熒光探針中的比率探測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提出了一種熒光探針中的比率探測(cè)方法，包括以下步驟：（a）使所述熒光探針測(cè)量待測(cè)物質(zhì)，采用時(shí)間分辨熒光光譜技術(shù)測(cè)量獲得探針的熒光衰減曲線；（b）通過擬合算法結(jié)合多指數(shù)模型，擬合所述熒光衰減曲線，提取其相應(yīng)的αn及τn的數(shù)值，其中n為自然數(shù)；（c）根據(jù)αn及τn的數(shù)值隨檢測(cè)物質(zhì)的變化趨勢(shì)，將αn及τn分為兩類數(shù)據(jù)：一類隨檢測(cè)物質(zhì)的增加而增加，標(biāo)記為αn+及τn+，另一類隨檢測(cè)物質(zhì)的增加而減少標(biāo)記為αn-及τn-；（d）計(jì)算上述兩類數(shù)據(jù)的比值以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)物質(zhì)的比率測(cè)量。本發(fā)明方法只需要一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)及一個(gè)探測(cè)波長(zhǎng)，通過計(jì)算其瞬態(tài)熒光曲線中不同壽命組分的比值就可以進(jìn)行熒光比率探測(cè)。
【專利說明】熒光探針中的比率探測(cè)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及熒光探針領(lǐng)域，特別是比率熒光探針和時(shí)間分辨熒光光譜【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 熒光探針有著廣泛的應(yīng)用，人們已經(jīng)設(shè)計(jì)了多種熒光探針來(lái)探測(cè)溶液的pH值、溶 液中金屬離子濃度等等。當(dāng)所探測(cè)物質(zhì)的量(或者濃度）變化的時(shí)候，探針的熒光強(qiáng)度一般 會(huì)隨之變化。同時(shí)，探針發(fā)射的熒光強(qiáng)度還受多種因素影響，例如：激發(fā)光的功率、熒光探針 濃度、光學(xué)元件、探測(cè)器的效率、樣品的淬滅等，因此，為了定量的測(cè)量，一般傾向于要求熒 光探針為比率熒光探針。
[0003] 比率熒光探針一般至少具有兩個(gè)不同的激發(fā)峰Al、A2及一個(gè)熒光發(fā)射峰F，或者 至少具有一個(gè)吸收峰A和兩個(gè)發(fā)射峰FI、F2。對(duì)于具有兩個(gè)不同激發(fā)峰Al、A2的熒光探 針，可以通過在Al、A2分別激發(fā)熒光FA1，F(xiàn)A2,并且計(jì)算其比值FA1/FA2。對(duì)于具有一個(gè)吸 收峰A兩個(gè)發(fā)射峰FI、F2的熒光探針，可以通過在A處激發(fā)樣品，并計(jì)算F1/F2。
[0004] 比值FA1/FA2或者F1/F2與待測(cè)量物質(zhì)的量有關(guān)。通過計(jì)算比率的方法可以在一 定程度上消除激發(fā)光功率、熒光探針濃度等參數(shù)的影響，從而實(shí)現(xiàn)定量測(cè)量。
[0005] 但是，上述方法的缺點(diǎn)是要求熒光探針必須有兩個(gè)這樣的激發(fā)或者探測(cè)波長(zhǎng)，并 且這兩個(gè)波長(zhǎng)對(duì)于待測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)不同。對(duì)于只有一個(gè)激發(fā)峰和一個(gè)發(fā)射峰的熒光探針通 常無(wú)法實(shí)現(xiàn)比率測(cè)量。
[0006] 隨著突光探測(cè)技術(shù)的發(fā)展，除了傳統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)突光測(cè)量方法外，瞬態(tài)突光光譜技 術(shù)也引起了人們的關(guān)注?，F(xiàn)在已經(jīng)有多種測(cè)量方法可以得到熒光的壽命信息。簡(jiǎn)而言 之，通過一個(gè)非常短的光脈沖激發(fā)的熒光，其強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間快速衰減。此衰減曲線可以 采用單一指數(shù)衰減a*exp(-t/T)進(jìn)行擬合，τ為該物質(zhì)的熒光壽命。但是熒光衰減 曲線通常比較復(fù)雜，通過單指數(shù)擬合不能獲得滿意的擬合效果，此種情況下需要采用多 指數(shù)

【權(quán)利要求】
1. 熒光探針中的比率探測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟： (a) 使所述熒光探針測(cè)量待測(cè)物質(zhì)，通過時(shí)間分辨熒光測(cè)量獲得探針的熒光衰減曲 線. (b) 通過擬合算法結(jié)合多指數(shù)模型
：擬合所述熒光衰減曲 線，提取其相應(yīng)的％及τη的數(shù)值，其中η為自然數(shù)； (c) 根據(jù)^"及1"的數(shù)值隨檢測(cè)物質(zhì)的變化趨勢(shì)，將〇"及τη分為兩類數(shù)據(jù)：一類隨 檢測(cè)物質(zhì)的增加而增加，標(biāo)記為〇"+及τ η+，另一類隨檢測(cè)物質(zhì)的增加而減少標(biāo)記為α:及 τ J ;以及 (d) 計(jì)算上述兩類數(shù)據(jù)的比值以實(shí)現(xiàn)所述待檢測(cè)物質(zhì)的比率測(cè)量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的比率探測(cè)方法，其特征在于：上述兩類數(shù)據(jù)的比值包括
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的比率探測(cè)方法，其特征在于：上述兩類數(shù)據(jù)的比值包括
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104122238SQ201310148802
【公開日】2014年10月29日 申請(qǐng)日期:2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月25日
【發(fā)明者】潘海峰, 劉夢(mèng)薇, 梁榮榮, 常孟方, 秦翠芳, 張三軍, 徐建華 申請(qǐng)人:華東師范大學(xué)