Dc-signr的一種新用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了DC-SIGNR蛋白在制備鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查結(jié)直腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者血清及正常人血清中DC-SIGNR蛋白濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度顯著高于正常人（P<0.0001）；結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者（P=0.0002）。同時(shí)，又對(duì)結(jié)腸癌和直腸癌患者分別進(jìn)行進(jìn)一步分析，證實(shí)了患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度水平對(duì)于結(jié)腸癌和直腸癌的診斷和轉(zhuǎn)移與否的鑒別診斷均有不同程度的價(jià)值。因此，本發(fā)明具有巨大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】DC-SIGNR的一種新用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及DC-SIGNR蛋白在制備鑒別和/或診斷疾病的 產(chǎn)品中的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 結(jié)直腸癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，發(fā)生率僅次于胃癌和食道癌。在我國(guó)常見(jiàn)惡 性腫瘤死亡中，結(jié)直腸癌患者在男性占第五位，女性占第六位。近二十年來(lái)，結(jié)直腸癌的發(fā) 病率在逐年增加，同時(shí)，其發(fā)病年齡也趨向老齡化。然而，在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，結(jié)直腸癌是僅次 于肺癌的第二位惡性腫瘤。結(jié)直腸癌的好發(fā)部位為直腸及直腸與乙狀結(jié)腸交界處，占60%。 發(fā)病年齡多在60-70歲。
[0003] 近年來(lái)，雖然隨著診斷技術(shù)發(fā)展，越來(lái)越多結(jié)直腸癌患者得以在早期發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行 相應(yīng)治療，然而即使在早期切除原發(fā)腫瘤后仍然有許多患者在日后會(huì)進(jìn)展并發(fā)生全身轉(zhuǎn) 移，并將最終導(dǎo)致患者的死亡。因此，對(duì)于結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的了解是結(jié)直腸癌診治 中的一項(xiàng)重要而迫切的任務(wù)。
[0004] DC-SIGNR(Dendritic Cell-Specific Intercellular adhesion molecule 3-Grabbing Nonintegrin Related, Genbank accession number AF245219)屬于2型膜 蛋白，DC-SIGNR高表達(dá)于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴結(jié)竇內(nèi)皮細(xì)胞，可表達(dá)于子宮內(nèi)膜與胎盤(pán)。 DC-SIGNR與已知的C-型凝集素DC-SIGN、LSECtin和⑶23基因緊密成簇排列于染色體 19pl3. 3區(qū)域，同屬于II型C-型凝集素家族。到前為止，關(guān)于DC-SIGNR與結(jié)直腸癌及其轉(zhuǎn) 移的關(guān)系未見(jiàn)報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供DC-SIGNR蛋白在制備鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或 輔助篩查結(jié)直腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0006] 檢測(cè)血清中DC-SIGNR蛋白濃度的產(chǎn)品在制備下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬 于本發(fā)明保護(hù)的范圍：
[0007] 1)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌；
[0008] 2)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌；
[0009] 3)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0010] 4)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0011] 5)篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌；
[0012] 6)篩查和/或輔助篩查直腸癌；
[0013] 所述檢測(cè)血清中DC-SIGNR蛋白濃度的產(chǎn)品具體為檢測(cè)DC-SIGNR蛋白的單克隆抗 體或多克隆抗體。
[0014] 所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b)的蛋白：
[0015]a)序列表中的SEQIDNs.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0016] b)將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的 取代和/或缺失和/或添加且具有上述1) -4)任一所述用途的由a)衍生的蛋白質(zhì)。
[0017] DC-SIGNR蛋白作為標(biāo)志物在開(kāi)發(fā)和/或設(shè)計(jì)具有下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng)用 也屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍：
[0018] 1)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌；
[0019] 2)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌；
[0020] 3)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0021] 4)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0022] 5)篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌；
[0023] 6)篩查和/或輔助篩查直腸癌；
[0024] 所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b)的蛋白：
[0025] a)序列表中的SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0026] b)將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的 取代和/或缺失和/或添加且具有上述1) -4)任一所述用途的由a)衍生的蛋白質(zhì)。
