化妝品中二乙醇胺的快速檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種化妝品中二乙醇胺的快速檢測方法：稱取少量的化妝品，加入一定量的乙醇，經(jīng)水浴超聲輔助浸提(UAE)后，采用高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLS-MS/MS)實現(xiàn)目標(biāo)化合物的定性定量。本發(fā)明有效地解決了化妝品及其原料中二乙醇胺的測定，對選定的目標(biāo)化合物分析得到了滿意的結(jié)果，具有有機溶劑用量少、萃取速度快、雜質(zhì)干擾少、樣品回收率高等優(yōu)點，可適用于化妝品及其原料中二乙醇胺殘留的快速檢測。
【專利說明】化妝品中二乙醇胺的快速檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化學(xué)儀器檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及化妝品及原料中二乙醇胺的快速樣品處理技術(shù)與檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]乙醇胺是環(huán)氧乙烷與氨反應(yīng)得到的重要精細(xì)化工產(chǎn)品，單乙醇胺(MEA)、二乙醇胺(DEA)和三乙醇胺(TEA)是氨基醇中最有價值的產(chǎn)品，其產(chǎn)量占氨基醇總量的90-95%，廣泛用于聚氨酯制品、表面活性劑、醫(yī)藥、氣體凈化、橡膠加工、紡織等領(lǐng)域，用作化學(xué)試劑、農(nóng)藥、醫(yī)藥、溶劑、染料中間體、橡膠促進(jìn)劑、腐蝕抑制劑及表面活性劑等。乙醇胺類物質(zhì)主要作為化妝品中的保濕劑或與月桂酸等反應(yīng)作為化妝品中的乳化劑和分散劑使用，也用作各類洗滌劑和美容護(hù)膚品(包括皮膚洗滌、眼膠、保濕、洗發(fā)劑等)的PH平衡劑，是化妝品中常用的有機堿。
[0003]由于通過環(huán)氧乙烷和氨反應(yīng)制取混合乙醇胺的技術(shù)難度不大，其確保相關(guān)產(chǎn)品品質(zhì)的關(guān)鍵是如何有效實現(xiàn)混合乙醇胺的單體分離，選擇性地提高單乙醇胺(MEA)和三乙醇胺(TEA)的得率，因此，歐洲藥典和我國化工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)都將三乙醇胺中單乙醇胺和二乙醇胺列為質(zhì)量控制指標(biāo)。
[0004]乙醇胺廣泛分布在生物組織中，是卵磷脂的組成成份，因其同時具有羥基和氨基，可發(fā)生醇類和胺類所特有的反應(yīng)，故呈現(xiàn)一定的刺激性，手部皮膚直接接觸可能引起皮炎和濕疹。尤其是二乙醇胺，高劑量接觸有潛在的致畸性，長期接觸會導(dǎo)致試驗動物肝、腎器官的損害，為此，美國將乙醇胺列入其非直接用食品添加劑目錄并設(shè)定化妝品及原料中二乙醇胺的最低限量，歐盟EU1223/2009和日本厚生勞動省告示第331號規(guī)定的限用物質(zhì)，我國也于2009年出臺了化妝品中乙醇胺的限量標(biāo)準(zhǔn)和判定規(guī)則，對所用原料中雜質(zhì)二乙醇胺的殘留也提出與《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》所規(guī)定的仲鏈烷胺限量((0.5%)保持一致。
[0005]國內(nèi)外已經(jīng)建立一些針對不同樣品中乙醇胺類物質(zhì)的檢測方法,如氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳法、伏安法等，對表面活性劑產(chǎn)品、洗滌劑和化妝品中的乙醇胺主要以氣相色譜方法為主?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)SN/T2107-2008中采用氣象色譜法進(jìn)行分離測定，用氣象色譜質(zhì)譜法進(jìn)行確證，但檢出限較高，樣品雜質(zhì)干擾較多。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是建立一種有關(guān)化妝品及原料中二乙醇胺含量檢測的樣品處理技術(shù)與快速分析方法。
[0007]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:化妝品中二乙醇胺的快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟:(1)稱取少量化妝品，加入乙醇并經(jīng)水浴超聲輔助浸提UAE混勻，
[0008](2)取上述一定體積溶液離心后濾膜過濾，
[0009](3)通過高效液相色譜分離及串聯(lián)質(zhì)譜定性定量檢測二乙醇胺，高效液相色譜條件為:采用等體積的乙腈與5m mol/L的乙酸銨(pH=3.7)為流動相,流速0.2_0.4mL/min,進(jìn)樣體積15-25 μ L，柱溫箱25-35°C ；
[0010]質(zhì)譜測定條件為:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描，離子源:電壓350kV，鞘氣:30-40arb,輔助氣 8_12arb，柱溫 260_300°C，汽化溫度 350_380°C。
[0011]優(yōu)選地，所述步驟(3)中的高效液相色譜條件為:采用等體積的乙腈與5m mol/L的乙酸銨(pH=3.7)為流動相，流速0.3mL/min,進(jìn)樣體積20 μ L，柱溫箱30°C ；
[0012]質(zhì)譜測定條件為:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描，離子源:電壓350kV，鞘氣:35arb，輔助氣IOarb，柱溫270°C，汽化溫度350°C。
[0013]優(yōu)選地，所述步驟(I)中的超聲輔助浸提條件為:超聲功率300Watt，頻率40kHz，超聲處理15min。
