專利名稱：一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法。
背景技術(shù)：
輻照技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于提高食品衛(wèi)生安全、延長貨架期。自1990年輻照食品商業(yè)化以來，福照食品產(chǎn)業(yè)已發(fā)展成為重要的國際貿(mào)易(Stewart, E.Μ.1n FoodIrradiation Principals and Applications.MolinsjR.A.，Ed.，New York:WileyInterscience, 2001:347-386)。為了落實輻照食品標簽法規(guī)，提高消費者的信心，需要一種可靠、快速的輻照食品檢測方法。2-烷基環(huán)丁酮(2-ACBs)是含脂食品的特異性輻解產(chǎn)物，可作為標志物檢測含脂福照食品(Obana H, FurutaM, Tanaka Y.Evaluation of2-dodecy I eye lobutanone asan irradiation dose indicator in fresh irradiated ground beef.J Agric FoodChem.，2005，53(17):6603-6608 ;0bana Hj Furuta M，Tanaka Y.Detection of irradiatedmeat, fish and their products by measuring2-alkyIeyelobutanones levels afterfrozen storage.J Food HygSoci Japan, 2007，48 (6): 203-206)。2_ 十二焼基環(huán)丁麗(2-DCB)由食品中的棕櫚酸和棕櫚酸甘油酯輻解產(chǎn)生，是2-ACBs中的一種。由于在大部分食品中，棕櫚酸是含量較高的飽和脂肪酸，并且其烴基鏈較短且飽和，相對其它2-ACBs較為穩(wěn)定。因此選用2-DCB作為檢測含脂輻照食品的標志性化合物具有實用性。目前2-DCB的檢測方法主要為氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用法(European Committee for Standardization (2003)Foodstuffs-Detection ofIrradiated Food Containing Fat-Gas Chromatographic/Mass SpectrometricAnalysis of2-AIkylcyclobutanones EN1785:2003;European Committee forStandardization:Brussels),該方法對樣品的提取和純化時間長,需要大量有機溶劑并且GC/MS設備昂貴。因此迫切需要開發(fā)一種快速、簡便、不需貴重儀器的含脂輻照食品檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法，以克服現(xiàn)有方法提取和純化時間長、需要大量有機溶劑并且儀器昂貴等缺點。本發(fā)明所提供的一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法，包括如下步驟:(1)在FtlF1-ATP合酶的ε亞基上依次連接生物素化的ε亞基多克隆抗體、鏈親和素和生物素化的2-十二烷基環(huán)丁酮多克隆抗體，得到分子馬達生物傳感器；(2)用溶劑萃取未經(jīng)輻照的含脂食品得到溶劑提取液，記為溶劑提取液a ;將所述溶劑提取液a與所述分子馬達生物傳感器在啟動緩沖液存在的條件下進行反應；向所述反應體系中加入PBS緩沖液終止反應；然后將所述反應體系的反應液與熒光素/熒光素酶溶液混勻，用超微弱發(fā)光儀進行檢測，至少檢測3次，得到所述未經(jīng)輻照的含脂食品的熒光強度；(3)用所述溶劑萃取待鑒定的含脂食品得到溶劑提取液，記為溶劑提取液b ;所述溶劑提取液b與所述分子馬達生物傳感器在所述啟動緩沖液存在的條件下進行反應；向所述反應體系中加入所述PBS緩沖液終止反應；然后將所述反應體系的反應液與所述熒光素/熒光素酶溶液混勻，用超微弱發(fā)光儀進行檢測，至少檢測3次，得到所述待鑒定的含脂食品的熒光強度；如果待鑒定的含脂食品的熒光強度與所述未經(jīng)輻照的含脂食品的熒光強度在
