免疫層析用裝置制造方法
【專利摘要】提供一種高定量性的免疫層析用裝置。該免疫層析用裝置形成為，包含玻璃板，該玻璃板具有：用于將含有抗原的樣品向所述裝置添加的樣品添加部，用于將由樣品添加部添加的樣品從裝置中回收的樣品回收部，用于使樣品從樣品添加部移動(dòng)至樣品回收部的展開(kāi)部，以及存在于展開(kāi)部中、用于承載與抗原結(jié)合的抗體的抗體承載部；展開(kāi)部含有透明板，玻璃板和透明板之間具有可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在展開(kāi)部中移動(dòng)的間隔而平行地設(shè)置。
【專利說(shuō)明】免疫層析用裝置
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
本發(fā)明涉及一種免疫層析(immunochromatography )用裝置。
[0002]【背景技術(shù)】
當(dāng)前，免疫層析法作為流感病毒等的抗原檢查工具而廣泛使用(例如參照專利文獻(xiàn)I )。其中，硝化纖維素或玻璃纖維濾紙等用作為樣品的載體(例如參照專利文獻(xiàn)I)。
[0003]專利文獻(xiàn)1:日本特愿2009 - 159020公開(kāi)公報(bào)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種高定量性的免疫層析用裝置。
[0005]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式提供一種免疫層析用裝置，其包含玻璃板，該玻璃板具有:樣品添加部，其用于將含有抗原的樣品向所述裝置添加；樣品回收部，其用于將由所述樣品添加部添加的樣品從裝置中回收；展開(kāi)部，其用于使所述樣品從所述樣品添加部移動(dòng)至所述樣品回收部；以及抗體承載部，其存在于所述展開(kāi)部中，用于承載與所述抗原結(jié)合的抗體；所述展開(kāi)部含有透明板，所述玻璃板和所述透明板之間具有可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在所述展開(kāi)部中移動(dòng)的間隔而平行地設(shè)置。優(yōu)選所述間隔為3?50 μ m。另外，優(yōu)選所述玻璃板中的所述展開(kāi)部或所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成。并且，優(yōu)選所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度為0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度為0.1 一 150.0 μ m，凸出的間隔為 10 — 2000 μ m。
[0006]或者，優(yōu)選在所述透明板中，與所述玻璃板中的所述展開(kāi)部及/或所述抗體承載部的表面粗糙的玻璃相對(duì)的部分由表面粗糙的玻璃構(gòu)成。并且，優(yōu)選所述玻璃板和所述透明板中的所述展開(kāi)部及所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成，不存在用于保持所述玻璃板和所述透明板之間的間隔的分隔件。
[0007]本發(fā)明的另一實(shí)施方式為一種用于使用免疫層析用裝置檢測(cè)樣品中的抗原的檢測(cè)方法，所述裝置包含玻璃板，該玻璃板具有:樣品添加部，其用于將所述樣品向所述裝置添加；樣品回收部，其用于將由所述樣品添加部添加的樣品從裝置中回收；展開(kāi)部，其用于使所述樣品從所述樣品添加部移動(dòng)至所述樣品回收部；以及抗體承載部，其存在于所述展開(kāi)部中，用于與所述抗原結(jié)合；所述展開(kāi)部含有透明板，該透明板與所述玻璃板平行地設(shè)置，兩者之間具有可以使所述樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在所述展開(kāi)部中移動(dòng)的間隔；所述檢測(cè)方法包含下述工序，即:將所述樣品向所述樣品添加部添加并在所述展開(kāi)部中展開(kāi)的工序；由所述樣品回收部將在所述展開(kāi)部中展開(kāi)的所述樣品進(jìn)行回收的工序；以及檢測(cè)與所述抗體承載部結(jié)合的所述抗原的工序，所述展開(kāi)部或所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成，所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度為0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度為0.1 一150.0 μ m，凸出的間隔為10 — 2000 μ m。