[0014]優(yōu)選地,所述步驟(2)中的離心條件為:轉(zhuǎn)速6000r/min離心15min,離心后的上清液經(jīng)0.22 μ m，有機相濾膜過濾
[0015]其中，待測樣品的加入量為1.0OOOg左右，乙醇的添加量為10mL，最后確認(rèn)目標(biāo)物存在的特征離子為:m/zl06.1、88和70amu。
[0016]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明針對涉及與人體直接接觸的化妝品所含二乙醇胺的殘留建立了超聲輔助(UAE)高效液相質(zhì)譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)快速分析方法，在實驗選定的工作條件下，用乙醇超聲輔助(UAE)法提取樣品中的目標(biāo)化合物二乙醇胺，通過高效液相質(zhì)譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)實現(xiàn)目標(biāo)化合物的定性定量。研究通過對測定條件優(yōu)化，完善了化妝品中樣品處理的提取程序，該方法對化妝品樣品中二乙醇胺的檢測限為
0.05%，加標(biāo)回收率大于90%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。該發(fā)明具有有機溶劑用量少、萃取速度快、雜質(zhì)干擾少、樣品回收率高等突出優(yōu)點，可滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)所列二乙醇胺殘留安全限量的檢測要求。
[0017]本發(fā)明考慮樣品所含等強親水性基團(tuán)或鏈段的極性組分不利于氣相色譜分離，建立基于高效液相-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(HPLC-MS/MS)的分析方法:將稱取少量的樣品置于錐形瓶中，加入適量的乙醇并經(jīng)超聲處理后，取一定體積溶液在離心、過濾，濾液經(jīng)高效液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)分析確認(rèn)目標(biāo)化合物，外標(biāo)法定量。該研究通過對可能影響測定的各項因素進(jìn)行了實驗條件的優(yōu)化，對選定的目標(biāo)化合物分析得到了滿意的結(jié)果，可適用于化妝品及原料中目標(biāo)物的快速檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
[0019]圖1為二乙醇胺的質(zhì)譜圖。
[0020]圖2為二乙醇胺色譜圖。
【具體實施方式】
[0021]根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0022]實施例:實樣分析的驗證。
[0023]I材料和方法[0024]1.1.儀器與試劑:
[0025]HP6890GC 氣相色譜儀配 5975MSD，Angi I ent TM (CA, US)；HP-5 (15mX 0.25mm X 0.25 μ m, Fused silica capillary column), Angilent TM (CA, US)；Branson 200ULTRAS0NIC Cleaner 超聲波機，fcanson TM(MI, USA);色譜樣品瓶:22ML，La-pha-packTM(Frankfurt, GM)。色譜柱為 Acclaim ? Trinity3.0 μ m, 2.lxlOOmm。
[0026]乙醇(Ethanol):HPLC 級，購自 Aldrich-Sigma TM (USA);乙臆(Acetonitrile):HPLC 級，購自 Aldrich-Sigma TM(USA);純水(Water):HPLC 級，購自 MERCK TM(NJ, USA)；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):二乙醇胺(Diethylamine, CAS N0.111-42-2/EINECS N0.228-466-2):AR.,購自Aldrich-Sigma TM(USA) ;二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備::準(zhǔn)確稱取一定量的二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)品，配成濃度為lOOmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙醇稀釋并定容，配成質(zhì)量濃度為100 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，準(zhǔn)確在密封避光的條件下可保存一周。使用時根據(jù)實際需要以乙醇稀釋、混合后制成相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
[0027]1.2.儀器條件
[0028]液相色譜柱:Accl aim?Trinity3.0 μ m, 2.1xlOOmm ;流速 0.3mL/min,進(jìn)樣體積20 μ L，柱溫箱30°C，質(zhì)譜條件為:電噴霧離子源(ESI)，正離子掃描，離子源:電壓350kV，鞘氣:35arb，輔助氣lOarb，柱溫270°C，汽化溫度350°C。確證DEA存在的特征離子:106.1、88 和 70。
[0029]1.4.數(shù)據(jù)處理
[0030]實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行獨立樣本T檢驗統(tǒng)計分析，以P〈0.05為顯著性差異，P<0.01為極顯著性差異。
[0031]2實驗方法
[0032]2.1 二乙醇胺分析步驟
