一種中藥組合物制劑中七種成分的含量測(cè)定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中藥組合物制劑中七種成分含量的測(cè)定方法，屬于中藥領(lǐng)域，具體制備步驟為：供試品溶液的制備、對(duì)照品溶液的制備、UPLC檢測(cè)、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及結(jié)果計(jì)算。本發(fā)明的測(cè)定方法周期短、靈敏度高。
【專利說(shuō)明】一種中藥組合物制劑中七種成分的含量測(cè)定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥分析領(lǐng)域，具體涉及中藥成分的含量測(cè)定方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 該中藥組合物由制何首烏、菊花、酸棗仁等多味中藥組成，具有治療抑郁失眠的功 效，含有綠原酸、二苯乙烯苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎寧酸等主要成分。目前其主要成分的 檢測(cè)方法有膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜法、高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用等方法，都不太理想，不能 有效的控制質(zhì)量。
[0003] 為了能夠有效的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證公眾的用藥安全，必須對(duì)生產(chǎn)工藝的中間環(huán) 節(jié)進(jìn)行質(zhì)量控制，但是該中藥組合物中的成分比較多，目前的方法檢驗(yàn)周期長(zhǎng)，重復(fù)性、靈 敏度等無(wú)法滿足連續(xù)生產(chǎn)的需要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種周期短、靈敏度高的檢測(cè)一種中藥組合物中多種成分含 量的方法。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： 一種中藥組合物制劑中七種成分含量的測(cè)定方法，該中藥組合物制劑由下列重量份的 原料藥制成：何首烏150-270、酸棗仁145-275、桑椹160-255、靈芝80-135、百合75-160、 知母50-110、丹參120-200、菊花45-120、茯苓75-145、合歡花165-288,該含量測(cè)定方法由 以下步驟組成： A、 供試品溶液的制備：稱取該中藥組合物制劑l_2g，加甲醇50ml，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，搖勻，即得； B、 對(duì)照樣品溶液的制備：分別稱取綠原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、 槲皮苷、3,5_二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品，加甲醇，搖勻，即得各對(duì)照品溶液； C、UPLC檢測(cè)：色譜柱為C18,柱溫40°C，流動(dòng)相為乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脫：0-2min，10% 乙腈，90% 的 0? 1% 磷酸；2-2. 5min，10-12% 乙腈，90-88% 的 0? 1% 磷酸； 2. 5-20min，12% 乙腈，88% 的 0? 1% 磷酸；20-21min，12-95% 乙腈，88-5% 的 0? 1% 磷酸；檢測(cè)波 長(zhǎng) 340nm，流速為 0? 2-0. 4ml/min; D、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果：分別將綠原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀 草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品溶液0. 5-5.OmL注入步驟c中超高效色譜儀中分 析，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得到各對(duì)照樣品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將供 試樣品溶液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到綠原酸、芒果 苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡?？鼘幩岬暮?。
[0006] 作為優(yōu)選方式，所述步驟A中用0.2i!m濾膜過(guò)濾；所述步驟C中色譜柱為ACQUITY BEHC18，規(guī)格為 1. 7ii m，2.IX100mm，流速為 0? 4ml/min。
[0007] 優(yōu)選的測(cè)定方法： A、 供試品溶液的制備：稱取該中藥組合物制劑l-2g，加甲醇50ml，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，搖勻，即得； B、 對(duì)照樣品溶液的制備：分別稱取綠原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、 槲皮苷、3,5_二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品，加甲醇，搖勻，即得各對(duì)照品溶液，綠原酸濃度為 0? 032mg.mL\芒果苷濃度為0? 051mg.mL\二苯乙烯苷0? 492mg.mL\斯皮諾素0? 041mg. mL'木犀草苷 0. 021mg.mL'槲皮苷 0. 213mg.mL'3, 5-二咖啡酰奎寧酸 0. 047mg.ml/1 ; C、UPLC檢測(cè)：色譜柱為C18，柱溫40 °C，流動(dòng)相為乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脫：0-2min，10% 乙腈，90% 的 0? 1% 磷酸；2-2. 5min，10-12% 乙腈，90-88% 的 0? 1% 磷酸； 2. 5-20min，12% 乙腈，88% 的 0? 1% 磷酸；20-21min，12-95% 乙腈，88-5% 的 0? 