0.05水平上存在顯著差異，則所述待鑒定的含脂食品候選為經(jīng)過輻照的含脂食品。上述的方法中，步驟(I)中，連接所述生物素化的ε亞基多克隆抗體、所述鏈親和素和所述生物素化的2-十二烷基環(huán)丁酮多克隆抗體的步驟均可在所述PBS緩沖液中進行。上述的方法中，所述PBS緩沖液的組成如下:(λ 2g KH2PO4,3.58g Na2HPO4.12H20、
0.2g KCl、8g NaCl、1000mL 雙蒸水；所述PBS緩沖液的pH為7.4。上述的方法中，所述溶劑可為乙腈，常溫下2-DCB在乙腈中的溶解度大于5mg/L，遠大于食品中可能存在的2-DCB含量。

上述的方法中，所述方法還包括對所述溶劑提取液a和所述溶劑提取液b用硅膠固相萃取小柱(lg，6mL)進行凈化的步驟。上述的方法中，所述啟動緩沖液的組成如下:20mM Tricine - NaOH,2mM MgCl2,2mMNa2HPO4 和 0.5mM 二磷酸腺苷(ADP)；所述啟動緩沖液的pH值為8.0。上述的方法中，步驟(2)中，所述溶劑提取液a、所述分子馬達生物傳感器、所述PBS緩沖液、所述熒光素/熒光素酶溶液混合物的體積比可為1:1:45:3。上述的方法中，步驟(3)中，所述溶劑提取液b、所述分子馬達生物傳感器、所述PBS緩沖液和所述熒光素/熒光素酶溶液混合物的體積可為1:1:45:3。上述的方法中，所述含脂食品具體可為牛肉。本發(fā)明提供的鑒定輻照含脂食品的方法可將檢測時間縮短至10分鐘左右，且2-DCB檢測靈敏度能達到10_4μ g/mL，滿足現(xiàn)有的輻照含脂食品檢測范圍。


圖1為0.5!^/12-008標準樣品(&)，未輻照樣品(13)，輻照樣品((3，0.5kGy)，輻照樣品(d,5kGy)和加標樣品(e, 0.5mg/kg牛肉)的選擇離子m/z=98、12色譜圖。圖2為本發(fā)明構(gòu)建的分子馬達生物傳感器的模式圖，圖中a、b、c、α、β、δ、Y和ε均為ATP合成酶亞基，I表示ε亞基多克隆抗體，2表示鏈親和素，3表示生物素，4表示2-DCB多克隆抗體。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實施例中使用的儀器和主要試劑:
RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；娃膠固相萃取小柱(lg, 6mL, Varian Inc.公司)；RT-A3型食品絞肉機(北京瑞天盛達電器有限公司)；重鉻酸銀(Ag2Cr2O7)劑量計；Mettler AE240型電子天平(梅特勒托利多儀器有限公司)；超微弱發(fā)光儀(Centro XS3LB960，德國)；突光光度計(芬蘭Thermolabsystems公司)；新鮮冷卻牛腩肉(含脂30%)(北京美廉美超市)；乙腈、正己烷、乙醚，分析純無水硫酸鈉(國藥集團化學試劑有限公司)；色譜純正己烷，2-DCB (美國sigma公司)；

鏈親和素、生物素，ADP、牛血清白蛋白(BSA)(美國Sigma公司)；2-氧-環(huán)丁烷十一烷酸(圣克魯斯生物技術(shù)(上海)有限公司)；突光素/突光素酶(FF2021,美國Promega公司)；FITC 購自 Molecular Probes (Eugene, Oregon, USA)；PBS 緩沖液的配制方法為:0.2g KH2PO4,3.58g Na2HPO4.12Η20、0.2g KCl 和 8gNaCl溶于 IOOOmL ddH20，調(diào) pH 為 7.4。ε亞基的表達與純化:帶有His-tag的ε亞基的基因亞克隆到pET22b中轉(zhuǎn)入Ε.coli BL21中。菌種在LB培養(yǎng)基中生長到對數(shù)生長期(0D_值在0.6 0.8之間)時，ImM IPTG加入到細胞中繼續(xù)培養(yǎng)6h (20° C)。將上述擴培的菌種在Hitach1-CR7.日立離心機中4° C、4000r/min離心 30min 取沉淀，溶于溶解緩沖液(50mM tris_HCl，5mM MgCl2, 20mM NaCl, lmMEDTA,0.5mMDTT)中，在 Hitach1-CR22G(Rotor:R20A2)離心機中 4。C、8000r/min 離心 20min 取下層。得菌體17.02g,于-20° C冰箱中保存。用咪唑液(50mMTris-HCl, 5mM MgCl2, 300mM NaCl) 60ml (已加入蛋白酶抑制劑
