一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法及應(yīng)用，屬于新型納米功能材料與生物傳感【技術(shù)領(lǐng)域】。具體是基于氮摻雜石墨烯（N-GS）和Pd-Au/C負(fù)載型納米催化劑，制備一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原的夾心型電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測(cè)血清中的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原。其特征在于：（1）氮摻雜石墨烯的制備；（2）Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原的二抗復(fù)合物的制備；（3）電化學(xué)免疫傳感器的制備。Pd-Au/C對(duì)H2O2具有很強(qiáng)的催化能力，有利于固定更多的二抗、保持物質(zhì)生物活性，本發(fā)明制備的傳感器優(yōu)點(diǎn)在于，靈敏度高、特異性好、易于操作、檢測(cè)限低。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法及應(yīng)用。具體是基于氮摻雜石墨烯(N-GS)和Pd-Au/C負(fù)載型納米催化劑(Pd-Au/C)，制備一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原的夾心型電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測(cè)血清中的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原，屬于新型納米功能材料與生物傳感【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)是一種TA-4的亞型，并且屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑的卵白蛋白家族，廣泛存在于不同器官正常組織(含量極微)和惡性病變的上皮細(xì)胞中，是一種診斷鱗癌的腫瘤標(biāo)志物，本發(fā)明基于氮摻雜石墨烯(N-GS)以及Pd-Au/C制備鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原夾心型免疫傳感器。
[0003]N-GS為一種通過(guò)化學(xué)方法，將石墨烯上的部分碳原子替換為氮原子后的一種物質(zhì)。所謂“摻雜”，是指氮原子與碳原子在石墨烯上骨架上共存的一種狀態(tài)，具有高的還原水平，并且在多種溶劑中具有良好的分散性。N-GS是透明的薄紗狀結(jié)構(gòu)，并且具有大比表面積和良好的導(dǎo)電性。因此，由于N-GS具有良好的信號(hào)放大作用，使得N-GS被廣泛用于制作電子的傳輸介質(zhì)的電化學(xué)免疫傳感器。
[0004]Pd-Au/C負(fù)載型納米催化劑是一種活性碳負(fù)載的Pd-Au雙金屬合金催化劑，本發(fā)明利用Pd-Au/C負(fù)載型納米催化劑作為二抗標(biāo)記物，有利于固定更多的二抗、保持物質(zhì)生物活性，并且對(duì)H2O2具有很強(qiáng)的催化能力。本發(fā)明制得的生物傳感器的響應(yīng)電流與SCCA濃度在0.0050~2.0 ng/mL范圍內(nèi)保持良好的線(xiàn)性關(guān)系，檢測(cè)限為1.6 pg/mL。
[0005]本發(fā)明制備的傳感器具有靈敏度高、特異性好、檢測(cè)成本低、能快速檢測(cè)鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原等優(yōu)勢(shì)，有效克服了目前鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原檢測(cè)方法的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的之一在于提供了一種快速準(zhǔn)確檢測(cè)鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原的電化學(xué)免疫傳感器的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的之二是將該電化學(xué)免疫傳感器應(yīng)用于鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原的檢測(cè)。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下措施來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
[0009]一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)氧化石墨烯的合成
在 0.1 ~0.6 g 石墨和 0.6 ~4.0g KMnO4 中加入 40 mL、H2SO4-H3PO4 混合溶液，H2SO4和H3PO4體積比9:1，加熱至40-60 V，持續(xù)12h，停止反應(yīng)冷卻到室溫，在冰水浴中加入0.1~0.5 mL、體積分?jǐn)?shù)為30%的H2O2，磁力攪拌30~60 min，將混合物離心，分別用0.2mol.L-1 HCl,乙醇，乙醚進(jìn)行洗滌，洗滌2次；
(2)氮摻雜石墨烯(N-GS)的合成