[0027] 所述應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷 結(jié)腸癌是否發(fā)生；
[0028] 所述應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷 直腸癌是否發(fā)生；
[0029] 所述應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況指鑒別、 診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期；
[0030] 所述應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移情況指鑒別、診斷和/或 輔助診斷直腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期。
[0031] 所述應(yīng)用中，所述轉(zhuǎn)移具體指淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。
[0032] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種試劑盒，包括檢測(cè)DC-SIGNR蛋白的單克隆抗體 或多克隆抗體；所述試劑盒還包括說(shuō)明書(shū)，所述說(shuō)明書(shū)上記載：若待測(cè)血清中DC-SIGNR蛋 白的含量顯著高于正常人血清中DC-SIGNR蛋白的含量，則候選認(rèn)為該待測(cè)血清樣本患有 直腸癌或結(jié)腸癌，或發(fā)生直腸癌轉(zhuǎn)移或結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移。
[0033] 所述試劑盒包括下述1) -3 ):
[0034]1)所述多克隆抗體為羊抗人DC-SIGNR多抗；
[0035]2)所述單克隆抗體為鼠抗人DC-SIGNR單抗；
[0036] 3 )辣根氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠抗體；
[0037] 所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b)的蛋白：
[0038]a)序列表中的SEQ ID Ns.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0039] b)將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的 取代和/或缺失和/或添加且具有權(quán)利要求1所述的1) -4)中任一所述用途的由a)衍生 的蛋白質(zhì)。
[0040] 所述試劑盒還包括下述1)_6):
[0041] 1)pH9. 6的碳酸鹽緩沖液，其組成為：
[0042]Na2C03 1. 59g/L
[0043]NaHC03 2. 93g/L
[0044] 溶劑為蒸饋水；
[0045] 2)PBST:由 137mMNaCl，2. 7mMKC1，10mMNa2HP04, 2mMKH2P04 和體積百分含量 為5%的Tween-200組成，溶劑為三蒸水；
[0046] 3)脫脂奶粉；
[0047] 4)pH值為7. 4的磷酸鹽緩沖液，具體組成為：137mMNaCl，2. 7mMKC1， 10mMNa2HP04,2mMKH2P04,溶劑為三蒸水；
[0048] 5)TMB顯色液
[0049] 6) 2M濃硫酸，溶劑為三蒸水。
[0050] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供所述試劑盒在制備具有下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng) 用：
[0051] 1)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌；
[0052] 2)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌；
[0053] 3)鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0054] 4)鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況；
[0055]5)篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌；
[0056]6)篩查和/或輔助篩查直腸癌。
[0057] 所述的應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診 斷結(jié)腸癌是否發(fā)生；
[0058] 所述的應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診 斷直腸癌是否發(fā)生；
[0059] 所述的應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況指鑒 另IJ、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期；
[0060] 所述的應(yīng)用中，所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移情況指鑒別、診斷和/ 或輔助診斷直腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期。
[0061] 所述的應(yīng)用中，所述轉(zhuǎn)移具體指淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移。
[0062] 本發(fā)明提供了DC-SIGNR蛋白在制備鑒別、診斷、輔助診斷、篩查和/或輔助篩查結(jié) 直腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)直腸癌患者血清及正 常人血清中DC-SIGNR蛋白濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度顯著高 于正常人（P〈〇. 0001);結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的結(jié) 直腸癌患者（P=〇. 0002)。同時(shí)，又對(duì)結(jié)腸癌和直腸癌患者分別進(jìn)行進(jìn)一步分析，證實(shí)了患者 血清中DC-SIGNR蛋白濃度水平對(duì)于結(jié)腸癌和直腸癌的診斷和轉(zhuǎn)移與否的鑒別診斷均有不 同程度的價(jià)值。因此，本發(fā)明具有巨大的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0063] 圖1為Controlsubject組與CRC組血清樣本中DC-SIGNR蛋白濃度差異統(tǒng)計(jì)結(jié) 果圖。
[0064] 圖2為Controlsubject組與CC組血清樣本中DC-SIGNR蛋白濃度差異統(tǒng)計(jì)結(jié)果 圖。
[0065]圖3為Controlsubject組與RC組血清樣本中DC-SIGNR蛋白濃度差異統(tǒng)計(jì)結(jié)果 圖。
[0066] 圖4為利用血清中DC-SIGNR蛋白濃度診斷結(jié)直腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的R0C曲線圖。
[0067] 圖5為利用血清中DC-SIGNR蛋白濃度診斷結(jié)腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的R0C曲線圖。
