替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種能測定替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)含量的高效液相色譜方法，該方法能同時(shí)測定替米考星、磺胺二甲嘧啶及其鈉鹽的有關(guān)物質(zhì)；本發(fā)明在測定有關(guān)物質(zhì)含量方面結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，具有很強(qiáng)的實(shí)用性與推廣價(jià)值。
【專利說明】替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)檢測方法，屬方法學(xué)領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 獸醫(yī)臨床實(shí)際中往往通過聯(lián)合用藥使不同藥物獲得協(xié)同或相加作用，從而提高療 效，減少用量，降低或避免毒性反應(yīng)，減少細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生。這使得復(fù)方藥物的研究應(yīng)用 在獸藥領(lǐng)域越來越受到關(guān)注。替米考星是大環(huán)內(nèi)酯類藥物，是繁殖期抑菌劑，屬于快速抑菌 齊?，磺胺類藥物是靜止期抑菌劑，是一種慢效抑菌劑，二者合用能夠擴(kuò)大抗菌譜，并有相加 的作用，在臨床中有很大的運(yùn)用基礎(chǔ)。按照國家有關(guān)規(guī)定，對于復(fù)方制劑必須按照新獸藥申 報(bào)，所以，需要進(jìn)行該復(fù)方制劑的有關(guān)物質(zhì)研究。在中國獸藥典（2010年版)中，替米考星的 有關(guān)物質(zhì)用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，磺胺二甲嘧啶的有關(guān)物質(zhì)用薄層色譜法檢測?；?薄層色譜法不適于雜質(zhì)的定量研究，所以采用高效液相色譜法進(jìn)行雜質(zhì)的檢測。但是如果 完全參照藥典中關(guān)于替米考星有關(guān)物質(zhì)的方法進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)順反式替米考星雜質(zhì)峰未能 達(dá)到基線分離，且拖尾嚴(yán)重，圖譜見說明書附圖1，而同時(shí)檢測替米考星、磺胺二甲嘧啶鈉的 方法尚無研究，因此開發(fā)新的檢測替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方 法，已達(dá)到能將制劑中的雜質(zhì)完全、準(zhǔn)確的檢出的目的。
[0003] 《中華人民共和國獸藥典》（2010年版一部）替米考星項(xiàng)下的有關(guān)物質(zhì)檢測方法如 下：取替米考星約〇. 2g，精密稱定，置50ml量瓶內(nèi)，加乙腈10ml超聲處理使溶解，用磷酸溶 液(取水900ml，加磷酸5. 71g，用12. 5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至2. 5 ±0. 1，加水至 1000ml)稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；取替米考星對照品適量，精密稱定，加乙腈制 成每lml中含0. 25mg的溶液，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用上述磷酸溶液稀釋至刻度， 搖勻，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（附錄36頁）試驗(yàn)，用十八烷基鍵合硅膠為填充 齊U ;以水-磷酸二丁胺溶液[取二丁胺16. 8ml，加磷酸溶液（1 - 10 ) 70ml，邊加邊攪拌，放 冷后，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. 1，加水至100ml] (975:25)為流動相A，以乙腈為流動 相B ;按下表1進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為280nm ;流速為每分鐘1. lml。替米考星反式異構(gòu) 體(兩個(gè)不完全分開的峰）的相對保留時(shí)間為〇. 8,替米考星順式異構(gòu)體的相對保留時(shí)間為 1. 0,替米考星順式-8-差向異構(gòu)體的相對保留時(shí)間為1. 2。精密量取供試品溶液和對照品 溶液各1〇μ 1，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液的色譜圖中（除順式、反式和 順-8-差向異構(gòu)體外)如有雜質(zhì)峰，以無水物計(jì)算，單個(gè)雜質(zhì)不得過3. 0%，各雜質(zhì)的和不得 過10. 0%。供試品溶液色譜圖中任何小于對照品溶液順式異構(gòu)體峰面積0. 01倍的峰可忽 略不計(jì)。
[0004] 表1梯度洗脫程序
[0005]

【權(quán)利要求】
1. 一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，采用高效液相色譜法 測定，其特征在于采用的流動相為：乙腈為流動相A ;水-磷酸二丁胺溶液為流動相B ; 10% 甲醇溶液為流動相C。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方 法，其特征在于流動相的梯度洗脫程序。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1、2任一所述的一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢 測方法，其特征在于流動相梯度洗脫程序?yàn)椋?br> 4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一所述的一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的 檢測方法，其特征在于具體實(shí)施步驟如下： (1) 取替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑適量，加提取液制成每lmL含替米考星4mg 的溶液，作為供試品溶液；取替米考星對照品適量，精密稱定，加提取液制成每lmL中含 0. 25mg的溶液，精密量取5mL，置25mL量瓶中，用提取液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶 液； (2) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，選擇250mmX4. 6mm分析柱；以乙腈為流動相 A ;水-磷酸二丁胺溶液〔取二丁胺16. 8mL，加磷酸溶液（1 - 10) 70mL，邊加邊攪拌，放冷 后，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2. 5±0. 1，加水至100mL，即得〕（975 :25)為流動相B，10%甲醇溶 液為流動相C，流速為1. lmL/min，檢測波長為280nm，替米考星反式異構(gòu)體(兩個(gè)不完全分 開的峰）的相對保留時(shí)間為0. 9,替米考星順式異構(gòu)體的相對保留時(shí)間為1. 0,替米考星順 式-8-差向異構(gòu)體的相對保留時(shí)間為1. 1，理論板數(shù)按替米考星順式峰計(jì)算應(yīng)不低于3000， 替米考星的順式和反式異構(gòu)體峰之間的分離度應(yīng)符合要求； (3) 精密量取對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試 品溶液的色譜圖中（除順式、反式和順-8-差向異構(gòu)體外）如有雜質(zhì)峰，按下式以無水物計(jì) 算，單個(gè)雜質(zhì)不得過3. 0%，各雜質(zhì)的和不得過10. 0%，供試品溶液色譜圖中任何小于對照 品溶液順式異構(gòu)體峰面積〇. 01倍的峰可忽略不計(jì)：
式中A :供試品溶液色譜圖中除了順式替米考星、反式替米考星、順-8-差向異構(gòu)體替 米考星和磺胺二甲嘧啶鈉外，有關(guān)物質(zhì)峰面積的和或單個(gè)有關(guān)物質(zhì)峰面積； As :對照品溶液色譜圖中順式、反式、順-8-差向異構(gòu)體、磺胺二甲嘧啶鈉峰面積 的和； Ws :對照品的重量； W :供試品的重量； P :對照品的順式和反式異構(gòu)體的含量； N :對照品與供試品的稀釋倍數(shù)比。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的檢測方 法，其特征是，提取液的配制方法為：取乙腈400-600ml和pH5. 0-8. 0的磷酸鹽緩沖液25mL 加入適量水中，用水稀釋至1000 mL。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一所述的一種替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑有關(guān)物質(zhì)的 檢測方法，其特征是替米考星、磺胺二甲嘧啶復(fù)方制劑所用原料為：替米考星、磺胺二甲嘧 啶或磺胺二甲嘧啶鈉，所用輔料包括但不限于磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、DL-酒石酸、檸檬 酸、DL-蘋果酸、聚乙二醇6000、無水葡萄糖、環(huán)糊精中的一種或多種。
【文檔編號】G01N30/36GK104251891SQ201310272838
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2013年6月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月28日
【發(fā)明者】王霞, 劉拓, 張曉鵬 申請人:瑞普（天津）生物藥業(yè)有限公司