0.lmol/L PMSF稀釋1000倍且30min加一次和0.lmol/L^-巰基乙醇稀釋1000倍用)將上述冷凍后細菌溶解，倒入小燒杯中在超聲細胞破碎儀中進行細胞破碎(超聲5s，停8s，共超聲 10min，320W)。4° C、15000G離心30min后取上清做蛋白洗脫。N1-NTA親和柱柱前處理:30%乙醇洗一超濾水洗一IOOmM EDTA洗一超濾水洗一IOOmM NiSO4洗一超濾水洗一咪唑液(50mM tris-HCl, 5mM MgCl2, 300mM NaCl)(平衡柱子)一加入上清液一20mM 咪唑液(50mM tris-HCl, 5mM MgCl2, 300mM NaCl，20mM 咪唑)(洗脫雜蛋白)一250mM 咪唑液(50mMtris-HCl, 5mM MgCl2, 300mM NaCl, 250mM 咪唑)(洗脫目的蛋白)。目的蛋白用 sartorius 超濾管純化并用SDS-PAGE方法測定。ε亞基的去內(nèi)毒素:使用上海GENMED蛋白樣品液相法去內(nèi)毒素試劑盒對ε亞基去內(nèi)毒素，具體操作步驟如下:(I)從-70°C冰箱里取出蛋白樣品，置于冰槽里融化；(2)移取I毫升蛋白樣品到1.5毫升離心管；(3)加入100微升GENMED去毒液(Reagent A)(注意:使用前，充分混勻GENMED去毒液(Reagent A))；(4)渦旋震蕩15秒；(5)在4°C條件下，置于平式搖蕩儀上孵育30分鐘，速度為50rpm ；(6)放進37°C恒溫水槽孵育10分鐘，期間渦旋震蕩2次(7)放進微型臺式離心機離心10分鐘，速度為16000g (或13000RPM)；(8)小心移取上層液相(留下150至200微升)到新的1.5毫升離心管；(9)保存在_70°C冰箱里備用或即刻進行后續(xù)實驗；ε亞基的定量:定量方法可用Bradford法。操作步驟如下:(I)先稀釋BSA，稱取0.1g BSA粉末，溶解至IOml水中，此時濃度為10mg/ml，將其稀釋5倍至2mg/ml ；(2)用 PBS 連續(xù)倍比稀釋成 lmg/ml、500ug/ml、250ug/ml、125ug/ml、62.5ug/ml 和31.25ug/ml ；(3)取出做ELISA試驗用的酶標板條，每孔中加入180ul考馬斯亮藍溶液，將上述稀釋好的不同濃度的BSA標準液分別取20ul加入到考馬斯亮藍溶液中，另外取待測蛋白樣品20ul加入到ISOul考馬斯亮藍溶液，每個濃度各做兩個復孔，用排槍上下吹打充分混勻；(4)室溫反應5min后，放入到酶標儀中讀數(shù)0D595。根據(jù)讀數(shù)繪制標準濃度曲線，計算出待測樣品濃度。ε亞基多克隆抗體的制備:以純化的ε亞基作為免疫抗原，免疫2kg兔子2只。按免疫劑量(按每只兔子
0.5mg抗原)定量取出，加入等體積的弗氏(不)完全佐劑，用注射器來回抽吸，制成油包水(W/0)型的乳化液，背部、頸部皮下多點注射。制定的免疫程序如下:首次免疫以弗氏完全佐劑乳化抗原，0.5ml/只，腿部肌肉注射；兩周后第2次免疫，改用弗氏不完全佐劑乳化抗原。間隔10天，進行第三次免疫。自第三次免疫10天后耳靜脈采血分離血清，用間接ELISA法檢測血清抗體效價。2-氧-環(huán)丁烷十一烷酸-BSA偶聯(lián)物的制備:(I)將EDC平衡到室溫；(2) 2mg凍干的BSA加入到200 μ I結(jié)合緩沖液中；(3)2mg半抗原加入到500 μ I結(jié)合緩沖液中，然后將其加入到200 μ I的蛋白液中；(4) IOmg EDC溶解在Iml超純水中，然后迅速加入100 μ I到上步得到的溶液中；(5)室溫反應2h;(6)用PBS緩沖液透析；2-DCB多克隆抗體的制備:以純化的2-氧-環(huán)丁烷十一烷酸-BSA偶聯(lián)物作為免疫抗原，免疫2kg兔子2只。