將氧化石墨烯分散于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，配成0.5~2.0 mg/mL溶液，超聲30~60 min，將混合液在120~160 °C條件下，攪拌回流I~2 h，冷卻到室溫，在9000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心,50~60 °C真空干燥；
(3)鈀-金/碳(Pd-Au/C)的合成
30 ~100 mg 活性碳，1.0 ~5.0 mL、0.50 mo 1.171 的 PdCl2 溶液，0.5 ~1.0 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的HAuCl4溶液，依次加入5mL水和5mL四氫呋喃，超聲0.5h混勻，磁力攪拌 12 h，緩慢加入 10 ~30 mL 含有 0.1 mo 1.L-1NaBH4 和 0.05 mo 1.L-1Na2CO3 的混合溶液，磁力攪拌I h，得到的固體依次用水和乙醇進(jìn)行洗滌，洗滌完成后50~60 °C下真空干燥，制得鈕-金/碳納米材料(Pd-Au/C)；
(4)Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原二抗(Ab2)的制備
分別配制Pd-Au/C溶液和Ab2溶液，將Pd-Au/C溶液和Ab2溶液按1:1~2的體積比進(jìn)行混合，在10°C的光照培養(yǎng)箱內(nèi)孵化震蕩12~24 h，制得的Pd-Au/C-Ab2，用pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液清洗，保存在4 0C的冰箱內(nèi)備用。
[0010]所述的Pd-Au/C溶液的濃度為5~15 mg.πι?Λ所述的Ab2溶液的濃度為5~15μ g.mL 1 ο
[0011](5)電化學(xué)免疫傳感器的制備方法
1)將直徑4mm的玻碳電極依次用1.0,0.3和0.05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水沖洗干凈，然后將電極置于5~10 mmol.l-1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2~0.6 V電位下掃描，使峰電位差小于90 mV ；
2)將6μ?、0.4~2.0 mg .ml-1的N-GS溶液滴涂于電極表面，滴加3μ?、2.5%的戊二醛溶液于電極表面，室溫干燥；
3)將6μ?、5~15μ g.ml-1的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原一抗(Ab1)滴涂到步驟2) N-GS修飾的電極表面，置于4°C濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
4)將濃度為3μ?、100μg.mL—1牛血清白蛋白滴涂到步驟3) Ab1修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干；
5)將6μ?的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)分別滴涂在步驟4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
6 )將6μ?的Pd-Au/C-Ab2滴涂在步驟5 )SCCA修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，電化學(xué)免疫傳感器制備完成。
[0012](6)所述制備的電化學(xué)免疫傳感器用于SCCA的檢測(cè)，步驟如下:
1)采用0.066 mo I.L_\ pH = 7.4的磷酸鹽緩沖溶液,配制在5pg.mL-1~2ng.mL—1范圍內(nèi)不同濃度的SCCA溶液，將6 μ L不同濃度的SCCA溶液分別滴涂至上述步驟4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，晾干后，按照步驟6)修飾電極，連接至電化學(xué)工作站中，分別將電極置于10 mL含有3~6 mmol.mL—1 H2O2的pH=6.8的PBS緩沖溶液中測(cè)定其電流變化；
2)根據(jù)所得電流差值與SCCA濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，繪制工作曲線(xiàn)；
3)依據(jù)工作曲線(xiàn)的繪制方法進(jìn)行樣品檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果從工作曲線(xiàn)中查得。
[0013]本發(fā)明的有益成果
(I)鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器，將N-GS引入到鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物的制備當(dāng)中，利用N-GS良好的電子傳遞能力，顯著改善了電極的性能。
[0014](2)將Pd-Au/C與腫瘤標(biāo)志物二抗直接孵化，利用鈀金優(yōu)異的生物相容性和高的催化性能，在二抗的標(biāo)記物中不必使用酶，避免了因酶的失活和泄漏造成的檢測(cè)誤差，簡(jiǎn)化了二抗標(biāo)記物的制作步驟，顯著提高了電化學(xué)免疫傳感器的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。
