專利名稱：雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩袅康姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于痕量分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ā?br> 背景技術(shù)：
吡蚜酮屬于吡啶類或三嗪酮類殺蟲劑，最早由瑞士汽巴嘉基公司于1988年開(kāi)發(fā)，是全新的非殺生性殺蟲劑，該產(chǎn)品對(duì)多種作物的刺吸式口器害蟲表現(xiàn)出優(yōu)異的防治效果。吡蚜酮對(duì)刺吸式口器害蟲特別是蚜蟲、白粉虱、黑尾葉蟬具有獨(dú)特的防治效果，可用于多種抗性品系害蟲的防治。因其具有的高選擇性、對(duì)哺乳動(dòng)物的低毒性和對(duì)鳥(niǎo)類、魚類、非靶標(biāo)節(jié)肢動(dòng)物的安全性，在綜合防治中顯示出良好的發(fā)展前景。隨著吡蚜酮在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的大量應(yīng)用，其在環(huán)境和農(nóng)產(chǎn)品上的殘留問(wèn)題也日益受到人們的關(guān)注。經(jīng)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，目前關(guān)于吡蚜酮?dú)埩袅康臏y(cè)定方法，一般是采用乙腈、丙酮和水的混合溶液，調(diào)節(jié)PH酸堿性，提取水稻、蔬菜中的吡蚜酮農(nóng)藥殘留，經(jīng)二氯甲烷萃取或?qū)游鲋鶅艋?，用氣相色譜-氫火焰檢測(cè)器(FID)或者液相色譜進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，目前已有殘留分析方法雖然能夠保證提取效率，但存在以下不足:1)由于采用有機(jī)溶劑和水的混合溶液作為提取劑，糖類、脂肪、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)也容易被提取出來(lái)，對(duì)吡蚜酮的檢測(cè)存在較大的干擾，雖然用二氯甲烷多次萃取，但增加了操作步驟，不僅增加了工作量，而且容易造成誤差。2)提取和凈化過(guò)程中需要反復(fù)調(diào)節(jié)pH，使得提取和凈化過(guò)程相對(duì)繁瑣。3)采用柱層析的方法不僅操作復(fù)雜，而且重現(xiàn)性差，并不適應(yīng)于煙草類含大量色素、油脂、雜質(zhì)的樣品，凈化不當(dāng)，雜質(zhì)峰極易干擾檢測(cè)結(jié)果?！冬F(xiàn)代農(nóng)藥》2010年12期公開(kāi)了一種吡蚜酮在水稻中的殘留分析方法，它是用乙腈和水混合溶液提取，經(jīng)單一 SPE-C18柱凈化，用液相色譜檢測(cè)。實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，這種殘留分析方法存在以下不足:1)去除煙草中雜質(zhì)效果較差，煙草樣品峰中存在大量雜質(zhì)，影響結(jié)果判斷的準(zhǔn)確度。2)最低檢測(cè)濃度偏高，不利于低含量吡蚜酮的測(cè)定?！稛煵菘萍肌?010年第5期公開(kāi)了一種高效液相色譜法測(cè)定干煙葉中吡蚜酮含量，它是用乙腈超聲提取，乙腈多次洗劑，通過(guò)Pesticarb/NH2固相萃取小柱凈化，用IOmL乙腈/甲苯(V:V,3:1)預(yù)淋洗，30mL乙腈/甲苯(V:V,3:1)洗脫。這種方法用來(lái)檢測(cè)煙草中吡蚜酮?dú)埩袅看嬖诘娜毕菔?1)對(duì)于極性和非極性兩種不同雜質(zhì)難以同時(shí)完全去除。2)對(duì)于鮮煙葉的提取凈化效果欠佳。3)采用甲苯作為淋洗液和洗脫液，用量大，毒性強(qiáng)，對(duì)環(huán)境和人體安全存在潛在威脅。由于煙草樣品本身的復(fù)雜性，現(xiàn)有檢測(cè)吡蚜酮?dú)埩袅康姆椒y于滿足對(duì)煙草中殘留檢測(cè)的需要，極易造成結(jié)果的偏離，影響最終的檢測(cè)結(jié)果和對(duì)吡蚜酮在煙草上合理使用的評(píng)估
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補(bǔ)現(xiàn)有吡蚜酮檢測(cè)技術(shù)的不足，提供一種快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)煙草中吡蚜酮?dú)埩舻臋z測(cè)方法。該方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、迅速、可靠的特點(diǎn)，對(duì)控制煙草中吡蚜酮?dú)埩?、指?dǎo)吡蚜酮在煙草上的安全合理使用具有重要價(jià)值。本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，包括以下步驟::(I)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱取一定質(zhì)量吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液；(2)提取:稱取煙葉樣品置于錐形瓶中，加入煙草樣品的3 30倍甲醇，經(jīng)振蕩后過(guò)濾，濃縮近干；(3)凈化:濃縮瓶中殘留物用水溶解，轉(zhuǎn)入甲醇、水預(yù)淋洗的C18固相小柱中，甲醇-水混合溶液淋洗，甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，加入甲醇-二氯甲烷混合溶液溶解，轉(zhuǎn)入甲醇-二氯甲烷混合溶液預(yù)淋洗的PSA固相小柱中，甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脫，收集流出液，濃縮，定容；(4)檢測(cè):待儀器穩(wěn)定后，用步驟(I)配制的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，保留時(shí)間定性，液相色譜檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)步驟(3)收集的凈化樣品進(jìn)行液相色譜檢測(cè)；(5)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(6)結(jié)果分析:按以下公式計(jì)算試樣中吡蚜酮的含量