[0068] 圖6為利用血清中DC-SIGNR蛋白濃度診斷直腸癌及其轉(zhuǎn)移情況的R0C曲線圖。

【具體實(shí)施方式】
[0069] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0070] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0071] DC-SIGNR蛋白的氨基酸序列見(jiàn)序列表中SEQ ID Ns :1所示。
[0072] 實(shí)施例1、利用DC-SIGNR蛋白診斷或輔助診斷結(jié)直腸癌發(fā)生及轉(zhuǎn)移情況
[0073] 1 材料
[0074] 1. 1血清樣本
[0075] 結(jié)直腸癌患者血清樣本143例，且所有患者均經(jīng)手術(shù)及病理確診；正常體檢者血 液樣本122例，所有正常體檢者肝功正常，HBV、HCV及HIV均為陰性。血清樣本由大連醫(yī)科 大學(xué)附屬第一醫(yī)院與大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院提供，血清樣本的取得均經(jīng)過(guò)患者及體檢 者的知情同意。
[0076] 1. 2ELISA檢測(cè)試劑組成
[0077] 檢測(cè)DC-SIGNR的試劑包括鼠抗人DC-SIGNR單抗購(gòu)自R&D公司，羊抗人DC-SIGNR 多抗購(gòu)自SantaCruz公司，兔抗山羊辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù) 有限公司，TMB顯色液購(gòu)買(mǎi)于TIANGEN試劑公司。
[0078] 2 方法
[0079] 2. 1血液樣本處理
[0080]-70°C保存的血清樣本于室溫放置溶解后作為待測(cè)樣品用于檢測(cè)。
[0081] 2.2ELISA檢測(cè)
[0082] 采用ELISA方法檢測(cè)待測(cè)樣品中DC-SIGNR蛋白濃度，具體操作步驟如下：
[0083] 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37°C溶解）；試劑或樣品稀 釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣 品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┑臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
[0084] (1)包被：將羊抗人DC-SIGNR多抗與包被液按照體積比為1:750混合，將混合液 加入酶標(biāo)板各孔中，每孔lOOul,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,4°C過(guò)夜。包被液為pH9. 6的碳酸鹽 緩沖液，其組成為：
[0085]Na2C03 1. 59g/L
[0086]NaHC03 2. 93g/L
[0087] 溶劑為蒸餾水。
[0088] (2)洗板：棄去液體，甩干，用PBST洗板3次，每次浸泡5分鐘，350ii1/每孔，輕拍 將孔內(nèi)液體拍干。PBST的組成為：137mMNaCl，2. 7mMKCl，10mMNa2HP04,2mMKH2P04 和體積 百分含量為〇. 05%的Tween-200 (吐溫-200)，溶劑為三蒸水。
[0089] (3)封閉：加封閉液，在酶標(biāo)板上覆膜，37°C孵育1小時(shí)。封閉液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5% 的脫脂奶粉，溶劑為PBS緩沖液，PBS緩沖液的pH值為7. 4,其組成為137mMNaCl，2. 7mM KCl，10mMNa2HP04,2mMKH2P04,溶劑為三蒸水。
[0090] (4)洗板：棄去液體，甩干，用PBST洗板3次，每次浸泡5分鐘，350ill/每孔，輕拍 將孔內(nèi)液體拍干。
[0091] (5)加樣：分別設(shè)空白孔、待測(cè)樣品孔和標(biāo)準(zhǔn)蛋白孔。空白孔加樣品稀釋液(樣品 稀釋液為pH值為7. 4的PBS緩沖液）100yl，待測(cè)樣品孔加入體積比為1:1的待測(cè)樣品與 樣品稀釋液的混合液100u1，標(biāo)準(zhǔn)蛋白孔加入適宜濃度梯度的稀釋樣品100u1。注意不要 有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上覆膜， 37°C孵育90分鐘。待測(cè)樣品孔及空白孔均做平行復(fù)孔。
[0092] (6)洗板：棄去液體，甩干，用PBST洗板3次，每次浸泡5分鐘，350ii1/每孔，輕拍 將孔內(nèi)液體拍干。
[0093] (7)加一抗：將鼠抗人DC-SIGNR單抗的PBS稀釋液（PBS為上述pH值為7. 4的緩 沖液，按照鼠抗人DC-SIGNR單抗與PBS緩沖液體積比為1:1000稀釋。）加入酶標(biāo)板各孔中， 每孔100ul，酶標(biāo)板加上覆膜，37°C孵育90分鐘。
[0094] (8)洗板：棄去液體，甩干，用PBST洗板3次，每次浸泡5分鐘，350ii1/每孔，輕拍 將孔內(nèi)液體拍干。
[0095] (9)加二抗：將山羊抗鼠辣根標(biāo)記過(guò)氧化物抗體的PBS稀釋液加入酶標(biāo)板各孔 中，每孔lOOul，酶標(biāo)板加上覆膜，37°C孵育60分鐘。二抗稀釋液按照二抗與PBS體積比為 1:350稀釋?zhuān)凰肞BS的組成同上述步驟（2)所述。
[0096] (10)洗板：棄去液體，甩干，用PBST洗板4次，每次浸泡5分鐘，350ii1/每孔，輕 拍將孔內(nèi)液體拍干。
[0097] (11)顯色：將TMB顯色液加入酶標(biāo)板各孔中，每孔lOOul，酶標(biāo)板加上覆膜，避光 37 °C孵育30分鐘。
[0098] (12)終止：將2M濃硫酸(溶劑為三蒸水，即經(jīng)三次蒸餾收集的水。）加入酶標(biāo)板各 孔中，每孔50ul。
[0099] (13)酶標(biāo)儀檢測(cè)：用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（0D45Q值）。在 加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)記錄的待測(cè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的〇D45(l值計(jì)算得到DC-SIGNR的 蛋白濃度。計(jì)算公式為：Y=15536x-1192. 9，R2=0. 9784 (其中x為0D45Q值，Y為DC-SIGNR的 蛋白濃度)。
[0100] 3 結(jié)果
[0101] 結(jié)直腸癌患者血清中DC-SIGNR的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1 ;正常人血清中DC-SIGNR的檢 測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。
[0102] 表1結(jié)直腸癌患者血清中DC-SIGNR蛋白濃度檢測(cè)結(jié)果及相關(guān)信息
[0103]

【權(quán)利要求】