[0015](3)本發(fā)明所制備的電化學(xué)免疫傳感器，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，可在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)批量樣品的測(cè)定。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1氧化石墨烯的合成
在 0.1 ~0.6 g 石墨和 0.6 ~4.0g KMnO4 中加入 40 mL、H2SO4-H3PO4 混合溶液，H2SO4和H3PO4體積比9:1，加熱至40-60 V，持續(xù)12h，停止反應(yīng)冷卻到室溫，在冰水浴中加入
0.1~0.5 mL、體積分?jǐn)?shù)為30%的H2O2，磁力攪拌30~60 min，將混合物離心，分別用0.2mo I.L1 HCl，乙醇，乙醚進(jìn)行洗滌，洗滌2次。
[0017]實(shí)施例2氮摻雜石墨烯(N-GS)的合成
將氧化石墨烯分散于N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，配成0.5 mg/mL溶液,超聲30 min,將混合液在120 °C條件下，攪拌回流I h，冷卻到室溫，在9000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心，50 V真空干燥。
[0018]實(shí)施例3氮摻雜石墨烯(N-GS)的合成
將氧化石墨烯分散于N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，配成2.0 mg/mL溶液,超聲60 min,將混合液在160 °C條件下，攪拌回流2 h，冷卻到室溫，在9000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心，60 V
真空干燥。
[0019]實(shí)施例4氮摻雜石墨烯(N-GS)的合成
將氧化石墨烯分散于N, N-二甲基甲酰胺(DMF)中，配成1.0 mg/mL溶液,超聲50 min,將混合液在140 °C條件下，攪拌回流1.5h，冷卻到室溫，在9000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心，55°C
真空干燥。
[0020]實(shí)施例5鈀-金/碳(Pd-Au/C)的合成
30 mg 活性碳，1.0 mL、0.50 mo 1.171 的 PdCl2 溶液，0.5 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1% 的 HAuCl4溶液，依次加入5mL水和5mL四氫呋喃，超聲0.5 h混勻，磁力攪拌12 h，緩慢加入IOmL含有0.1 mo 1.L-1NaBH4和0.05 mo 1-T1Na2CO3的混合溶液，磁力攪拌I h，得到的固體依次用水和乙醇進(jìn)行洗滌，洗滌完成后50 °C下真空干燥，制得鈀-金/碳納米材料(Pd-Au/C)。[0021 ] 實(shí)施例6鈀-金/碳(Pd-Au/C)的合成
100 mg 活性碳，5.0 mL,0.50 mo I ?L1 的 PdCl2 溶液，L O mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1% 的 HAuCl4溶液，依次加入5mL水和5mL四氫呋喃，超聲2 h混勻，磁力攪拌12 h，緩慢加入30 mL含有0.1 mo 1.L-1NaBH4和0.05 mo 1-T1Na2CO3的混合溶液，磁力攪拌I h，得到的固體依次用水和乙醇進(jìn)行洗滌，洗滌完成后60 °C下真空干燥，制得鈀-金/碳納米材料(Pd-Au/C)。
[0022]實(shí)施例7鈀-金/碳(Pd-Au/C)的合成
60 mg 活性碳，3.0 mL、0.50 mo I.L—1 的 PdCl2 溶液，0.7 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1% 的 HAuCl4溶液，依次加入5mL水和5mL四氫呋喃，超聲1.0 h混勻，磁力攪拌12 h，緩慢加入20mL含有0.1 mo 1.L-1NaBH4和0.05 mo 1-T1Na2CO3的混合溶液，磁力攪拌I h，得到的固體依次用水和乙醇進(jìn)行洗滌，洗滌完成后55 °C下真空干燥，制得鈀-金/碳納米材料(Pd-Au/C)。
[0023]實(shí)施例8 Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原二抗(Ab2)的制備分別配制Pd-Au/C溶液和Ab2溶液，將Pd-Au/C溶液和Ab2溶液按1:1的體積比進(jìn)行混合，在10°C的光照培養(yǎng)箱內(nèi)孵化震蕩12 h，制得的Pd-Au/C-Ab2，用pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液清洗，保存在4 V的冰箱內(nèi)備用。
[0024]實(shí)施例9 Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原二抗(Ab2)的制備
分別配制Pd-Au/C溶液和Ab2溶液，將Pd-Au/C溶液和Ab2溶液按1: 2的體積比進(jìn)行混合，在10°C的光照培養(yǎng)箱內(nèi)孵化震蕩24 h，制得的Pd-Au/C-Ab2，用pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液清洗，保存在4 V的冰箱內(nèi)備用。
[0025]實(shí)施例10 Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原二抗(Ab2)的制備