1% 磷酸；檢測(cè)波 長(zhǎng) 340nm，流速為 0? 2-0. 4ml/min; D、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果：分別將綠原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀 草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎寧酸對(duì)照品溶液0. 5-5.OmL注入步驟c中超高效色譜儀中分 析，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得到各對(duì)照樣品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將供 試樣品溶液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到綠原酸、芒果 苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡?？鼘幩岬暮?。
[0008] 優(yōu)選的，其原料藥的重量份比例為： 何首烏158 酸棗仁270 桑椹165 靈芝135 百合80 知母110 丹參125 菊花118 茯苓80 合歡花280。
[0009]或 何首烏265 酸棗仁147 桑椹250 靈芝81 百合158 知母55 丹參188 菊花50 茯苓145 合歡花170。
[0010] 或 何首烏225 酸棗仁163 桑椹220 靈芝83 百合113 知母50 丹參190 菊花45 茯苓113 合歡花178。
[0011] 或 何首烏165 酸棗仁228 桑椹173 靈芝110 百合75 知母75 丹參150 菊花78 茯苓78 合歡花218。
[0012] 或 何首烏200 酸棗仁200 桑椹200 靈芝100 百合100 知母66. 7 丹參166. 7 菊花66. 7 茯苓100 合歡花200。
[0013] 為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)方案，將該中藥組合物制成膠囊劑、片劑或丸劑。
[0014] 所述片劑的制備方法包括以下步驟： a) 按比例稱取選凈的何首烏、知母及選凈粗碎的酸棗仁，加6-12倍量30%-70%乙醇， 加熱回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，提取液過(guò)濾，合并，減壓回收乙醇，濃縮至在60°C測(cè)定 相對(duì)密度為1. 10-1. 15,得醇提浸膏，備用； b) 按比例稱取選凈的桑椹、茯苓、靈芝、丹參、合歡花、菊花，加10-15倍量水提取1-3 次，每次提取1-3小時(shí)，提取液濾過(guò)，合并，濃縮至在60°C測(cè)定相對(duì)密度約為1. 10-1. 15,得 水提浸膏，備用； c) 按比例稱取選凈的百合，粉碎成100目粉，備用； d)將步驟a)所得醇提浸膏和步驟b)的水提浸膏及步驟c)所得百合細(xì)粉干燥制粒， 整粒后，加入適當(dāng)輔料，混勻，壓片，包衣，即得。
[0015] 為了驗(yàn)證本發(fā)明的方法的可行性和精確度，作了如下的試驗(yàn)： 儀器精密度試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液IUL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果綠原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎寧酸面積的RSD分別為1. 22%、 L16%、L04%、0. 76%、L62%、L14% 和L22%，表明儀器精密度良好。
[0016] 穩(wěn)定性試驗(yàn) 吸取實(shí)施例1中的供試品溶液，分別于〇、2、4、8、12、24h，進(jìn)行測(cè)定，綠原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎寧酸峰面積的RSD分別為1. 24%、 1. 57%、1. 39%、I. 05%、0. 86%、0. 94%和1. 61%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
[0017] 重復(fù)性試驗(yàn) 按照實(shí)施例1中供試品溶液的制備方法制備6份，測(cè)定，結(jié)果樣品中綠原酸、芒果苷、二 苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡酰奎寧酸的RSD分別為1. 02%，1. 15%， 0. 92%，1. 05%，1. 02%，0. 89%和1. 15%，表明方法的重復(fù)性良好。
[0018] 回收率試驗(yàn) 精密稱取己知含量的樣品0. 5g，平行6份，分別加入一定量的對(duì)照品溶液，測(cè)定含量 并計(jì)算回收率，結(jié)果綠原酸、芒果苷、二苯乙烯苷、斯皮諾素、木犀草苷、槲皮苷、3, 5-二咖啡 酰奎寧酸的平均回收率為：96. 3%，98. 2%，100. 5%，99. 3%，97. 7%，97. 0%，96. 4%，RSD分別為 2. 06%，0. 54%，1. 44%，2. 04%，0. 18%，1. 42%，0. 95%，表明方法準(zhǔn)確可靠。
[0019] 取5批次該中藥組合物片劑，計(jì)算結(jié)果如下

【權(quán)利要求】
1. 一種中藥組合物制劑中走種成分的含量測(cè)定方法，該中藥組合物制劑由下列重量 份的原料藥制成：何首烏150-270、酸巧仁145-275、桑植160-255、 靈芝80-135、百合 75-160、知母 50-110、丹參 120-200、菊花 45-120、巧冬 75-145、 合歡花 165-288,其 特征在于該含量測(cè)定方法由W下步驟組成： A、 供試品溶液的制備；稱取該中藥組合物制劑l-2g，加甲醇50ml，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，搖勻，即得； B、 對(duì)照樣品溶液的制備：分別稱取綠原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀草巧、 搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎寧酸對(duì)照品，加甲醇，搖勻，即得各對(duì)照品溶液； C、 UPLC檢測(cè)；色譜柱為C18,柱溫4(TC，流動(dòng)相為己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脫；0-2min，10% 己膳，90% 的 0. 