載體的制作:在聚苯乙烯板條原有工藝不變的前提下，將0.2%黑色染料混入聚苯乙烯原料中上色，按原有工藝進(jìn)行板條生產(chǎn)。(2)包被:將包被抗原用包被緩沖液配制包被液，每孔取100 mL加入酶標(biāo)板，蓋好蓋板膜，4°C包被16-20h。(3)洗板:包被后要進(jìn)行兩次洗滌，250微升/孔，洗滌完畢后，應(yīng)在毛巾上拍干參與液體，并及時(shí)進(jìn)行下一步封閉。(4)封閉:封閉液應(yīng)提前一小時(shí)取出初步回溫，用前搖勻，每孔取180 mL加入酶標(biāo)板，蓋好蓋板膜，37°C封閉1.5h，酶標(biāo)板之間的間距應(yīng)保持一致。(5)烘干:封閉完后，摔倒孔內(nèi)液體，并在毛巾上拍干，接下來采取37 1:倒置烘干或者晾干的方式徹底干燥酶標(biāo)板。(6)裝袋:板子干燥后，應(yīng)及時(shí)裝入自封袋，按照每塊板I袋干燥劑的量裝入，袋子外面寫好板子制備日期，放入本成品庫冷藏環(huán)境保存?zhèn)溆谩?br> 權(quán)利要求
1.一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:在生物反應(yīng)前，對(duì)生物反應(yīng)載體進(jìn)行上色處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述生物反應(yīng)載體是可以與包被生物物質(zhì)相結(jié)合的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、硅橡膠材料制成的承載體；所述上色處理為載體在制造過程中，采用有色物質(zhì)分散于制造所述載體的原料中，經(jīng)成型工藝使得所述有色物質(zhì)均勻融合于載體中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、硅橡膠材料制成的承載體中的任意一種；所述上色處理是在制作生物檢測(cè)試劑之前，采用浸染或涂染的工藝，將所述載體浸潰于染液中或涂覆上染液，使得所述載體成為有色載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述載體為微孔濾膜或聚乙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、硅橡膠材料制成的承載體中的任意一種；所述上色處理是在制作生物檢測(cè)試劑的過程中，采用浸染或涂染的工藝，將所述載體浸潰于染液中或涂覆上染液，使得所述載體成為有色載體。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4或5所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述染液是直接染料、不溶性偶氮染料、活性染料、還原染料、可溶性還原染料、硫化染料、硫化還原染料、酞菁染料、氧化染料、縮聚染料、分散染料、酸性染料、酸性媒介及酸性含媒染料、堿性及陽離子染料、涂料中的任意一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述載體為微孔濾膜；所述上色處理是:先將所述載體浸泡于的吐溫-20溶液中，室溫浸泡后取出；把所述載體用去離子水沖洗；浸入染液中開始染色，升高溫度并保溫；取出載體，在染液中加HAC，放入載體，高溫保溫；倒去染液，用去離子水沖洗；浸泡于去離子水中，一段時(shí)間；倒去去離子水，用洗滌液洗；倒去洗滌液，用去離子水沖洗；取出洗好的載體烘干。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述上色處理是在制作所述載體時(shí)，將0.1 5%的染料混入原料中進(jìn)行上色。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述載體為微孔濾膜；所述上色處理是:先將所述載體浸泡于0.1 0.5%的吐溫-20溶液中，室溫浸泡3小時(shí)后取出；把所述載體用去離子水沖洗；浸入染液中開始染色，按2 4°C /min升高溫度，升至90 95°C保溫20min，期間每8 IOmin輕輕搖晃一次；取出載體，在染液中加HAC，放入載體，90 95°C保溫15 20min ;倒去染液，用去離子水沖洗；浸泡于去離子水中，室溫12小時(shí)以上；倒去去離子水，用洗滌液洗3 5小時(shí)；倒去洗滌液，用去離子水沖洗；取出洗好的載體35 37°C烘干。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，其特征在于:所述上色處理:是在封閉液中添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 5%的染料對(duì)載體表面進(jìn)行封閉；所述生物檢測(cè)試劑是將不同種生物物質(zhì)包被于載體表面后，經(jīng)裝配成的生物檢測(cè)試劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，屬于生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。一種降低載體在生物反應(yīng)時(shí)本底的方法，所采用的生物反應(yīng)載體是通過上色處理制成的有色載體。所述生物反應(yīng)載體是可以與包被生物物質(zhì)相結(jié)合的載體。本發(fā)明可以顯著降低載體在生物反應(yīng)時(shí)的本底、提高檢測(cè)靈敏度、另外本發(fā)明還具有成本低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N33/543GK103197055SQ20131007815
公開日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月12日
發(fā)明者王穎穎 申請(qǐng)人:王穎穎