毛發(fā)中阿片類物質(zhì)的提取和檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種毛發(fā)中阿片類物質(zhì)的提取和檢測方法，包括毛發(fā)的提取和凈化步驟。該提取方法還可以包括一個衍生步驟。本發(fā)明還提供一種對毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)進行檢測的方法，采用了氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。與傳統(tǒng)的毛發(fā)毒品殘留檢測方法相比，本發(fā)明的方法非常溫和，但又能夠有效富集得到阿片類物質(zhì)，并有效地去除了毛發(fā)檢材中的多種雜質(zhì)干擾物，具有較高的靈敏度和準確度，可供政府執(zhí)法部門、檢驗部門及藥檢機構(gòu)使用。
【專利說明】毛發(fā)中阿片類物質(zhì)的提取和檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及毛發(fā)中阿片類物質(zhì)的提取方法和檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]毒品和濫用成癮性藥物危害人體健康和社會安全，一直是國家依法嚴厲打擊的對象，人體毒品殘留的檢測手段，對執(zhí)法的輔助作用至關(guān)重要。毛發(fā)分析具有易取材、易保存、檢出時限長，反映藥物濫用史信息全面，易重復(fù)取樣等獨特優(yōu)勢，已廣泛用于法醫(yī)毒物學(xué)、臨床毒物學(xué)、職業(yè)醫(yī)學(xué)及興奮劑控制等領(lǐng)域。毛發(fā)中常見濫用藥物分析的證據(jù)性質(zhì)已得到大部分國家的法庭認可。
[0003]毛發(fā)中成分復(fù)雜，存在大量干擾物質(zhì)，為檢測毛發(fā)中的阿片類毒品，必須建立有效的前處理方法分離提取目標物。毛發(fā)中毒品檢測通常先用酸水解、堿水解、酶水解或甲醇等方法進行提取，再進行液液萃取或固相萃取達到凈化的目的。酸水解法條件較為溫和，釋放效率較高，但該方法依然存在酸水解時間太長，不滿足時效性需求的缺點，如《生物檢材中嗎啡類生物堿的LC-MS/MS分析》中頭發(fā)采用0.lmol/L HCl溶液45°C水浴浸泡過夜(Journal of Forensic Medicine, February2006, Vol.22，N0.1)。喊水解藥物釋放完全,但條件激烈；酶水解適用范圍廣，釋放效率高，但價格昂貴。
[0004]目前，亟需一種對毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)(包括嗎啡、單乙酰嗎啡、可待因、度冷丁等)進行高效分離提取的方法，以及進行高靈敏度和高特異性檢測的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的之一是提供一種毛發(fā)中阿片類物質(zhì)的提取方法，該方法非常溫和，同時又能夠有效富集得到阿片類物質(zhì)。
[0006]實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。
[0007]—種毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)的提取方法，包括以下步驟:
[0008](I)清洗毛發(fā)，以液氮研磨，得到毛發(fā)粉末；
[0009](2)加入復(fù)合毛發(fā)處理液并進行超聲處理，離心得到預(yù)處理上清液；所述復(fù)合毛發(fā)處理液是0.02-0.5mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，含0.5%-10%的牛血清蛋白、0.1%_5%的吐溫20，且 pH 值 2.0-5.0 ；
[0010](3)固相萃取柱經(jīng)平衡后，注入所述毛發(fā)預(yù)處理上清液，依次用水、0.05-0.5mol/L醋酸溶液、甲醇和乙酸乙酯洗滌雜質(zhì)；用體積比為90:10-98:2的乙酸乙酯:氨水混合溶液洗脫阿片類物質(zhì)，得到固相萃取洗脫液。
[0011]優(yōu)選地，所述復(fù)合毛發(fā)處理液是0.025-0.3mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，含0.5%_5%的牛血清蛋白、0.1%-3%的吐溫20，且pH值2.0-4.0。
[0012]優(yōu)選地，步驟(2)所述的超聲處理為37-85°C下進行1.0-6小時。
[0013]優(yōu)選地，步驟(2)所述的超聲處理為65-85°C下進行1.0-3.0小時。[0014]優(yōu)選地，步驟(3)固相萃取柱依次經(jīng)甲醇和磷酸鹽緩沖液進行平衡。
[0015]在其中一個實施例中，該方法還包括有衍生步驟:將固相萃取洗脫液吹干后，用體積比為1:4-4:1的乙酸乙酯:N，0-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺混合溶液(BSTFA)進行衍生，得到衍生產(chǎn)物。
[0016]優(yōu)選地，所述衍生步驟的條件為:65_85°C，反應(yīng)15-50分鐘。