分別配制Pd-Au/C溶液和Ab2溶液，將Pd-Au/C溶液和Ab2溶液按1:1.5的體積比進(jìn)行混合，在10°C的光照培養(yǎng)箱內(nèi)孵化震蕩18 h，制得的Pd-Au/C-Ab2，用pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液清洗，保存在4 V的冰箱內(nèi)備用。
[0026]實(shí)施例11電化學(xué)免疫傳感器的制備
(1)將直徑4mm的玻碳電極依次用1.0、0.3和0.05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水沖洗干凈，然后將電極置于5~10 mmol.L-1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2~0.6 V電位下掃描，使峰電位差小于80 mV ；
(2)將6PL、0.4 mg .mL-1的N-GS溶液滴涂于電極表面，紅外燈下干燥后，滴加3μ?、2.5%的戊二醛溶液于電極表面，室溫干燥；
(3)將6PL、5Pg-mL的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原一抗(Ab1)滴涂到步驟(2) N-GS修飾的電極表面，置于4°C濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
(4)將濃度為3μ?、100μg -mL牛血清白蛋白滴涂到步驟UMb1修飾的電極表面，4° °C下濕潤(rùn)條件下晾干；
(5)將6PL的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)分別滴涂在步驟(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
(6)將6μ?的Pd-Au/C-Ab2滴涂在步驟(5)SCCA修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，電化學(xué)免疫傳感器制備完成。
[0027]實(shí)施例12電化學(xué)免疫傳感器的制備
(1)將直徑4mm的玻碳電極依次用1.0、0.3和0.05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水沖洗干凈，然后將電極置于5~10 mmol.mL鐵氰化鉀溶液中，在一0.2~0.6 V電位下掃描，使峰電位差小于80mV ；
(2)將6μ?、2.0 mg -mL的N-GS溶液滴涂于電極表面，紅外燈下干燥后，滴加3μ?、2.5%的戊二醛溶液于電極表面，室溫干燥；
(3)將6μ?、15μg -mL的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原一抗(Ab1)滴涂到步驟(2) N-GS修飾的電極表面，置于4°C濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
(4)將濃度為3μ?、100μg -mL牛血清白蛋白滴涂到步驟(S)Ab1修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干；
(5)將6PL的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)分別滴涂在步驟(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌；
(6 )將6μ?的Pd-Au/C-Ab2滴涂在步驟(5 ) SCCA修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，電化學(xué)免疫傳感器制備完成。[0028]實(shí)施例13 SCCA的檢測(cè)
(1)采用0.066 mo I.L_S pH = 7.4的磷酸鹽緩沖溶液,配制在5pg.mL-1-2ng.mL—1范圍內(nèi)不同濃度的SCCA溶液，將6 μ?不同濃度的SCCA溶液分別滴涂至實(shí)施例12中步驟
(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，晾干后，按照步驟(6)修飾電極，連接至電化學(xué)工作站中，分別將電極置于10 mL含有3-6 mmol.mL—1 H2O2的pH=6.8的PBS緩沖溶液中測(cè)定其電流變化；
(2)根據(jù)所得電流差值與SCCA濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，繪制工作曲線(xiàn)；
(3)依據(jù)工作曲線(xiàn)的繪制方 法進(jìn)行樣品檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果從工作曲線(xiàn)中查得。
【權(quán)利要求】
1.一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)氧化石墨烯的合成 在0.1~0.6 g石墨和0.6~4.0g KMnO4中加入40 mL、H2SO4-H3PO4混合溶液，H2SO4和H3PO4體積比9:1，加熱至40~60 °C，持續(xù)12 h，停止反應(yīng)冷卻到室溫，在冰水浴中加入0.1~0.5 mL、體積分?jǐn)?shù)為30%的H2O2，磁力攪拌30~60 min，將混合物離心，分別用0.2mol.L-1 HCl,乙醇，乙醚進(jìn)行洗滌，洗滌2次； (2)氮摻雜石墨烯(N-GS)的合成 將氧化石墨烯分散于N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，配成0.5~2.0 mg/mL溶液，超聲30~60 min，將混合液在120~160 °C條件下，攪拌回流I~2 h，冷卻到室溫，在9000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心,50~60 °C真空干燥； (3)鈀-金/碳(Pd-Au/C)的合成