1. 檢測(cè)血清中DC-SIGNR蛋白濃度的產(chǎn)品在制備下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng)用： 1) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌； 2) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌； 3) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 4) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 5) 篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌； 6) 篩查和/或輔助篩查直腸癌。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述檢測(cè)血清中DC-SIGNR蛋白濃度的產(chǎn) 品具體為檢測(cè)DC-SIGNR蛋白的單克隆抗體或多克隆抗體。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b) 的蛋白： a) 序列表中的SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b) 將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代 和/或缺失和/或添加且具有上述1) -4)任一所述用途的由a)衍生的蛋白質(zhì)。 4. DC-SIGNR蛋白作為標(biāo)志物在開(kāi)發(fā)和/或設(shè)計(jì)具有下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng)用： 1) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌； 2) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌； 3) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 4) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 5) 篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌； 6) 篩查和/或輔助篩查直腸癌； 所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b)的蛋白： a) 序列表中的SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b) 將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代 和/或缺失和/或添加且具有上述1) -4)任一所述用途的由a)衍生的蛋白質(zhì)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的應(yīng)用，其特征在于： 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌是否發(fā)生； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌是否發(fā)生； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況指鑒別、診斷和/或輔助診 斷結(jié)腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移情況指鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌是 否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期。
6. -種試劑盒，包括檢測(cè)DC-SIGNR蛋白的單克隆抗體或多克隆抗體；所述試劑盒還包 括說(shuō)明書(shū)，所述說(shuō)明書(shū)上記載：若待測(cè)血清中DC-SIGNR蛋白的含量顯著高于正常人血清中 DC-SIGNR蛋白的含量，則候選認(rèn)為該待測(cè)血清樣本患有直腸癌或結(jié)腸癌，或發(fā)生直腸癌轉(zhuǎn) 移或結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括下述1) -3): 1) 所述多克隆抗體為羊抗人DC-SIGNR多抗； 2) 所述單克隆抗體為鼠抗人DC-SIGNR單抗； 3)辣根氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠抗體； 所述DC-SIGNR蛋白，是如下a)或b)的蛋白： a) 序列表中的SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； b) 將序列表中的SEQ ID Ns . 1的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代 和/或缺失和/或添加且具有權(quán)利要求1所述的1) -4)中任一所述用途的由a)衍生的蛋 白質(zhì)。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括下述1) -6): 1. pH9. 6的碳酸鹽緩沖液，其組成為： Na2C03 1. 59g/L NaHC03 2.93g/L 溶劑為蒸餾水； 2. PBST :由 137mM NaCl，2. 7mM KC1，10mM Na2HP04, 2mM KH2P04 和體積百分含量為 5% 的 Tween-200組成，溶劑為三蒸水； 3) 脫脂奶粉； 4) 口11值為7.4的磷酸鹽緩沖液，具體組成為：1371111恥(：1，2.711111((：1，1〇1111似 2冊(cè)04， 2mM KH2P04,溶劑為三蒸水； 5. TMB顯色液； 6) 2M濃硫酸，溶劑為三蒸水。
9. 權(quán)利要求6-8任一所述試劑盒在制備具有下述任一用途的產(chǎn)品中的應(yīng)用： 1) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌； 2) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌； 3) 鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 4) 鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況； 5) 篩查和/或輔助篩查結(jié)腸癌； 6) 篩查和/或輔助篩查直腸癌。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于： 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌是否發(fā)生； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌指鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌是否發(fā)生； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移和/或發(fā)展情況指鑒別、診斷和/或輔助診 斷結(jié)腸癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期； 所述鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌轉(zhuǎn)移情況指鑒別、診斷和/或輔助診斷直腸癌是 否發(fā)生轉(zhuǎn)移和/或處于早期還是進(jìn)展期。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104459146SQ201310422361
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月16日
【發(fā)明者】左云飛, 任雙義, 陳哲, 陳凱, 張竹青 申請(qǐng)人:大連醫(yī)科大學(xué)