按免疫劑量(按每只兔子0.5mg抗原)定量取出，加入等體積的弗氏(不)完全佐劑，用注射器來回抽吸,制成油包水(W/0)型的乳化液，背部、頸部皮下多點注射。制定的免疫程序如下:首次免疫以弗氏完全佐劑乳化抗原，0.5ml/只，腿部肌肉注射；兩周后第2次免疫，改用弗氏不完全佐劑乳化抗原。間隔10天，進行第三次免疫。自第三次免疫10天后耳靜脈采血分離血清，用間接ELISA法檢測血清抗體效價。生物素化的ε亞基抗體和2-DCB多克隆抗體的制備:將2 μ I N-Biotin(IOmM)分別加到 500 μ I ε 亞基多克隆抗體(20 μ Μ)和 2-DCB多克隆抗體(20 μ M)中，室溫孵育lh，多余的生物素通過PBS透析除去。實施例1、提取溶劑的選擇現(xiàn)已報道的樣品的前處理方法多采用傳統(tǒng)的索氏抽提法。以正己烷為提取劑提取含脂輻照食品中的脂肪，并用自制的弗羅里硅土柱凈化后進行GC-MS分析測定，該方法提取和純化時間長并且需要消耗大量有機溶劑；采用超臨界流體萃取(SFE)的方法提取2-ACBs快速、方便，提取時間為30到60min，但是SFE裝備昂貴，使用不夠廣泛；加速提取法(ASE)法使用加速溶劑萃取儀，用乙酸乙酯作為提取劑于高溫高壓下萃取脂肪，萃取液加入乙腈置于_20°C下過濾除脂，然后用Ig的硅膠柱凈化，用GC-MS分析2-ACBs含量，分析5個樣品和一個空白樣品需7-8小時，并且有較高的回收率(70-105%)，可以檢測輻照劑量為
0.7-7kGy的牛肉、豬肉、雞肉中的2-DCB、2-TCB，但是此方法仍需脫脂操作，并且加速溶劑萃取儀價格昂貴，大多數(shù)實驗室不具備。(I)提取溶劑的選擇由于乙腈不能溶解脂肪，用乙腈提取2-DCB，提取出的脂肪含量低，可以增大上樣量，提取物不用脫脂即可以用Ig的硅膠柱純化，縮短了前處理時間，降低了檢測限，而且由于正己烷的極性參數(shù)為0.01，乙腈的極性參數(shù)為5.8，它們不可互溶，所以乙腈提取物蒸干后用正己烷溶解時可除去部分極性較強的雜質(zhì)。結(jié)果表明乙腈提取，經(jīng)硅膠固相萃取小柱凈化后進行GC-MS分析，雜質(zhì)干擾小，可以得到較好的分離效果(圖1)。(2 ) 2-DCB的提取與凈化5g牛肉糜與7g無水硫酸鈉混合均勻后加入150ml乙腈,攪拌器攪拌2min。用4號濾紙過濾后轉(zhuǎn)移至500ml的圓底燒瓶中。提取重復二次，將提取液旋轉(zhuǎn)蒸干，用正己烷清洗并收集，定容至50ml,取IOml氮吹濃縮至Iml用于凈化。硅膠固相萃取小柱先用10ml5% (體積分數(shù))乙醚/正己烷淋洗，然后用IOml正己烷淋洗活化。Iml濃縮提取液用于上樣，先用IOmL正己烷淋洗并丟棄，然后用2%(體積分數(shù))乙醚/正己烷淋洗并收集，將洗提液濃縮至1ml，I μ I用于GC-MS分析。(3) GC-MS 條件GC-MS為島津GCMS-QP2010PLUS氣質(zhì)聯(lián)用儀，Rtx_5MS毛細管柱(30.0m*0.25 μ m*0.25mm);載氣 He, 1.0ml.mirf1 ;不分流；柱前恒壓 35kPa ;進樣量 I μ I ;進樣 口溫度 250°C，起始柱溫 55°C，保持 lmin，以 10°C /min 至 180°C，再以 5°C /min 至 250°C，保持2min。質(zhì)譜條件:選擇離子檢測(SIM)選擇的質(zhì)量碎片m/z:98,112, m/z:98用于定量。( 4 )線性范圍和檢測限采用外標法，用正己烷準確配制濃度梯度為:0.01,0.02,0.05,0.10、0.50和
