專利名稱：一種壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于壯腰健腎的中藥藥物，特別是涉及該藥物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
壯腰健腎丸系虛證類用藥，用于腎虧腰痛，膝軟無力，小便頻數(shù)，遺精夢泄，風(fēng)濕骨痛，神經(jīng)衰弱。壯腰健腎丸現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)收錄于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第三冊中。在該質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制定了以下內(nèi)容。I)取本品，置顯微鏡下觀察:嵌晶顯微無色，直徑約45um，壁厚，草酸鈣方晶直徑約3um，眾多嵌鑲在顯微表面。含晶厚壁細(xì)胞無色或淡黃色，類圓形，草酸鈣方晶，菱形，直徑約10um。種皮柵狀細(xì)胞2列，內(nèi)列較外列長，有光輝帶。果皮表皮細(xì)胞表面觀類多角形，垂周壁厚薄不勻，胞腔含淡棕色物；內(nèi)果皮纖維束上下層斜向或垂直交錯(cuò)排列。2)取本品I丸，剪碎，加乙醇50ml，置水浴上加熱約20分鐘，濾過，取濾液5ml，蒸干，殘?jiān)语柡偷呐鹚岜芤汉?0%的枸櫞酸丙酮溶液各1ml，蒸干，殘?jiān)谧贤夤鉄?365nm)下顯黃綠色突光。3)取鑒別2)項(xiàng)下濾液1ml，于水浴中蒸干，加水1ml，搖勻，溶液呈渾濁狀，加入10%
鹽酸液，溶液轉(zhuǎn)呈渾濁。4)取鑒別2)項(xiàng)下濾液1ml，加碳酸鈉試液3滴，于水浴中加熱約I分鐘，取出，補(bǔ)充揮發(fā)的乙醇量，放冷后，加重氮對硝基苯胺試液，溶液顯紅色。上述質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)存在著比較嚴(yán)重的缺陷:首先，該標(biāo)準(zhǔn)對于主要藥物未進(jìn)行有效成分含量的定量測定；其次，50%以上的組成藥物均未進(jìn)行化學(xué)鑒別，且現(xiàn)有鑒別是采用通用顯色劑鑒別某一大類，缺乏專屬性。中藥制劑質(zhì)量穩(wěn)定、可控和具有生產(chǎn)可重復(fù)性是藥物具有藥理和臨床結(jié)果可重復(fù)性的前提保證，中藥質(zhì)量能否得到控制以及中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否科學(xué)化，是影響中藥產(chǎn)業(yè)化的重要制約因素。質(zhì)量可控性是藥品評價(jià)的重要指標(biāo)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)則是藥品質(zhì)量可控性的具體體現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種上述壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法，以確保生產(chǎn)的藥品質(zhì)量穩(wěn)定可控。本發(fā)明提供的壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法適合于由以下原料藥制備而成的藥物:制狗脊、金櫻子、黑老虎根、桑寄生、雞血藤、千斤拔、牛大力、菟絲子、女貞子。所述質(zhì)量控制方法包括鑒別方法和含量測定方法。其中，所述鑒別方法包括如下鑒別:
I)取所述藥物6g，加硅藻土 3g，研勻，置具塞錐形瓶中，加水IOml潤濕，再加乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛大力對照藥材2g，狗脊對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯:丙酮:甲酸=5:1:0.2為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，分別在與兩種對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
2)取黑老虎對照藥材2g，按I)項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液15μ 1、對照藥材溶液8μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:乙酸乙酯:甲苯:甲酸=5:6:3:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
3)取雞血藤對照藥材2g，按I)項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液及上述對照藥材溶液各6μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以水飽和甲苯:甲酸乙酯:甲酸=5:4:0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
4)取桑寄生對照藥材Ig,加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液及上述對照藥材溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯:乙酸乙酯=3:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；
5)取所述藥物IOg,加娃藻土5g,研勻，置具塞錐形瓶中，加60-90°C石油醚50ml,超聲處理40分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取女貞子對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取齊墩果酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5 μ 1、對照藥材溶液、對照品溶液各3 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷:丙酮=3:1為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。所述含量測定方法包括原兒茶酸和原兒茶醛含量的測定。原兒茶酸和原兒茶醛是藥物組成中君藥狗脊的主要有效成分，同時(shí)在雞血藤和桑寄生中也含有一定量的原兒茶酸和原兒茶醛。本發(fā)明具體以下述高效液相色譜法測定所述原兒茶酸和原兒茶醛的含量:
1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈:0.4%磷酸溶液=7:93為流動(dòng)相；檢測波長原兒茶酸260nm、原兒茶醛280nm ;理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算不低于3000 ；