權(quán)利要求
1.一種雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，其特征在于包括以下步驟: (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:稱取一定質(zhì)量吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液； (2)提取:稱取煙葉樣品置于錐形瓶中，加入煙草樣品的:Γ30倍甲醇，經(jīng)振蕩后過(guò)濾，濃縮近干； (3)凈化:濃縮瓶中殘留物用水溶解，轉(zhuǎn)入甲醇、水預(yù)淋洗的C18固相小柱中，甲醇-水混合溶液淋洗，甲醇洗脫，收集洗脫液，濃縮，加入甲醇-二氯甲烷混合溶液重新溶解，轉(zhuǎn)入甲醇-二氯甲烷混合溶液預(yù)淋洗的PSA固相小柱中，甲醇-二氯甲烷混合溶液洗脫，收集流出液，濃縮，定容； (4)檢測(cè):待儀器穩(wěn)定后，用步驟(I)配制的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣，液相色譜檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上，對(duì)步驟(3)收集的凈化樣品進(jìn)行液相色譜檢測(cè)； (5)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； (6)結(jié)果分析:按以下公式計(jì)算試樣中吡蚜酮的含量
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟?所述步驟(3)中的甲醇-水混合溶液，是指甲醇和水體積比為5:95的混合溶液；所述甲醇-二氯甲烷混合溶液，是指甲醇和二氯甲烷體積比5:95的混合溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，其特征在?所述步驟(4)中的液相色譜檢測(cè)采用高效液相色譜儀-二極管陣列檢測(cè)器，Waters Alliance 2695/2487，色譜柱:Waters X-Brige, C18 柱，5.0 Mm, 4.6 X 250 mm ;檢測(cè)條件: 流動(dòng)相:乙腈/水溶液，V: V為15:85至80:20 ;流速:0.8ml/min ； 測(cè)定波長(zhǎng):298 nm ； 柱溫:30°C ; 進(jìn)樣量:10 μ _
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟?所述步驟(I)中的吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，是指稱取0.01 g吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容至100 mL,制成100mg/L儲(chǔ)備液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，其特征在?所述步驟(I)中的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液是指0.05,0.1,0.5、1.0,5.0、10.0 mg/L的吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟?所述步驟(2)中的煙葉樣品，是指鮮煙葉、干煙葉中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒ǎ涮卣髟谟?所述步驟(2)中的樣品置于錐形瓶，是指2 20 g樣品置于250 mL錐形瓶。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，其特征在?所述步驟(2)和(3)中的濃縮，是指用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取`樣品在40°C 50°C的范圍內(nèi)濃縮近干。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種雙柱固相萃取-液相色譜法測(cè)定煙草中吡蚜酮?dú)埩舻姆椒?，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱取一定質(zhì)量吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解定容，制成吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，將吡蚜酮標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋，配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液；(2)提取用甲醇提取煙草中吡蚜酮?dú)埩簦?3)采用雙柱固相萃取凈化；(4)液相色譜檢測(cè)；(5)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；(6)計(jì)算分析吡蚜酮?dú)埩袅?。本發(fā)明的檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、迅速、可靠的特點(diǎn)，對(duì)控制煙草中吡蚜酮?dú)埩?、指?dǎo)吡蚜酮在煙草上的安全合理使用具有重要價(jià)值。
文檔編號(hào)G01N30/88GK103163266SQ20131008681
公開(kāi)日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2013年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月18日
發(fā)明者李義強(qiáng), 王秀國(guó), 孫惠青, 徐金麗, 徐光軍, 鄭曉 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所