[0008]發(fā)明的效果
根據(jù)本發(fā)明，可以提供一種高定量性的免疫層析用裝置?！緦＠綀D】

【附圖說(shuō)明】
[0009]圖1是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的免疫層析用裝置的示意圖。
[0010]圖2是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的免疫層析用裝置的構(gòu)成部件的示意圖。
[0011]圖3是表示使用本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式的免疫層析用裝置進(jìn)行的免疫層析法的流程的圖。
[0012]圖4是本發(fā)明的其它實(shí)施方式的免疫層析用裝置的示意圖。
[0013]圖5是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，沒(méi)有分隔件而將兩片玻璃直接貼合的免疫層析用裝置的示意圖。
[0014]圖6是表示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，使用本發(fā)明的免疫層析芯片進(jìn)行的免疫層析的結(jié)果的曲線圖。
[0015]標(biāo)號(hào)的說(shuō)明
10免疫層析用裝置 11樣品添加部 12樣品回收部 13展開(kāi)部 14抗體承載部 15玻璃板 16透明板 17分隔件 18液體吸收體 19器具
20陽(yáng)性對(duì)比部。
[0016]【具體實(shí)施方式】
本發(fā)明的目的、特征、益處及其構(gòu)思都可以通過(guò)本說(shuō)明書(shū)的記載而使本領(lǐng)域的技術(shù)人員了解，根據(jù)本說(shuō)明書(shū)的記載，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地再現(xiàn)本發(fā)明。下面記載的發(fā)明的實(shí)施方式及具體實(shí)施例等僅示出本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，是用于進(jìn)行例示或說(shuō)明的，并不由此限定本發(fā)明。本領(lǐng)域的技術(shù)人員明確地是，可以在本說(shuō)明書(shū)所公開(kāi)的本發(fā)明的意圖及范圍內(nèi)，基于本說(shuō)明書(shū)的記載而進(jìn)行各種改變及修飾。
[0017]==免疫層析用裝置==
本發(fā)明的免疫層析用裝置10具有玻璃板15，該玻璃板15包含:(I)用于將含有抗原的樣品向裝置10添加的樣品添加部11，(2)用于將添加到樣品添加部11中的樣品從裝置10中回收的樣品回收部12，(3)用于使樣品從樣品添加部11移動(dòng)至樣品回收部12的展開(kāi)部13，(4)存在于展開(kāi)部13中、用于承載與樣品的抗原結(jié)合的抗體的抗體承載部14。另外，在利用夾心法檢測(cè)樣品中的抗原的情況下(方法的詳細(xì)內(nèi)容在后面記述)，也可以具有(5)存在于展開(kāi)部中、用于承載對(duì)抗原的標(biāo)記抗體進(jìn)行識(shí)別的2次抗體的陽(yáng)性對(duì)比部20。圖1示出裝置的一個(gè)實(shí)施方式。
[0018]該玻璃板15可以是表面光滑的玻璃也可以是表面粗糙的玻璃，但優(yōu)選玻璃板15的展開(kāi)部13及抗體承載部14由表面粗糙的玻璃構(gòu)成。優(yōu)選該表面粗糙的玻璃的平均粗糙度(Ra)為0.01 — 20.0 μ m，更優(yōu)選為0.05 一 10.0 μ m，進(jìn)一步優(yōu)選為0.1 一 Ιμπι，進(jìn)一步優(yōu)選為0.2 — 0.3 μ m，特別優(yōu)選為0.226 一 0.252 μ m。另外，該表面粗糙的玻璃的凸出的最大深度(Rz)優(yōu)選為0.1 - 150.0 μ m，更優(yōu)選為0.5 — 100.0 μ m，進(jìn)一步優(yōu)選為1.0 —10.0 μ m，進(jìn)一步優(yōu)選為2.0 — 3.0 μ m，特別優(yōu)選為2.19 - 2.70 μ m。另外，該表面粗糙的玻璃的凸出的間隔(Sm)優(yōu)選為10 - 2000 μ m,更優(yōu)選為30 — 1000 μ m,進(jìn)一步優(yōu)選為50 —500 μ m，進(jìn)一步優(yōu)選為100 - 200 μ m，特別優(yōu)選為165 — 179 μ m。此外，平均粗糙度(Ra)、最大深度(Rz)、凸出的間隔(Sm)都使用在JIS B0601中規(guī)定的定義。如上所述，通過(guò)使抗體承載部14形成為表面粗糙的玻璃，從而可以增加能夠承載的抗體的量。另外，在將抗體承載部14形成為表面粗糙的玻璃的情況下，如果展開(kāi)部13也形成為表面粗糙的玻璃，就會(huì)比較容易制造。