[0017]本發(fā)明的另一目的在于，還提供一種對毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)的檢測方法，該檢測方法靈敏度高，特異性好。
[0018]實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下:
[0019]一種對毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)的檢測方法，包括以下步驟:
[0020](I)根據(jù)上述提取方法得到所述固相萃取洗脫液或衍生產(chǎn)物；
[0021 ] (2)采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS-SIM)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC/MS/MS)對所述固相萃取洗脫液或衍生產(chǎn)物進行檢測。
[0022]在其中一個實施例中，所述氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法的操作條件如下:
[0023]色譜柱CD-5MS (30m X0.25mmX0.25ym)色譜柱；
[0024]進樣口溫度為180_280°C ；
[0025]采用程序升溫模式，柱溫:80 0C ( I 分鐘)6^,230 V ( 2 分鐘)—>280 0C ( 4 分鐘)。
`[0026]在其中一個實施例中，所述液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法的操作條件如下:
[0027]色譜柱:ZORBAXEclipse XDB-C18 2.1 X 150mm, 3.5 μ m(安捷倫公司)，接 ZORBAXEclipse XDB-C18 (2.1 X 12.5mm)保護柱；
[0028]柱溫:室溫；
[0029]流動相:乙腈-緩沖液(70:30),緩沖液為20mmol/L乙酸銨和0.2%甲酸的溶液；
[0030]流速:300μ L/min ；
[0031]質(zhì)譜條件:電噴霧電離離子源，正離子檢測模式；碰撞氣=Medium ;氣簾氣:25 ;離子噴霧電壓:5500V ;霧化氣溫度:5000C ；GS1:70 ；GS2:60。
[0032]本發(fā)明提供的一種對毛發(fā)中的毒品殘留進行提取和檢測的方法，操作簡單，能有效地提取毛發(fā)中的嗎啡、單乙酰嗎啡、可待因及度冷丁等阿片類物質(zhì)，并進行定性定量分析檢測。與傳統(tǒng)方法相比，本發(fā)明的方法通過用復(fù)合毛發(fā)處理液對毛發(fā)進行預(yù)處理和固相萃取，反應(yīng)條件非常溫和，且有效地去除了毛發(fā)檢材中的多種雜質(zhì)干擾物，高效分離提取了毛發(fā)中的目標物。另外，再進一步通過衍生步驟，更能有效富集到目標物，提高了檢測靈敏度和準確度高，方法特異性強，可供政府執(zhí)法部門、檢驗部門及藥檢機構(gòu)使用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0033]圖1是在陰性毛發(fā)基質(zhì)中添加嗎啡、單乙酰嗎啡、可待因及度冷丁標準物質(zhì)，按照實施例1中所述方法進行提取凈化、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析所得的總離子流出色譜圖，圖中標記分別為(A)度冷丁及其內(nèi)標，(B)可待因及其內(nèi)標，(C)嗎啡及其內(nèi)標，(D)單乙酰嗎啡及其內(nèi)標。
【具體實施方式】[0034]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進一步進行詳細說明。
[0035]實施例1
[0036]本實施例是陰性毛發(fā)中添加嗎啡、單乙酰嗎啡、可待因和度冷丁等阿片類物質(zhì)標準品，經(jīng)復(fù)合溶液預(yù)處理、固相萃取、衍生后進行GC/MS-SIM分析。配制濃度分別為2000pg/mg及30000pg/mg的標準添加樣本。在同一天每個濃度配制6個樣本，測得各成分與內(nèi)標峰面積的比值，計算濃度及CV值，確定方法的回收率及日內(nèi)檢測精密度；連續(xù)5天，分別配制這兩個濃度標準添加樣本，測得各成分與內(nèi)標峰面積的比值，計算CV值，確定方法的日間檢測精密度和準確度。實驗結(jié)果請見表1和表2。
[0037]一、實驗步驟:
[0038](I)分別稱取約40mg的陰性毛發(fā)，用3mL洗潔精、水、丙酮清洗后，剪成1.0mm片段，液氮碾磨，得到研磨后的毛發(fā)粉末；
[0039](2)分別精確稱取30mg研磨后的陰性毛發(fā)粉末，加入2mL的毛發(fā)復(fù)合處理液(具體成分為0.02mol/L的磷酸鹽緩沖溶液(PBS)，10%的牛血清蛋白，0.1%的吐溫20，且其pH值調(diào)節(jié)為2.5)，加入內(nèi)標，在45°C下超聲4小時，離心，獲得上清液；
[0040](3)依次用2mL甲醇、2mL0.lmol/L的磷酸鹽緩沖液平衡固相萃取柱，并注入上述毛發(fā)預(yù)處理上清液，用2mL水、2ml0.1M醋酸溶液、ImL甲醇、ImL乙酸乙酯洗滌雜質(zhì)，壓干5分鐘，最后用乙酸乙酯:氨水(體積比98:2，總量為3mL)洗脫，得到洗脫液；
[0041](4)吹干洗脫液，以乙酸乙酯=BSTFA (40 μ L: 10 μ L)混合溶液在65°C下衍生50分鐘，冷卻，待氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析；