1% 磯酸；2-2. 5min，10-12% 己膳，90-88% 的 0. 1% 磯酸； 2. 5-20min，12% 己膳，88% 的 0. 1% 磯酸；20-21min，12-95% 己膳，88-5% 的 0. 1% 磯酸；檢測(cè)波 長(zhǎng) 340nm,流速為 0. 2-0. 4ml/min ; D、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果：分別將綠原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀 草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎寧酸對(duì)照品溶液0. 5-5. OmL注入步驟C中超高效色譜儀中分 析，W色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得到各對(duì)照樣品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將供 試樣品溶液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到綠原酸、芒果 巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎寧酸的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟A中用0. 2 y m濾膜過(guò)濾； 所述步驟C中色譜柱為AC卵ITY 邸H C18，規(guī)格為1. 7 y m，2. 1 X lOOmm,流速為0. 4 ml/ mi打。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定方法，其特征在于： A、 供試品溶液的制備；稱取該中藥組合物制劑l-2g，加甲醇50ml，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，搖勻，即得； B、 對(duì)照樣品溶液的制備：分別稱取綠原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀草巧、 搬皮巧、3,5-二咖啡醜奎寧酸對(duì)照品，加甲醇，搖勻，即得各對(duì)照品溶液，綠原酸濃度為 0. 032 mg. m。、芒果巧濃度為0. 051mg. m。、二苯己帰巧0. 492mg. m。、斯皮諾素0. 041mg. m。、木犀草巧 0. 021mg. m。、搬皮巧 0. 213mg. mL-i、3, 5-二咖啡醜奎寧酸 0. 047mg. mL-i ; C、 UPLC檢測(cè)；色譜柱為C18，柱溫4(TC，流動(dòng)相為己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脫；0-2min，10% 己膳，90% 的 0. 1% 磯酸；2-2. 5min，10-12% 己膳，90-88% 的 0. 1% 磯酸； 2. 5-20min，12% 己膳，88% 的 0. 1% 磯酸；20-21min，12-95% 己膳，88-5% 的 0. 1% 磯酸；檢測(cè)波 長(zhǎng) 340nm,流速為 0. 2-0. 4ml/min ; 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定及計(jì)算結(jié)果：分別將綠原酸、芒果巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀草 巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎寧酸對(duì)照品溶液0. 5-5. OmL注入步驟C中超高效色譜儀中分 析，W色譜峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得到各對(duì)照樣品溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將供 試樣品溶液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，得到綠原酸、芒果 巧、二苯己帰巧、斯皮諾素、木犀草巧、搬皮巧、3, 5-二咖啡醜奎寧酸的含量。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的測(cè)定方法，其特征在于該中藥組合物原料藥的重量 份比例為： 何首烏200 酸巧仁200 桑植200 靈芝100 百合100 知母66. 7 丹參166. 7 菊花66. 7 巧冬100 合歡花200。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的測(cè)定方法，其特征在于所述藥物劑型為膠囊劑、片 劑或丸劑。
6. 權(quán)利要求5所述的測(cè)定方法，其特征在于所述片劑的制備方法包括W下步驟： a) 按比例稱取選凈的何首烏、知母及選凈粗碎的酸巧仁，加6-12倍量30%-70%己醇， 加熱回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，提取液過(guò)濾，合并，減壓回收己醇，濃縮至在6(TC測(cè)定 相對(duì)密度為1. 10-1. 15,得醇提浸膏，備用； b) 按比例稱取選凈的桑植、巧冬、靈芝、丹參、合歡花、菊花，加10-15倍量水提取1-3 次，每次提取1-3小時(shí)，提取液濾過(guò)，合并，濃縮至在6(TC測(cè)定相對(duì)密度約為1. 10-1. 15,得 水提浸膏，備用； C)按比例稱取選凈的百合，粉碎成100目粉，備用； d)將步驟a)所得醇提浸膏和步驟b)的水提浸膏及步驟C)所得百合細(xì)粉干燥制粒， 整粒后，加入適當(dāng)輔料，混勻，壓片，包衣，即得。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104345110SQ201310342955
【公開日】2015年2月11日 申請(qǐng)日期:2013年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月8日
【發(fā)明者】劉敏彥, 趙韶華, 高學(xué)東, 張晨光 申請(qǐng)人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司