[0019]展開(kāi)部具有透明板16，玻璃板15和透明板16之間具有可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象導(dǎo)入展開(kāi)部中的間隔而平行地設(shè)置。該玻璃板15和透明板16之間也可以利用分隔件等保持間隔，但也可以使展開(kāi)部從板的表面凹下而由此保持間隔。在后者的情況下，并不特別需要分隔件。玻璃板15和透明板16之間的間隔只要可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在展開(kāi)部中移動(dòng)即可，并不特別限定，可以是I?100 μ m,優(yōu)選為3?50 μ m,最優(yōu)選為5?30 μ m。透明板16只要是可以用于免疫層析的板即可，其材料并不特別限定，例如可以是玻璃板，也可以是丙烯板或聚丙烯板等塑料板。在這里，所謂“透明板”不僅是在干燥狀態(tài)下透明的板，也包括在進(jìn)行免疫層析法時(shí)、例如在展開(kāi)部13被緩沖液浸濕時(shí)變得透明的板，具體地說(shuō)，還包括表面粗糙的玻璃或表面粗糙的塑料。在透明板16為玻璃板的情況下，可以是表面光滑的玻璃也可以是表面粗糙的玻璃，但優(yōu)選展開(kāi)部13為表面粗糙的玻璃。另外，玻璃板15和透明板16之間可以分離，也可以直接或經(jīng)由分隔件等間接粘接。
[0020]該裝置10也可以具有用于保持玻璃板15和透明板16之間的間隔的分隔件17。分隔件17的厚度與玻璃板15和透明板16之間的間隔相同，可以是I?100 μ m，優(yōu)選為3?50 μ m,最優(yōu)選為5?30 μ m。分隔件17的材料并不特別限定，但優(yōu)選為丙烯等塑料、玻璃等可以以加工至與玻璃板15和透明板16能夠緊密接觸的材料。另外，這里所謂的分隔件17只要可以在展開(kāi)部13中確保玻璃板15和透明板16的間隔即可，形狀并不特別限定，可以是正方體或長(zhǎng)方體等以板狀或線狀的形狀與玻璃板15或透明板16在較大區(qū)域內(nèi)粘接的形狀，也可以是前端形成為尖端而以點(diǎn)狀與玻璃板15或透明板16粘接的形狀。分隔件17的數(shù)量也并不特別限定，可以與其形狀對(duì)應(yīng)而適當(dāng)?shù)貨Q定。另外，也可以在玻璃板15或透明板16的表面涂覆樹(shù)脂或油墨等，也可以進(jìn)行印刷。并且，優(yōu)選玻璃板15、透明板16和配置在展開(kāi)部的左右兩側(cè)的分隔件17以使得流過(guò)展開(kāi)部13的樣品不會(huì)從展開(kāi)部13脫落而漏出的方式緊密結(jié)合。玻璃板15、透明板16及分隔件17可以分別利用粘接劑等粘接，也可以利用夾具等壓接。
[0021]在玻璃板15和透明板16的展開(kāi)部13這兩者都是通過(guò)對(duì)表面光滑的玻璃切削而制作成的表面粗糙的玻璃的情況下，則如圖5所示，通過(guò)使玻璃板15及透明板16的、夾著展開(kāi)部13的左右兩側(cè)形成光滑面，無(wú)需分隔件而將兩片玻璃直接貼合，從而可以制作裝置
10。通過(guò)將表面光滑的玻璃彼此貼合，從而在表面粗糙的部分的貼合位置處，產(chǎn)生可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象而在展開(kāi)部13中移動(dòng)的間隔，利用該兩側(cè)的表面光滑的玻璃可以抑制樣品漏出。在此情況下，構(gòu)成透明板16的表面粗糙的玻璃也可以適用與針對(duì)玻璃板15記述的條件相同的表面粗糙的玻璃條件。[0022]==免疫層析法==
使用上述免疫層析用裝置10的免疫層析法可以是競(jìng)爭(zhēng)法、夾心法等，并不特別限定，作為一個(gè)例子，下面記述夾心法。
[0023]首先，在玻璃板15的抗體承載部14中，將用于與樣品中含有的抗原直接或間接結(jié)合的抗體固相化。該固相化方法并不特別限定，可以利用硅烷耦合法，硅生物法(日本特愿2006 - 135572號(hào)發(fā)明專利申請(qǐng))等，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法進(jìn)行固相化。然后，設(shè)置分隔件17及透明板16等而組裝裝置10 (圖2)。
