一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法及其使用的試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種檢測祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的方法及其使用的試劑盒，旨在提供一種專屬、靈敏、簡便、現(xiàn)場可操作性強(qiáng)的快速檢驗(yàn)方法；該方法由以下步驟組成：（1）取1份量供試品置于具塞試管中，加有機(jī)溶劑3ml，振搖1min，得到供試品粗提液；（2）用有機(jī)系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；（3）取供試液1.5ml置盛有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；（4）向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數(shù)次；（5）將試管置于微沸水浴中加熱約1min，使有機(jī)溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；（6）沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml；（7）立即觀察1min內(nèi)液面交界處及乙醇層的顏色變化。
【專利說明】一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法及其使用的試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開一種檢測方法，具體是一種利用化學(xué)試劑檢測祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的方法，屬于醫(yī)藥檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎為常見病，是骨關(guān)節(jié)的一種慢性炎癥性和破壞性疾病，屬于頑固性疾病，患者需要長期服藥以控制病情。傳統(tǒng)中藥在我國有著幾千年的歷史，并以毒副作用小、安全性高深受百姓信賴，因此越來越多的人選用中藥來治療此類疾病。但是中藥起效慢，止痛效果差，短期療效不如西藥明顯，所以，社會上有些不法之徒為了牟取暴利，以中成藥、保健食品之名非法添加化學(xué)藥品。這些化學(xué)藥品雖療效迅速，但長期服用不良反應(yīng)較大。
[0003]具有1，2-苯并噻嗪結(jié)構(gòu)(如圖1所示)的非留體抗炎藥被稱為“昔康類”，該類藥物通過抑制炎癥介質(zhì)合成酶(環(huán)氧合酶)來抑制前列腺素的合成，從而達(dá)到抗炎的作用，代表藥物有吡羅昔康、美洛昔康、氯諾昔康、辛諾昔康、安吡昔康、替諾昔康、舒多昔康和伊索昔康。昔康類藥物，具有解熱鎮(zhèn)痛抗炎的作用，也兼有抗風(fēng)濕的療效，使用這類藥物可能產(chǎn)生惡心、胃痛或胃腸道出血，甚至?xí)鸶喂δ墚惓５炔涣挤磻?yīng)，對于消化道潰瘍、腎功能不全、心功能不全、高血壓、哮喘以及凝血機(jī)制障礙者則會造成更加嚴(yán)重的危害。這類藥物若非法摻雜在祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中，由于無法準(zhǔn)確科學(xué)控制藥量，極易引起嚴(yán)重不良反應(yīng)，給廣大患者造成危害。
[0004] 申請人:在專項(xiàng)打擊非法添加化學(xué)藥品活動中發(fā)現(xiàn)，部分祛風(fēng)濕中成藥中違法添加昔康類非留體抗炎藥，且往往以添加吡羅昔康為主。查處在祛風(fēng)濕類中成藥和保健食品中擅自添加昔康類化學(xué)藥品的違法行為，是一項(xiàng)長期的任務(wù)，涉及范圍廣，檢驗(yàn)工作量大。
[0005]目前，檢驗(yàn)中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥摻雜的方法主要有FeCl3M色法，薄層色譜法，高效液相色譜法，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法。其中FeCl3顯色法雖簡單易行，但該法對昔康類的不同藥物顯不同的顏色，難以統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)對一整類藥物進(jìn)行檢查，且易受樣品本身顏色的影響；薄層色譜法簡便經(jīng)濟(jì)，但色譜分辨率較低，而中藥制劑的干擾因素又多，易產(chǎn)生誤判；高效液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，但不適合流動性大的現(xiàn)場檢驗(yàn)，在廣大的農(nóng)村地區(qū)和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的中小城市開展檢驗(yàn)活動有一定的難度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對上述問題，本發(fā)明旨在提供一種克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)，分析成本低，不需要使用貴重分析儀器，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，現(xiàn)象易于觀察，適用于現(xiàn)場檢驗(yàn)中成藥和保健食品是否摻雜昔康類非留體抗炎藥的檢驗(yàn)方法。