30 ~100 mg 活性碳，1.0 ~5.0 mL、0.50 mo 1.171 的 PdCl2 溶液，0.5 ~1.0 mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的HAuCl4溶液，依次加入5mL水和5mL四氫呋喃，超聲0.5h混勻，磁力攪拌 12 h，緩慢加入 10 ~30 mL 含有 0.1 mo 1.L-1NaBH4 和 0.05 mo 1.L-1Na2CO3 的混合溶液，磁力攪拌I h，得到的固體依次用水和乙醇進(jìn)行洗滌，洗滌完成后50~60 °C下真空干燥，制得鈕-金/碳納米材料(Pd-Au/C)； (4)Pd-Au/C-鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原二抗(Ab2)的制備； (5)電化學(xué)免疫傳感器的制備。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述的Pd-Au/C-Ab2的制備，步驟如下: 分別配制Pd-Au/C溶液和Ab2溶液，將Pd-Au/C溶液和Ab2溶液按1:1~2的體積比進(jìn)行混合，在10°C的光照培養(yǎng)箱內(nèi)孵化震蕩12~24 h，制得的Pd-Au/C-Ab2，用pH = 7.4磷酸鹽緩沖溶液清洗，保存在4 V的冰箱內(nèi)備用。
3.如權(quán)利要求2所述的一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述的Pd-Au/C溶液的濃度為5~15 mg.πι?Λ所述的Ab2溶液的濃度為5~15 Pg
4.如權(quán)利要求1所述的一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述的電化學(xué)免疫傳感器的制備，步驟如下: (1)將直徑4mm的玻碳電極依次用1.0、0.3和0.05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水沖洗干凈，然后將電極置于5~10 mmol.l-1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2~0.6 V電位下掃描，使峰電位差小于80mV ； (2)將6μ?、0.4~2.0 mg.mL—1的N-GS溶液滴涂于電極表面，紅外燈下干燥后，滴加3μ?、2.5%的戍二醒溶液于電極表面,室溫干燥； (3)將6μl、5~15μg.mL—1的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原一抗(Ab1)滴涂到步驟(2) N-GS修飾的電極表面，置于4°C濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌； (4)將濃度為3μl、100μg.ml-1牛血清白蛋白滴涂到步驟(S)Ab1修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌； (5)將6PL的鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原(SCCA)分別滴涂在步驟(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，洗滌； (6)將6μ?的Pd-Au/C-Ab2滴涂在步驟(5)SCCA修飾的電極表面，4°C下濕潤(rùn)條件下晾干，電化學(xué)免疫傳感器制備完成。
5.如權(quán)利要求1所述的一種鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原生物傳感器的制備方法，其特征在于，所述制備的電化學(xué)免疫傳感器用于SCCA的檢測(cè)，步驟如下: (1)采用0.066 mo I.L_S pH = 7.4的磷酸鹽緩沖溶液,配制在5pg.mL—1-2ng.mL—1范圍內(nèi)不同濃度的SCCA溶液，將6 PL不同濃度的SCCA溶液分別滴涂至權(quán)利要求4中步驟(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，晾干后，按照權(quán)利要求4中步驟(6)修飾電極，連接至電化學(xué)工作站中，分別將電極置于10 mL含有3-6 mmol.mL—1 H2O2的pH=6.8的PBS緩沖溶液中測(cè)定其電流變化； (2)根據(jù)所得電流差值與SCCA濃度呈線(xiàn)性關(guān)系，繪制工作曲線(xiàn)； (3)依據(jù)工作曲線(xiàn)的繪制方法進(jìn)`行樣品檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果從工作曲線(xiàn)中查得。
【文檔編號(hào)】G01N33/531GK103454417SQ201310396759
【公開(kāi)日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月4日
【發(fā)明者】魏琴, 吳丹, 張勇, 高健, 李賀, 杜斌, 馬洪敏, 李燕 申請(qǐng)人:濟(jì)南大學(xué)