[0024]另一方面，將包含作為調(diào)查對(duì)象的抗原的樣品，與針對(duì)該抗原的標(biāo)記抗體進(jìn)行混合。標(biāo)記并不特別限定，可以使用例如酶、膠體金、膠體鉬-金、熒光色素等。將含有標(biāo)記抗體以及與標(biāo)記抗體結(jié)合后的抗原的樣品，向第I玻璃板15上的樣品添加部11中添加，將樣品導(dǎo)入展開(kāi)部13 (圖3A)。該導(dǎo)入可以利用移液器(pipetman)或微型吸管等器具19直接進(jìn)行，也可以通過(guò)樣品墊等進(jìn)行。另外，也可以替代針對(duì)抗原的標(biāo)記抗體而使用針對(duì)抗原的I次抗體及針對(duì)I次抗體的標(biāo)記2次抗體。另外，在抗體承載部14上固相化的抗體可以是直接與抗原結(jié)合的抗體，也可是特異性識(shí)別針對(duì)抗原的I次抗體、從而間接與抗原結(jié)合的2次抗體。如上所述，這些技術(shù)的應(yīng)用技術(shù)存在很多，它們都落在本發(fā)明的技術(shù)范圍內(nèi)。
[0025]然后，導(dǎo)入展開(kāi)部13中的樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象而在展開(kāi)部13展開(kāi)并移動(dòng)，越過(guò)抗體承載部14而到達(dá)樣品回收部12 (圖3B)。因此，從樣品回收部12回收樣品，可以是全部回收，也可以是在展開(kāi)部13中殘留一部分樣品。如果殘留物會(huì)成為測(cè)量的障礙，也可以在通過(guò)樣品后，僅通過(guò)不含有膠體金的緩沖液，對(duì)展開(kāi)部13進(jìn)行清洗?；厥盏姆椒ú⒉惶貏e限定，可以利用移液器或微型吸管等進(jìn)行回收，也可以在樣品回收部12處放置樣品墊或海綿、濾紙等液體吸收體18，從而使樣品浸入而進(jìn)行回收(圖3C、圖4)。
[0026]在該作業(yè)時(shí)，為了提高定量性，優(yōu)選以使得樣品全部通過(guò)抗體承載部14的方式將抗體固相化。例如，在展開(kāi)部13為密封的通路狀，其入口和出口分別設(shè)置樣品添加部11和樣品回收部12的情況下，以橫穿通路的方式承載抗體，則如果樣品通過(guò)通路，就必然通過(guò)所承載的抗體上，由此，可以最大限度的靈活應(yīng)用抗體承載部14的抗原結(jié)合活性，可以盡可能多地回收抗原。相同地，在設(shè)置陽(yáng)性對(duì)比部20的情況下，也為了最大限度地發(fā)揮其效果，而優(yōu)選在抗體承載部14和樣品回收部12之間，以橫穿通路的方式承載針對(duì)標(biāo)記抗體的抗體。
[0027]然后，只要檢測(cè)與抗體承載部14結(jié)合的抗原即可，但如上所述使用了針對(duì)其抗原的標(biāo)記抗體的情況下，只要對(duì)抗體承載部14上捕獲的標(biāo)記抗體以標(biāo)記為指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)即可。例如在標(biāo)記為酶的情況下，可以與樣品相同地將基質(zhì)溶液在展開(kāi)部13中展開(kāi)，與酶發(fā)生反應(yīng)而顯色，在標(biāo)記為熒光素酶等的情況下，通過(guò)相同地施加蟲(chóng)熒光素等基質(zhì)，就可以發(fā)光。另外,在突光黃(fluorescein)等的突光素的情況下,可以通過(guò)激發(fā)而使其放出突光。在裝置10具有陽(yáng)性對(duì)比部20的情況下，將樣品中混合的標(biāo)記抗體與陽(yáng)性對(duì)比部20的抗體結(jié)合，從而陽(yáng)性對(duì)比部20也顯色或發(fā)光。
[0028]最后，利用標(biāo)記而顯色的檢測(cè)方法并沒(méi)有特別限定，可以利用玻璃板15及透明板16的透明性，利用透射光檢測(cè)標(biāo)記的顯色。例如，可以將適當(dāng)選擇的波長(zhǎng)的光從上部向抗體承載部照射，通過(guò)對(duì)透射光的量進(jìn)行分析而對(duì)信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行定量。另外，可以在對(duì)色箱上放置顯色后的裝置10，將利用ccd照相機(jī)拍攝的數(shù)字照片利用分析軟件對(duì)信號(hào)的濃度進(jìn)行定量?；蛘撸部梢栽诎准埳戏胖蔑@色后的裝置，對(duì)反射光進(jìn)行檢測(cè)。為了精確地進(jìn)行定量，優(yōu)選繪制每次檢測(cè)量的變化曲線，但通過(guò)盡可能使條件恒定，則可以根據(jù)信號(hào)的濃度直接計(jì)算出抗原的濃度。
