一種治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種由馬蹄金、鐵包金等制成的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，該檢測方法包括該組方制劑中多種組分的鑒別測試方法和/或含量測定方法。本發(fā)明為該組方制劑提供了一套可靠、穩(wěn)定、全新的檢測方法，使該制劑的工藝控制更加嚴格合理，質量更加穩(wěn)定，為患者用藥的有效性、安全性提供了保障。
【專利說明】一種治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明是一種治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，屬于中藥的【技術領域】。
【背景技術】
[0002]肝炎是肝臟的炎癥，作為一種高發(fā)性傳播疾病，肝炎已經已經嚴重威脅我們的身體健康和日常生活。我國患有肝病的患者比例很高，尤其是慢性的肝炎，治療時間長，容易反復，長期發(fā)展有可能會變成肝癌。金馬肝泰顆粒，其主要成分為馬蹄金、鐵包金、馬鞭草、防己、敗醬草、淫羊藿、黃芪、赤芍、丹參九味中藥材，作為民族藥具有清熱解毒、健脾利濕、活血化瘀的功效，主要用于肝膽濕熱、氣滯血瘀所致的急、慢性肝炎。
[0003]藥物制劑必須要在保證產品質量穩(wěn)定可控的基礎之上，才能不斷的更新發(fā)展。為了更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，更好的指導生產，使工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地，需要進一步深入研究控制制劑質量的檢測方法。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于:提供一種治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，這種方法針對金馬肝泰顆粒的生產、檢測提供檢測的指標、檢測的手段、技術方法等，以便更好的控制該制劑的質量，保證用藥的安全性，能夠更好的指導生產，使生產工藝控制更加嚴格合理，使消費者能全面認識產品質地。
[0005]所述產品的制備工藝如下:馬蹄金、鐵包金、馬鞭草、防己、敗醬草、淫羊藿、黃芪、赤芍和丹參九味藥材，加水煎煮，濾過，濾液濃縮，冷至室溫，加乙醇，攪拌均勻，放置，濾過，濾液回收乙醇，藥液濃縮成稠膏，稠膏加蔗糖制成顆粒，即得；或稠膏加糊精制成顆粒，顆粒成型后再噴入羥丙甲基纖維素溶液，制成顆粒，即得(無蔗糖)。也可采用以下工藝:取藥物，加入6倍水煎煮2次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為70-75°C時
1.14-1.16的清膏，冷卻至室溫，加入等量正丁醇萃取2次，合并正丁醇液，水液加鹽酸調節(jié)PH為3-4，加入等量正丁醇萃取2次，合并正丁醇溶液，水液用氨水調節(jié)pH為9-10，加入等量正丁醇萃取2次，合并所有正丁醇液，減壓回收溶劑至相對密度為50-60°C時1.34-1.40的稠膏加入輔料，制成的顆粒劑。
[0006]我國中藥材來源復雜，藥材的種植、采摘、加工、貯存遠未做到標準化，因此質量非常參差，大大影響了成藥的質量穩(wěn)定性。至此需要科學的檢測方法對中成藥加以衡量。每個中成藥試劑是一個大復方，是一個藥用系統(tǒng)，即使所謂的單方，其組分也是復雜的。而中藥組方多為復方，方中包括多味藥，每一種藥含有多種成分，而在制劑過程中，多味藥混合在一起還會發(fā)生可逆或不可逆的化學反應，絕大多數中成藥的治療作用都是一種混合成分的綜合治療結果。正因為中藥組成成分復雜，其中的有效成分難于確定，不少成藥指標為生藥量，或者是藥材有效部位的含量，但生藥量或有效部位含量相等的成藥并不一定具有相同的臨床療效。保證藥品的質量，實質是為了保證病人能獲得良好的治療。衡量一個成藥的質量，需要客觀有效的檢測方法。[0007]本發(fā)明是這樣構成的:所述藥物制劑的是由下列有效藥物原料組成:馬蹄金288.2g、鐵包金153.3g、馬鞭草115g、防己191.6g、敗醬草115g、淫羊藿153.3g、黃芪153.3g、赤芍153.3g、丹參230g。所述藥物制劑的檢測方法為包括以下全部或部分內容:
[0008](I)防己藥材、粉防己堿、黃芪藥材、黃芪甲苷、赤芍藥材、芍藥苷、馬鞭草藥材、丹參藥材、丹參素鈉、淫羊藿藥材、淫羊藿苷中全部或部分物質的鑒別測試方法；
[0009](2)制劑中芍藥苷、淫羊藿苷全部或部分成分的含量測試方法。
[0010]進一步說:檢測方法為包括以下全部或部分內容:
[0011](I)丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、淫羊藿苷、芍藥苷、赤芍藥材的薄層色譜鑒別測試方法；
[0012](2)制劑中芍藥苷的含量測試方法。
[0013]再進一步說:丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、茍藥苷、茍藥苷、赤茍藥材的薄層色譜鑒別測試方法如下:
[0014](I)取本品2袋，研細，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水(45:15:4.5:1.5)混合液適量，加熱回流(75°C ) I小時，傾出上清液，蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取粉防己堿對照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇=(4-7:0.5-2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉀試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0015](2)取本品I袋，研細，加乙醇50ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品適量，力口乙醇制成每Iml含Img的溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5-lOul，分別點于同一娃膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(3-6:0.5-2:0.05-0.2)為展開劑,展開,取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0016](3)取本品I袋，研細，加水20ml使溶解，加稀鹽酸調pH值至2，加醋酸乙酯20ml振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材0.5g，加水適量，煎煮半小時，濾過，濾液加水至10ml，同法制成對照藥材溶液。另取丹參素鈉對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5-10ul,分別點于同一娃膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(15-35:5_20:
2-6)為展開劑,展開,取出，晾干。置氨氣中熏后，取出，放置10分鐘,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑
占.[0017](4)取本品2袋，研細，加水30ml，超聲處理使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，棄去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解,作為供試品溶液；另取淫羊霍苷對照品,加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5-15:0.5-2:0.3-2:0.3-2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。[0018]制劑中芍藥苷的含量測試方法如下:
[0019]照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸=20-35:79.7-64.9:0.1-0.3 為流動相；檢測波長 225_235nm ;柱溫 25-40°C ;流量 0.6-1.0ml/min ；理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000 ;精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的對照品溶液；取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取0.5g或0.1g (無蔗糖)，精密稱定，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜(0.45μπι)濾過，濾液作為供試品溶液；分別精密吸取對照品及供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算含量。
[0020]丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、芍藥苷、淫羊藿苷、赤芍藥材的最佳薄層色譜鑒別測試方法如下:
[0021](I)取本品2袋，研細，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水(45:15:4.5:1.5)混合液適量，加熱回流(75°C ) I小時，傾出上清液，蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取粉防己堿對照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇(5:I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉀試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0022](2)取本品I袋，研細，加乙醇50ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液。取赤芍對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品適量，力口乙醇制成每Iml含Img的溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各lOul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水(4:1:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0023](3)取本品I袋，研細，加水20ml使溶解，加稀鹽酸調pH值至2，加醋酸乙酯20ml振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參對照藥材0.5g，加水適量，煎煮半小時，濾過，濾液加水至10ml，同法制成對照藥材溶液。另取丹參素鈉對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸(25:10:4)為展開劑，展開，取出，晾干。置氨氣中熏后，取出，放置10分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；
[0024](4)取本品2袋，研細，加水30ml，超聲處理使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，棄去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解,作為供試品溶液；另取淫羊霍苷對照品,加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。
[0025]制劑中芍藥苷的最佳含量測試方法如下:
[0026]照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸=30:[0027]69. 9 ：0. I為流動相；檢測波長230nm ;柱溫30°C ;流量lml/min ;理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000 ;精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含O. Img的對照品溶液；取本品裝量差異項下的內容物,混勻,研細,取O. 5g或O. Ig (無鹿糖），精密稱定，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.45μπι)濾過，濾液作為供試品溶液；分別精密吸取對照品及供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算含量。
[0028]本 申請人:進過大量實驗研究，所提供的方法適合本產品的檢測方法。
[0029]實驗例I鑒別測試方法研究
[0030]I、粉防己堿的薄層色譜鑒別方法
[0031]
【權利要求】
1.一種治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，該藥物制劑是由下列有效藥物原料組成:馬蹄金288.2g、鐵包金153.3g、馬鞭草115g、防己191.6g、敗醬草115g、淫羊藿153.3g、黃芪153.3g、赤芍153.3g、丹參230g，其特征在于:所述藥物制劑的檢測方法為包括以下全部或部分內容: (1)防己藥材、粉防己堿、黃芪藥材、黃芪甲苷、赤芍藥材、芍藥苷、馬鞭草藥材、丹參藥材、丹參素鈉、淫羊藿藥材、淫羊藿苷中全部或部分物質的鑒別測試方法； (2)制劑中芍藥苷、淫羊藿苷全部或部分成分的含量測試方法。
2.按照權利要求1所述的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，其特征在于:所述藥物制劑的檢測方法為包括以下全部或部分內容: (1)丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、淫羊藿苷、芍藥苷、赤芍藥材的薄層色譜鑒別測試方法； (2)制劑中芍藥苷的含量測試方法。
3.按照權利要求2所述的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，其特征在于:丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、淫羊藿苷、芍藥苷、赤芍藥材的薄層色譜鑒別測試方法如下: (1)取本品2袋，研細，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水=45:15:4.5:1.5混合液適量，75°C加熱回流I小時，傾出上清液，蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取粉防己堿對照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10 μ I,分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲燒:甲醇=4-7:0.5-2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉀試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (2)取本品I袋，研細，加乙醇50ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；取赤芍對照 藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；另取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5-10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿_甲醇_氨水=3-6:0.5-2:0.05-0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以，5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)取本品I袋,研細,加水20ml使溶解，加稀鹽酸調pH值至2，加醋酸乙酯20ml振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材，0.5g，加水適量，煎煮半小時，濾過，濾液加水至10ml，同法制成對照藥材溶液；另取丹參素鈉對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5-10ul,分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸=15-35:5_20:，2-6為展開劑，展開，取出，晾干；置氨氣中熏后，取出，放置10分鐘，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (4)取本品2袋，研細，加水30ml，超聲處理使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，棄去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊霍苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=5-15:0.5-2:0.3-2:0.3-2為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。
4.按照權利要求2所述的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，其特征在于:制劑中芍藥苷的含量測試方法如下: 照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸=20-35:79.7-64.9:0.1-0.3 為流動相；檢測波長 225_235nm ;柱溫 25-40°C ;流量 0.6-1.0ml/min ；理論板數按芍藥苷峰計算應不低于3000 ;精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的對照品溶液；取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，含糖型取0.5g或無蔗糖型取0.1g,精密稱定，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；分別精密吸取對照品及供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算含量。
5.按照權利要求3所述的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，其特征在于:丹參藥材、丹參素鈉、粉防己堿、芍藥苷、淫羊藿苷、赤芍藥材的最佳薄層色譜鑒別測試方法如下: (1)取本品2袋，研細，加乙醚-氯仿-乙醇-氨水=45:15:4.5:1.5混合液適量，75°C加熱回流I小時，傾出上清液，蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取粉防己堿對照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇=5:1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉀試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (2)取本品I袋，研細，加乙醇50ml，超聲處理10分鐘，濾過，濾液濃縮至約2ml，作為供試品溶液；取赤芍對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；另取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各lOul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-氨水=4:1:0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，105°C烘至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)取本品I袋,研細,加水20ml使溶解，加稀鹽酸調pH值至2，加醋酸乙酯20ml振搖提取，提取液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取丹參對照藥材`0.5g，加水適量，煎煮半小時，濾過，濾液加水至10ml，同法制成對照藥材溶液；另取丹參素鈉對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-甲酸=25:10:4為展開劑，展開，取出，晾干；置氨氣中熏后，取出，放置10分鐘，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點； (4)取本品2袋，研細，加水30ml，超聲處理使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，棄去乙醚液，水液再用醋酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊霍苷對照品，加甲醇制成每Iml含0.6mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水=10:1:1:1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色斑點。
6.按照權利要求4所述的治療肝炎的金馬肝泰制劑的檢測方法，其特征在于:制劑中芍藥苷的含量測試方法如下: 照高效液相色譜法，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇-水-磷酸=30:69.9:0.1為流動相；檢測波長230nm ;柱溫30°C ;流量lml/min ;理論板數按茍藥苷峰計算應不低于`3000 ;精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇溶液使溶解，制成每Iml含0.1mg的對照品溶液；取本品裝量差異項下的內容物，混勻，研細，含糖型取0.5g或無蔗糖型取0.lg，精密稱定，精密加入甲醇IOml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用0.45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；分別精密吸取對照品及供試品溶液各`10μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標一點法計算含量。
【文檔編號】G01N1/28GK103487548SQ201310455389
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月30日 優(yōu)先權日:2013年9月30日
【發(fā)明者】鄔建明 申請人:鄔建明