2)對照品溶液的制備:取原兒茶酸和原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含原兒茶酸50 μ g、原兒茶醛15 μ g的對照品溶液；
3)供試品溶液的制備:取所述藥物3.5g，精密稱定，加硅藻土 2g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收甲醇至干，殘?jiān)?.2%鹽酸水溶液15ml分三次溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次,每次分別15ml, 15ml, 10ml, 10ml,合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
4)分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定即得。本發(fā)明建立了所述壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法，所建立的方法中，藥材的鑒別方法成熟可行，專屬性強(qiáng)，陰性無干擾，含量測定方法操作容易，精密度高，重現(xiàn)性好，使用本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能夠精確、穩(wěn)定地控制壯腰健腎丸的藥物質(zhì)量，以適應(yīng)藥物的工業(yè)化穩(wěn)定生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:牛大力和狗脊的薄層鑒別。取壯腰健腎丸6g，加硅藻土 3g，研勻，置具塞錐形瓶中，加水IOml潤濕，再加乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。另取牛大力對照藥材2g，狗脊對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲酸(5: I: 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，分別在與兩種對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例2:黑老虎的薄層鑒別。取黑老虎對照藥材2g，按實(shí)施例1供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例1供試品溶液15 μ 1、對照藥材溶液8 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲苯-甲酸(5:6:3:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例3:雞血藤的薄層鑒別。取雞血藤對照藥材2g，按實(shí)施例1供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例1供試品溶液及上述對照藥材溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯(水飽和)一甲酸乙酯一甲酸(5:4: 0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。實(shí)施例4:桑寄生的薄層鑒別。取桑寄生對照藥材lg，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取實(shí)施例1供試品溶液及上述對照藥材溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯(3: I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例5:女貞子的薄層鑒別。
取壯腰健腎丸10g，加硅藻土 5g，研勻，置具塞錐形瓶中，加石油醚(60 90°C)50ml，超聲處理40分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解,作為供試品溶液。另取女貞子對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液。再取齊墩果酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5μ 1、對照藥材溶液、對照品溶液各3μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丙酮(3: I)為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。實(shí)施例6:原兒茶酸、原兒茶醛含量的測定。1、儀器與試藥。Waters2695-2487高效液相色譜儀(美國Waters公司)；KQ5200DE超聲波清洗器(昆山超聲儀器廠)；BS223S千分之一電子天平(德國賽多利斯)；CP22 十萬分之一電子天平(德國賽多利斯)；原兒茶酸對照品(110809-200604，中國藥品生物制品檢定所)；原兒茶醛對照品(110810-200506，中國藥品生物制品檢定所)；乙腈(色譜純，SK Chemicals Ulsan680-160，Korea);甲醇(色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)；水為娃哈哈純凈水，硅藻土及其它試劑均為分析純。壯腰健腎丸(批號(hào):080913、080914、080915，山西開元制藥廠)
2、色譜條件。色譜柱:kromasil-C18(4.6mmX 250mm, 5 μ m);流動(dòng)相:乙臆-0.1% 憐酸(內(nèi)含 0.1%三乙胺)溶液(5:95);檢測波長210nm,流速0.8ml/min。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。色譜柱:Kromasil-C18柱(250mmX4.6mm, 5 μ m);流動(dòng)相:乙臆-0.4% 憐酸(7: 93),流速lml/min ;雙通道檢測波長:原兒茶酸260nm,原兒茶醒280nm。理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。3、對照品溶液的制備。取原兒茶酸和原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含原兒茶酸50 μ g、原兒茶醛15 μ g的溶液，即得。4、供試品溶液的制備。取本品約3.5g，精密稱定，加硅藻土 2g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量；加熱回流I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收甲醇至干，殘?jiān)?.2%鹽酸水溶液15ml分3次溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次(15ml，15ml, 10ml, 10ml),合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。