1.0mg/L的2-DCB標準溶液，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標制作標準曲線，結(jié)果表明2-DCB在0.01-1.0mg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為:Y=263175.6Χ-2513.994，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9995，相對標準偏差(RSD)為11.2%。通過向空白樣品中添加2-DCB來考察方法的檢出限，選擇信噪比(S/N)> 3時為檢出限，S/N ^ 10時為定量限。本方法的最低檢出限為0.004mg/kg,定量限為0.0lmg/kgo(5)回收率實驗通過在空白牛肉中添加2-DCB確定此方法的回收率，添加量分別為0.0lmg/kg牛肉和0.5mg/kg牛肉，計算得到平均回收率分別為88.7%和90.4%。由上述實驗可知，用乙腈進行提取，操作簡單快速，所以乙腈直接萃取法提取2-DCB非常優(yōu)越。實施例2、構(gòu)建分子馬達生物傳感器將15 μ L 光合載色體(chromatophores,其上有 FtlF1-ATP 合酶)(50mg/mL)與 8 μ L(0.5mg/ml)生物素化的ε亞基多克隆抗體混合后，用PBS緩沖液稀釋至lmL，然后于37° C溫育60min，多余的ε亞基多克隆抗體4° C下40000轉(zhuǎn)離心20min除去；沉淀用500 μ LPBS緩沖液復溶，然后加入7.5 μ L (0.lmg/mL)的鏈親和素，并用PBS緩沖液稀釋至lmL，于37° C溫育10分鐘，多余的鏈親和素于4° C下40000轉(zhuǎn)離心20min除去；沉淀用500 μ LPBS緩沖液復溶，然后加入28 μ I (0.036mg/ml)的生物素化的2-DCB多克隆抗體，并用PBS緩沖液稀釋至lmL，于37° C下溫育lOmin，多余的2-DCB多克隆抗體于4° C下40000轉(zhuǎn)離心20min除去；然后將沉淀用500 μ L PBS緩沖液復溶，即得到構(gòu)建好的分子馬達生物傳感器。本實施例構(gòu)建的分子馬達生物傳感器的模式圖如圖2所示。實施例3、用分子馬達生 物傳感器檢測2-DCB標品檢測步驟如下:Α、取 1.5ml EP 管,加入 2-DCB 標品溶液 10 μ I,濃度依次為 0、1(Γ4μ g/ml、l(T3y g/ml、1(Γ2 μ g/ml、KT1 μ g/ml、I μ g/ml、10 μ g/ml 和 10 μ g/ml,取構(gòu)建好的分子馬達生物傳感器10 μ I加入上述各EP管。B、另取I個EP管加入10 μ L10%甲醇/PBS緩沖液(體積分數(shù))，再加入10 μ I分子馬達生物傳感器作為本底對照，漩渦振蕩器振蕩使反應體系混勻。C、再向 EP 管中分別加入 30 μ I 啟動 buffer (20mM Tricine - NaOH ρΗ8.0,2mMMgCl2,2mM Na2HPO4,0.5mM ADP，現(xiàn)用現(xiàn)配)，振蕩使反應體系混勻。D、將上述反應體系放入37° C恒溫搖床中溫育lOmin。E、將EP管從搖床中取出，分別加入450 μ L PBS緩沖液，振蕩使體系混勻。F、取一塊干凈的96孔板，將管中的最終反應物加入其中，每孔加樣50 μ L，均設5個平行，然后對每個加樣孔分別加入30 μ L已配置好的摩爾比為1:1的熒光素/熒光素酶溶液(將熒光素酶/熒光素重組緩沖液加入裝有熒光素酶/熒光素的棕色玻璃瓶中，蓋上瓶塞，反復顛倒幾次混勻，不可振蕩。使用前應將混合液在室溫放置lh)，用槍反復吹打幾次使體系混勻。G、將96孔板用超微弱發(fā)光儀檢測，處理數(shù)據(jù)，對各組數(shù)據(jù)取平均值，然后按照下式計算各樣品的相對熒光強度，樣品的相對熒光強度=(樣品的熒光強度一本底的熒光強度)/本底的熒光強度。表I分子馬達生物傳感器檢測2-DCB標品的結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法，包括如下步驟: (1)在FtlF1-ATP合酶的ε亞基上依次連接生物素化的ε亞基多克隆抗體、鏈親和素和生物素化的2-十二烷基環(huán)丁酮多克隆抗體，得到分子馬達生物傳感器； (2)用溶劑萃取未經(jīng)輻照的含脂食品得到溶劑提取液，記為溶劑提取液a;將所述溶劑提取液a與所述分子馬達生物傳感器在啟動緩沖液存在的條件下進行反應；向所述反應體系中加入PBS緩沖液終止反應；然后將所述反應體系的反應液與熒光素/熒光素酶溶液混勻，用超微弱發(fā)光儀進行檢測，至少檢測3次，得到所述未經(jīng)輻照的含脂食品的熒光強度； (3)用所述溶劑萃取待鑒定的含脂食品得到溶劑提取液，記為溶劑提取液b;所述溶劑提取液b與所述分子馬達生物傳感器在所述啟動緩沖液存在的條件下進行反應；向所述反應體系中加入所述PBS緩沖液終止反應；然后將所述反應體系的反應液與所述熒光素/熒光素酶溶液混勻，用超微弱發(fā)光儀進行檢測，至少檢測3次，得到所述待鑒定的含脂食品的熒光強度； 