[0029]【實(shí)施例】
(1)免疫層析芯片的制作
一邊攪拌99mL的水一邊加入0.5mL的醋酸,并且滴入0.5mL的3_Glycidyloxypropyl-trimethoxysilane,在室溫下攪拌I個(gè)小時(shí)。在該溶液中以室溫浸潰一晚5mmX25mm的單面粗糙的玻璃板或表面光滑的玻璃板。然后，用水清洗玻璃板并風(fēng)干，以115°C加熱5分鐘，使玻璃表面活性化。所使用的表面粗糙的玻璃板的特征如下述表1所示。
[0030]【表1】
【權(quán)利要求】
1.一種免疫層析用裝置，其特征在于， 包含玻璃板，該玻璃板具有: 樣品添加部，其用于將含有抗原的樣品向所述裝置添加； 樣品回收部，其用于將由所述樣品添加部添加的樣品從裝置中回收； 展開(kāi)部，其用于使所述樣品從所述樣品添加部移動(dòng)至所述樣品回收部；以及 抗體承載部，其存在于所述展開(kāi)部中，用于承載與所述抗原結(jié)合的抗體， 所述展開(kāi)部含有透明板， 所述玻璃板和所述透明板之間具有可以使樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在所述展開(kāi)部中移動(dòng)的間隔而平行地設(shè)置。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析用裝置，其特征在于， 所述間隔為3?50 μ m。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的免疫層析用裝置，其特征在于， 所述玻璃板中的所述展開(kāi)部或所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的免疫層析用裝置，其特征在于， 所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度為0.01 - 20.0 μ m，凸出的最大深度為0.1 一150.0 μ m，凸出的間隔為10 — 2000 μ m。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的免疫層析用裝置，其特征在于， 在所述透明板中，與所述玻璃板中的所述展開(kāi)部及/或所述抗體承載部的表面粗糙的玻璃相對(duì)的部分由表面粗糙的玻璃構(gòu)成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的免疫層析用裝置，其特征在于， 所述玻璃板和所述透明板中的所述展開(kāi)部及所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成，不存在用于保持所述玻璃板和所述透明板之間的間隔的分隔件。
7.—種檢測(cè)方法，其是用于使用免疫層析用裝置檢測(cè)樣品中的抗原的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法的特征在于， 所述裝置包含玻璃板，該玻璃板具有: 樣品添加部，其用于將所述樣品向所述裝置添加； 樣品回收部，其用于將由所述樣品添加部添加的樣品從裝置中回收； 展開(kāi)部，其用于使所述樣品從所述樣品添加部移動(dòng)至所述樣品回收部；以及 抗體承載部，其存在于所述展開(kāi)部中，用于與所述抗原結(jié)合， 所述展開(kāi)部含有透明板，該透明板與所述玻璃板平行地設(shè)置，兩者之間具有可以使所述樣品利用毛細(xì)現(xiàn)象在所述展開(kāi)部中移動(dòng)的間隔， 所述檢測(cè)方法包含下述工序，即: 將所述樣品向所述樣品添加部添加并在所述展開(kāi)部中展開(kāi)的工序； 由所述樣品回收部將在所述展開(kāi)部中展開(kāi)的所述樣品進(jìn)行回收的工序；以及 檢測(cè)與所述抗體承載部結(jié)合的所述抗原的工序， 所述展開(kāi)部或所述抗體承載部由表面粗糙的玻璃構(gòu)成，所述表面粗糙的玻璃的平均粗糙度為0.01 — 20.0 μ m，凸出的最大深度為0.1 — 150.0 μ m，凸出的間隔為10 — 2000 μ m。
【文檔編號(hào)】G01N33/558GK103630680SQ201310366481
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年8月21日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月22日
【發(fā)明者】本莊勉 申請(qǐng)人:森永制果株式會(huì)社