5、原兒茶酸和原兒茶醒含量的測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。6、陰性樣品試驗(yàn)。照供試品溶液制備方法，制備缺狗脊、雞血藤、桑寄生陰性樣品溶液。吸取陰性樣品溶液，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果顯示在波長280nm，原兒茶醛出峰位置未有干擾，波長260nm，原兒茶酸出峰位置有干擾，干擾峰面積占樣品平均峰面積的比例小于8%，陰性樣品對測定干擾較小，可以忽略。7、線性關(guān)系的考察。取原兒茶酸、原兒茶醛對照品溶液，精密吸取2μ 1、5μ 1、10μ 1、15μ 1、20μ I注入液相色譜儀，測定峰面積，以平均峰面積積分值為縱坐標(biāo)，原兒茶酸、原兒茶醛對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)計(jì)算回歸方程，原兒茶酸Y=3963027X+55917，r=0.9999 ;原兒茶醛Y=4531349X+6086, r=0.9999，表明原兒茶酸在0.1063-1.0630 μ g、原兒茶醛在0.0315-0.3150 μ g范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表I。
權(quán)利要求
1.一種壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法，所述壯腰健腎藥物是由以下原料藥制備而成的藥物:制狗脊、金櫻子、黑老虎根、桑寄生、雞血藤、千斤拔、牛大力、菟絲子、女貞子，其特征在于所述質(zhì)量控制方法中的鑒別方法包括如下鑒別: 1)取所述藥物6g，加硅藻土3g，研勻，置具塞錐形瓶中，加水IOml潤濕，再加乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取牛大力對照藥材2g，狗脊對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯:丙酮:甲酸=5:1:0.2為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，分別在與兩種對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； 2)取黑老虎對照藥材2g，按I)項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液15μ 1、對照藥材溶液8μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:乙酸乙酯:甲苯:甲酸=5:6:3:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； 3)取雞血藤對照藥材2g，按I)項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液及上述對照藥材溶液各6μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以水飽和甲苯:甲酸乙酯:甲酸=5:4:0.8為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； 4)取桑寄生對照藥材Ig,加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)右宜嵋阴ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取I)項(xiàng)下供試品溶液及上述對照藥材溶液各6 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯:乙酸乙酯=3:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同`顏色的斑點(diǎn)； 5)取所述藥物IOg,加娃藻土5g,研勻，置具塞錐形瓶中，加60-90°C石油醚50ml,超聲處理40分鐘，濾過，回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液；另取女貞子對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；再取齊墩果酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5 μ 1、對照藥材溶液、對照品溶液各3 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷:丙酮=3:1為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述質(zhì)量控制方法中的含量測定方法是以下述高效液相色譜法測定原兒茶酸和原兒茶醛的含量: 1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈:0.4%磷酸溶液=7:93為流動(dòng)相；檢測波長原兒茶酸260nm、原兒茶醛280nm ;理論板數(shù)按原兒茶酸峰計(jì)算不低于3000 ； 2)對照品溶液的制備:取原兒茶酸和原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含原兒茶酸50 μ g、原兒茶醛15 μ g的對照品溶液； 3)供試品溶液的制備:取所述藥物3.5g，精密稱定，加硅藻土 2g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，回收甲醇至干，殘?jiān)?.2%鹽酸水溶液15ml分三次溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取4次,每次分別15ml, 15ml, 10ml, 10ml,合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；4)分別精密吸取對 照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種壯腰健腎藥物的質(zhì)量控制方法，分別以薄層色譜法鑒別藥物中的牛大力、狗脊、黑老虎、雞血藤、桑寄生和女貞子，以液相色譜法測定藥物中的原兒茶酸和原兒茶醛含量。本發(fā)明建立的質(zhì)量控制方法中，藥材鑒別方法成熟可行，專屬性強(qiáng)，陰性無干擾，含量測定方法操作容易，精密度高，重現(xiàn)性好，使用本發(fā)明的質(zhì)量控制方法能夠精確、穩(wěn)定地控制藥物的質(zhì)量，以適應(yīng)藥物的工業(yè)化穩(wěn)定生產(chǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/90GK103149320SQ20131011071
公開日2013年6月12日 申請日期2013年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月1日
發(fā)明者王六貴, 呂建英 申請人:山西振東開元制藥有限公司