如果待鑒定的含脂食品的熒光強度與所述未經(jīng)輻照的含脂食品的熒光強度在0.05水平上存在顯著差異，則所述待鑒定的含脂食品候選為經(jīng)過輻照的含脂食品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，連接所述生物素化的ε亞基多克隆抗體、所述鏈親和素和所述生物素化的2-十二烷基環(huán)丁酮多克隆抗體的步驟在所述PBS緩沖液中進行。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述PBS緩沖液的組成如下:0.2gKH2PO4,3.58g Na2HPO4.12Η20、0.2g KCl、8g NaCl 和 IOOOmL 雙蒸水； 所述PBS緩沖液的pH為7.4。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于:所述溶劑為乙腈。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述方法還包括對所述溶劑提取液a和所述溶劑提取液b用硅膠固相萃取小柱進行凈化的步驟。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于:所述啟動緩沖液的組成如下:20mM Tricine - Na0H、2mM MgCl2,2mM Na2HPO4 和 0.5mM 二磷酸腺苷； 所述啟動緩沖液的PH值為8.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所述溶劑提取液a、所述分子馬達生物傳感器、所述PBS緩沖液和所述熒光素/熒光素酶溶液混合物的體積比為 1:1:45:3。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于:步驟(3)中，所述溶劑提取液b、所述分子馬達生物傳感器、所述PBS緩沖液和所述熒光素-熒光素酶溶液混合物的體積比為 1:1:45:3。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項所述的方法，其特征在于:所述含脂食品為牛肉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種輔助鑒定輻照含脂食品的方法。它包括如下步驟(1)在F0F1-ATP合酶的ε亞基上依次連接生物素化的ε亞基多克隆抗體、鏈親和素和生物素化的2-十二烷基環(huán)丁酮多克隆抗體，得到分子馬達生物傳感器；(2)用溶劑提取未經(jīng)輻照的含脂食品得到溶劑提取液a；將其與分子馬達生物傳感器在啟動緩沖液存在的條件下進行反應；向反應體系中加入PBS緩沖液終止反應；然后將所述反應體系的反應液與熒光素/熒光素酶溶液混勻，用超微弱發(fā)光儀進行檢測，得到未經(jīng)輻照的含脂食品的熒光強度；(3)用溶劑萃取待鑒定的含脂食品得到溶劑提取液b，將溶劑提取液b進行步驟(2)同樣的操作，得到待鑒定含脂食品的熒光強度，即實現(xiàn)對含脂食品的鑒定。本發(fā)明提供的鑒定輻照含脂食品的方法可將檢測時間縮短至10分鐘左右，且2-DCB檢測靈敏度能達到10-4μg/mL，滿足現(xiàn)有的輻照含脂食品檢測范圍。
文檔編號G01N21/64GK103175816SQ20131008278
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月15日
發(fā)明者哈益明, 趙月亮, 李安, 李偉明, 王 鋒, 李慶鵬, 靳婧 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所