[0033]準(zhǔn)確稱取1.0g樣品(精確至0.0OOlg)，置于50mL的錐形瓶內(nèi)。加入IOmL乙醇并超聲處理15min。取5mL溶液置于IOmL的離心管中，在6000r/min的轉(zhuǎn)速下離心15min。將離心后的上清液過0.22 μ m的有機相濾膜，移取0.5mL濾液，并加入0.5mL的超純水，混勻后轉(zhuǎn)移進(jìn)樣品瓶供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析測定。若樣品的濃度過高，則用流動相稀釋到一個合適的濃度。
[0034]每個樣品測試均進(jìn)行3次平行實驗(精密度測定除外)，測定結(jié)果取其平均值。
[0035]2.2 二乙醇胺校準(zhǔn)曲線
[0036]分別準(zhǔn)確量取標(biāo)準(zhǔn)儲備液(100 μ g/L) 0.1、0.2、0.5、1、8mL于IOmL的容量瓶中，用乙醇稀釋并定容，配成質(zhì)量濃度為I μ g/L, 2 μ g/L, 5 μ g/L, 10 μ g/L, 80 μ g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在密封避光的條件下可保存一周。
[0037]將各濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲備液轉(zhuǎn)移進(jìn)樣品瓶中，按上述的操作方法進(jìn)樣，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析測定，二乙醇胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度作為橫坐標(biāo)繪制工作曲線。
[0038]2.3 二乙醇胺計算方法
[0039]本方法采用外標(biāo)法進(jìn)行定量，計算樣品中目標(biāo)化合物的值，公式如下:
cxV
[0040]W =-XlOO
1000/?[0041]式中:W:二乙醇胺的含量，% ；
[0042]c:利用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到樣品中二乙醇胺的質(zhì)量濃度，毫克/升(mg/L)；
[0043]V:樣品定容體積，升(L)；
[0044]m:樣品的質(zhì)量，克(g)。
[0045]3結(jié)果分析
[0046]3.1方法的線性與檢測限量
[0047]選用特征離子m/zl06.1、88和70amu測定(圖1)，在標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為5?500 μ g/L范圍內(nèi)，目標(biāo)物的線性方程為Y=15.05Χ+0.07，Y =0.9987，回歸分析表明，方法對選定的目標(biāo)化合物在上述濃度范圍內(nèi)具有良好的線性。以信噪比為10估算，目標(biāo)物的定量限(LOQ)為 0.lmg/kg,
[0048]3.2方法的精密度和回收率
[0049]以經(jīng)測定不含有目標(biāo)物的膏霜、水劑、香波等不同類型的化妝品樣品為基質(zhì)，添加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述方法用液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜進(jìn)樣測定，分別進(jìn)行添加回收率和精密度的測定。
[0050]在0.5?1.0mg/kg范圍內(nèi)2個添加水平的空白加標(biāo)平均回收率(每個添加濃度平行測定6次)為87.7%?103.1%，基質(zhì)加標(biāo)回收率為81.9%?95.8%。在日內(nèi)不同時間點和不同日期(5d內(nèi))測定的日內(nèi)精密度均小于10%，日間精密度均小于12%(表I)。
[0051]表I不同加標(biāo)水平下二乙醇胺的加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6) [0052]
【權(quán)利要求】
1.化妝品中二乙醇胺的快速檢測方法，其特征在于，包括如下步驟:(1)稱取少量化妝品，加入乙醇并經(jīng)水浴超聲輔助浸提UAE混勻， (2)取上述一定體積溶液離心后濾膜過濾， (3)通過高效液相色譜分離及串聯(lián)質(zhì)譜定性定量檢測二乙醇胺，高效液相色譜條件為:采用等體積的乙腈與5m mol/L的乙酸銨pH=3.7為流動相,流速0.2-0.4mL/min,進(jìn)樣體積15-25“1 ，柱溫箱 25-351:； 質(zhì)譜測定條件為:電噴霧離子源ESI，正離子掃描，離子源:電壓350kV，鞘氣:30-40arb,輔助氣 8_12arb，柱溫 260_300°C，汽化溫度 350_380°C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(3)中的高效液相色譜條件為:采用等體積的乙腈與5m mol/L的乙酸銨pH=3.7為流動相,流速0.3mL/min,進(jìn)樣體積2 柱溫箱301:； 質(zhì)譜測定條件為:電噴霧離子源ESI，正離子掃描，離子源:電壓350kV，鞘氣:35arb，輔助氣IOarb，柱溫270°C，汽化溫度350°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(I)中的超聲輔助浸提條件為:超聲功率300Watt，頻率40kHz，超聲處理15min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中的離心條件為:轉(zhuǎn)速6000r/min離心15min,離心后的上清液經(jīng)0.22 μ m,有機相濾膜過濾。
【文檔編號】G01N30/02GK103439423SQ201310374830
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月26日
【發(fā)明者】陳軍 申請人:陳軍, 中華人民共和國蘇州出入境檢驗檢疫局