茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，采用水來(lái)代替穩(wěn)定溶液來(lái)配置測(cè)試液及標(biāo)樣工作液，提高了測(cè)試液及標(biāo)樣工作液分離效果，使基本上可以回到基線，且可以保存的時(shí)間較長(zhǎng)，保存在-4℃條件下，至少半年以上。而且無(wú)論是標(biāo)樣工作液還是測(cè)試液，七種化合物都能完全分離，且分離效果良好。色譜峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性也相對(duì)較好。并且，有效避免了現(xiàn)有采用穩(wěn)定液存在的容易污染排氣閥濾心、造成堵塞的問題。還通過(guò)改進(jìn)色譜條件，提高了液相色譜柱的選擇范圍。
【專利說(shuō)明】茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種茶葉科學(xué)領(lǐng)域，特別是一種茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)在,普遍廠家的C18 (粒徑5um , 250mmX 4.6mm )色譜柱不能分離EGCG和EC,這也是多家實(shí)驗(yàn)室反映的問題。經(jīng)咨詢標(biāo)準(zhǔn)起草人，也說(shuō)是柱子的問題，推薦買大連依利特Hyspersil 0DS2 C18 (粒徑5um , 250mmX 4.6mm )色譜柱后,標(biāo)樣基本上可以分開,但也不是很理想，而樣品的分離效果就更差一些。且在EGC和+C色譜峰的右側(cè)或者左側(cè)出現(xiàn)一干擾峰，致使其分離度降低，峰形不對(duì)稱，拖尾嚴(yán)重，給積分造成較大誤差。
現(xiàn)有的方法中，用穩(wěn)定液配制的標(biāo)樣工作液分離效果不如用水的好，且不能保存較長(zhǎng)時(shí)間。而且用穩(wěn)定液配制測(cè)試液容易污染排氣閥濾心，造成堵塞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，它能將標(biāo)樣工作液或樣品測(cè)試液中的多種化合物完全分離，且分離效果良好，色譜峰的保留時(shí)間重現(xiàn)性也相對(duì)較好，以克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明的是這樣實(shí)現(xiàn)的:茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟:
1)將待測(cè)茶葉磨碎，將磨碎的茶葉加入70°c的質(zhì)量百分比為70%的甲醇溶液中，將溶液攪拌均勻后，在70°C的水浴中進(jìn)行浸提，使浸提溶液自然冷卻至室溫；將冷卻后的浸提溶液進(jìn)行離心提取，取上清液；再將離心提取的殘?jiān)貜?fù)上述步驟進(jìn)行提取，將提取液合并搖勻，進(jìn)行過(guò)濾后，獲得母液備用；
2)將母液加水定容后，進(jìn)行過(guò)濾，獲得測(cè)試液；然后將測(cè)試液按照色譜條件為90~80%A 相、10 ~20% B 相一>10 ~15min 內(nèi)由 90 ~80%A 相—80% ~75%A 相、20 ~25%B相一>20 ~25min 內(nèi)由 80% ~75%A 相 A 相—70% ~60A 相、30 ~40%B 相一>25 ~30min內(nèi)由70%~60A相一90~80%A相、10~20% B相一>90~80%A相、10~20% B相保持5min,進(jìn)行色譜分析，待壓力和柱溫穩(wěn)定后，進(jìn)行空白運(yùn)行；準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液注射入HPLC，在相同的色譜條件下注射與標(biāo)準(zhǔn)系列工作液相同體積的測(cè)試液；測(cè)試液以峰面積定量；流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的組合為，N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之間的體積比為35~45:1.5~2.5:1.5~2。
3)將測(cè)試的結(jié)果帶入公式(I)計(jì)算獲得兒茶素含量。
【權(quán)利要求】
1.一種茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，其特征在于:包括如下步驟: 1)將待測(cè)茶葉磨碎，將磨碎的茶葉加入70°c的質(zhì)量百分比為70%的甲醇溶液中，將溶液攪拌均勻后，在70°C的水浴中進(jìn)行浸提，使浸提溶液自然冷卻至室溫；將冷卻后的浸提溶液進(jìn)行離心提取，取上清液；再將離心提取的殘?jiān)貜?fù)上述步驟進(jìn)行提取，將提取液合并搖勻，進(jìn)行過(guò)濾后，獲得母液備用； 2)將母液加水定容后，進(jìn)行過(guò)濾，獲得測(cè)試液；然后將測(cè)試液按照色譜條件為:90~80%A 相、10 ~20% B 相一>10 ~15min 內(nèi)由 90 ~80%A 相—80% ~75%A 相、20 ~25%B相一>20 ~25min 內(nèi)由 80% ~75%A 相 A 相—70% ~60A 相、30 ~40%B 相一>25 ~30min內(nèi)由70%~60A相一90~80%A相、10~20% B相一>90~80%A相、10~20% B相保持5min，進(jìn)行色譜分析，待壓力和柱溫穩(wěn)定后，進(jìn)行空白運(yùn)行；準(zhǔn)確吸取混合用水配制的標(biāo)準(zhǔn)工作液注射入HPLC，在相同的色譜條件下注射與標(biāo)準(zhǔn)工作液相同體積的測(cè)試液；測(cè)試液以峰面積定量；流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸的組合為，N，N 二甲基甲酰胺、甲醇及乙酸之間的體積比為35~45:1.5~2.5:1.5~2 ;3)將測(cè)試的結(jié)果帶入公式(I)計(jì)算獲得兒茶素含量.，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟I)中所述的浸提的時(shí)間為10分鐘，每隔5分鐘進(jìn)行一次攪拌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟I)中所述的離心提取的轉(zhuǎn)速為3500r/min，提取時(shí)間為10分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，其特征在于:步驟I)及步驟2)中所述的過(guò)濾采用0.45 μ m膜進(jìn)行過(guò)濾。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶葉中兒茶素類含量的檢測(cè)方法，其特征在于:所采用的液相色譜柱的型號(hào)為C18,粒徑為5 μ m, 250mmX 4.6mm或粒徑為5 μ m, 150mmX 4.6mm。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103940920SQ201310485392
【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2013年10月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月16日
【發(fā)明者】周順珍, 龔雪, 周國(guó)蘭, 郭燦, 鄭文莉 申請(qǐng)人:貴州省茶葉研究所