[0042](5)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析，具體檢測條件如下:
[0043]色譜柱:CD-5MS(30mX0.25mm X 0.25 μ m)色譜柱；
[0044]進樣口溫度:260°C;
[0045]載氣:氮氣，純度≥99.99%，流速為1.5mL/min ；
[0046]采用不分流進樣；
[0047]采用程序升溫模式，其中柱溫變化設(shè)定為:80 °C ( I分鐘)1 >230 V ( 2分鐘)w ( 1 >280 TJ ( 4 分鐘)；
[0048]采用離子轟擊(EI)離子源質(zhì)譜檢測，離子源溫度230°C，接口溫度280°C。
[0049](6)具體結(jié)果見表1、表2。在兩個濃度添加水平上，該四種阿片類物質(zhì)(嗎啡、單乙酰嗎啡、可待因、度冷丁)回收率均在±15%范圍內(nèi)，日間、日內(nèi)CV%均小于15%，該方法回收率及日間、日內(nèi)精密度驗證合格。
[0050]
【權(quán)利要求】
1.一種毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)清洗毛發(fā)，以液氮研磨，得到毛發(fā)粉末； (2)加入符合毛發(fā)處理液并進行超聲處理，離心得到預(yù)處理上清液；所述復(fù)合毛發(fā)處理液是0.02-0.5mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，含0.5%-10%的牛血清蛋白、0.1%_5%的吐溫20，且pH 值為 2.0-5.0 ； (3)固相萃取柱經(jīng)平衡后，注入所述毛發(fā)預(yù)處理上清液，依次用水、0.05-0.5mol/L醋酸溶液、甲醇和乙酸乙酯洗滌雜質(zhì)；用體積比為90:10-98:2的乙酸乙酯:氨水混合溶液洗脫阿片類物質(zhì)，得到固相萃取洗脫液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于: 所述復(fù)合毛發(fā)處理液是0.025-0.3mol/L的磷酸鹽緩沖溶液，含0.5%_5%的牛血清蛋白、0.1%-3%的吐溫20，且pH值為2.0-4.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于: 步驟(2)所述的超聲處理為37-85°C下進行1-6小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于: 步驟(2)所述的超聲處理為65-85°C下進行1.0-3.0小時。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于， 步驟(3 )中固相萃取柱依次經(jīng)甲醇和磷酸鹽緩沖液進行平衡。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的提取方法，其特征在于，所述方法還包括有衍生步驟:將固相萃取洗脫液吹干后，用體積比為1:4-4:1的乙酸乙酯:N，O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺混合溶液進行衍生，得到衍生產(chǎn)物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述衍生條件為:65-85°C，反應(yīng)15-50分鐘。
8.—種對毛發(fā)中的阿片類物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項所述提取方法得到所述固相萃取洗脫液或根據(jù)權(quán)利要求6-7任一項所述的提取方法得到衍生產(chǎn)物； (2)采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對所述固相萃取洗脫液或衍生產(chǎn)物進行檢測。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法的操作條件如下: 色譜柱 CD-5MS (30mX0.25mmX0.25 μ m)色譜柱； 進樣口溫度為180-280°C ； 采用程序升溫模式，柱溫:
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測方法的操作條件如下: 色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18，接 ZORBAX Eclipse XDB-C18 保護柱; 柱溫:室溫； 流動相:乙腈-緩沖液=70:30(v:v),緩沖液為20mmol/L乙酸銨和0.2%甲酸的溶液；流速:300 μ L/min ； 質(zhì)譜條件:電噴霧電離離子源，正離子檢測模式；碰撞氣=Medium ;氣簾氣:25 ;離子噴霧電壓:5500V ;霧化氣溫度:50·00C ；GS1:70 ；GS2:60。
【文檔編號】G01N30/06GK103592400SQ201310450686
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月24日
【發(fā)明者】陳園園, 劉曉云, 王繼華 申請人:廣州正孚檢測技術(shù)有限公司