一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，所述方法將反應(yīng)結(jié)束后的溶液吸光度細(xì)分為剩余試劑吸光度、消耗的試劑吸光度、生成物吸光度、樣品殘余物吸光度四個(gè)部分，通過選擇特定的次波長(zhǎng)可初步估算出試劑空白，并估算出樣品濃度后，從反應(yīng)結(jié)束的溶液吸光度中減去消耗的試劑的吸光度、生成物吸光度、樣品殘余物吸光度后，再次估算得到精確的試劑空白。采用本發(fā)明技術(shù)方案，無需實(shí)際測(cè)試試劑空白，原理清晰明了，計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確可靠，估算誤差小于1%，特別適用于無法直接測(cè)試試劑空白的儀器。
【專利說明】一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，由于科技的發(fā)展和個(gè)人、家庭、鄉(xiāng)村醫(yī)院、野外等各方面的迫切需要，便攜式醫(yī)療設(shè)備(POCT，Point of Care Test)已成為醫(yī)療設(shè)備發(fā)展的主要趨勢(shì)之一。在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，微流控技術(shù)與試劑凍干技術(shù)的結(jié)合，更是實(shí)現(xiàn)了在微流控芯片上實(shí)現(xiàn)微量全血的離心分離、定量、傳輸和幾個(gè)甚至幾十個(gè)生化指標(biāo)的同時(shí)檢測(cè)。且此類設(shè)備體積小、成本低、操作簡(jiǎn)單、結(jié)果即時(shí)可得，已成為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域便攜式檢驗(yàn)設(shè)備的最主要發(fā)展趨勢(shì)。
[0003]常規(guī)的生化檢測(cè)終點(diǎn)法測(cè)試中，在樣品沒有加入反應(yīng)杯之前，首先測(cè)量反應(yīng)杯中試劑空白的吸光度Al，再加入樣品，一定時(shí)間之后再次測(cè)量反應(yīng)結(jié)束后的吸光度A2，通過這兩次測(cè)量的光強(qiáng)值可以計(jì)算出樣品的濃度C=a*(A2_Al)，其中a為給定的摩爾吸收系數(shù)。而在POCT儀器中，為了簡(jiǎn)化操作步驟，降低人為因素對(duì)測(cè)量結(jié)果的影響，將生化試劑凍干并封裝于微流控芯片的比色杯中，微量全血經(jīng)離心分離后，血清與緩沖液混合進(jìn)入封裝有凍干試劑的比色杯內(nèi)將凍干試劑復(fù)溶并反應(yīng)，通過比色法計(jì)算樣品濃度。此過程中無法直接測(cè)試試劑空白，因此，一種能對(duì)試劑空白的精確估算的方法對(duì)于便攜式檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)設(shè)備具有非常重大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
在具體實(shí)施步驟之前，本發(fā)明首先提出一種反應(yīng)終點(diǎn)混合液等效組成方法:
首先，認(rèn)為反應(yīng)結(jié)束的混合液的吸光度
A/由剩余試劑吸光度生成物吸光度?:、樣品殘余物吸光度組成，
【權(quán)利要求】
1.一種精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，所述方法需同時(shí)測(cè)試反應(yīng)杯、樣品空白杯在主次波長(zhǎng)處終點(diǎn)吸光度，具體估算步驟如下: 步驟I)使用兩個(gè)比色杯同時(shí)進(jìn)行測(cè)試，其中一個(gè)放置樣品與試劑，另一個(gè)放置樣品空白；同時(shí)測(cè)得反應(yīng)結(jié)束主、次波長(zhǎng)吸光度A3X1,A3X2和樣品空白的主、次波長(zhǎng)處的吸光度A3X1,A3X2 ； 步驟2)初步估算試劑空白在次波長(zhǎng)處的吸光度[ARX2]評(píng)估≈ABX2-ASX2進(jìn)而估算試劑空白在主波長(zhǎng)處的吸光度為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，所述步驟(I) - (4)在測(cè)定待測(cè)樣品之前，需測(cè)定以下參數(shù): (1)測(cè)定單位濃度的綜合吸光度譜線玉人使用濃度
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，所述步驟(I)需選擇主次兩個(gè)波長(zhǎng)同時(shí)進(jìn)行測(cè)試，并將次波長(zhǎng)選擇在綜合吸光度:
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，試劑空白在主次波長(zhǎng)處的吸光度比例系數(shù)免為定值，并由此通過次波長(zhǎng)處的吸光度計(jì)算主波長(zhǎng)處的吸光度。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，由終點(diǎn)吸光度扣除樣品吸光度、預(yù)估試劑空白吸光度，得到吸光度變化并計(jì)算樣品濃度。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精確估算終點(diǎn)法試劑空白吸光度的方法，其特征在于，在所述步驟(4)中，通過在結(jié)束吸光度中扣除綜合吸光度、樣品吸光度，得到試劑空白吸光度。
【文檔編號(hào)】G01N21/31GK103454231SQ201310376664
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月27日
【發(fā)明者】黎海文, 周武平, 張濤, 姚佳, 劉聰, 吳一輝 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所