[0007]本發(fā)明的另一目的在于提供上述方法在制備昔康類非留體抗炎藥快速檢驗(yàn)試劑盒中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明的另一目的在于提供上述方法在檢驗(yàn)祛風(fēng)濕類中成藥和保健食品是否摻雜昔康類非留體抗炎藥的篩查中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的前一技術(shù)方案是這樣的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法，依次由以下步驟組成:(I)取I份量供試品置于具塞試管中，加有機(jī)溶劑3ml，振搖lmin，得到供試品粗提液；(2)用有機(jī)系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；(3)取供試液1.5ml置裝有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；(4)向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數(shù)次；(5)將試管置于微沸水浴中加熱約lmin，使有機(jī)溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；(6)沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml ;(7)立即觀察Imin內(nèi)液面交界處及乙醇層的的顏色變化。
[0010]所述的I份量供試品為一次服用量的供試品，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
[0011]上述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，所述的膠囊和軟膠囊取內(nèi)容物置于具塞試管中，片劑和丸劑先研細(xì)，再置于具塞試管中。
[0012]上述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷；昔康類非留體抗炎藥在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性較好，但二氯甲烷是不可燃低沸點(diǎn)溶劑，加熱時易揮盡，且毒性較小，故采用二氯甲烷作為提取溶劑。
[0013]上述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(5)所述的微沸水浴約85?95°C，加熱時間約lmin，必要時可適當(dāng)延長加熱時間使有機(jī)溶劑揮盡。
[0014]上述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(7)所述的立即觀察Imin內(nèi)液面交界處及乙醇層的的顏色變化，應(yīng)是加入無水乙醇后立即觀察，只需輕輕晃動試管至可觀察到乙醇層的顏色變化即可，不宜過度振搖使兩層過分混合，否則顏色較深不利于觀察，決定判斷結(jié)果的現(xiàn)象應(yīng)是在加入無水乙醇后Imin內(nèi)觀察到的。
[0015]上述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，步驟
(7)所述的顏色變化，其判斷標(biāo)準(zhǔn)為:若加入無水乙醇后Imin內(nèi)交界處的乙醇層顏色先變?yōu)樽仙?，再變?yōu)樽陷郎蛩{(lán)色，可初步斷定樣品中含有昔康類非留體抗炎藥，若不符合此顏色變化規(guī)律，或Imin內(nèi)未觀察到此顏色變化現(xiàn)象，則為陰性結(jié)果。
[0016]以常見的吡羅昔康、美洛昔康和氯諾昔康為代表考察檢測靈敏度，本方法的顯色靈敏度可以達(dá)到:卩比羅昔康0.50mg,,美洛昔康0.52mg,氯諾昔康0.51mg均低于其相應(yīng)臨床有效劑量的1/20，因此本發(fā)明的顯色靈敏度足夠保證不會漏檢祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中的昔康類非留體抗炎藥。
[0017]本發(fā)明的后一技術(shù)方案是這樣的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非甾體抗炎藥的篩查方法所使用的試劑盒，括盒體，盒體內(nèi)設(shè)有至少一個盛有3ml 二氯甲烷的具塞試管，至少一個盛有2ml濃硫酸的試劑瓶,至少一個盛有5ml無水乙醇的試劑瓶,至少一個盛有15mg香草醛的干燥具塞試管，至少一個5ml的一次性注射器，以及有機(jī)系微孔濾膜。
[0018]本發(fā)明的試驗(yàn)原理如下:
昔康類非留體抗炎藥結(jié)構(gòu)中都有1，2-苯并噻嗪的母核，和酰胺結(jié)構(gòu)，由于噻嗪環(huán)和羰基的強(qiáng)電負(fù)性，使得酰胺-NH-上的H比較活潑，可與香草醛在濃硫酸存在下發(fā)生縮合反應(yīng)，生成較大的共軛系統(tǒng)，顯紅棕色，加入乙醇后，反應(yīng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂懈蠊曹楏w系的化合物，顏色先變?yōu)樽仙?，再變?yōu)樽陷郎蛩{(lán)色。反應(yīng)原理如下:
【權(quán)利要求】
1.一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，依次包括下述步驟:(1)取I份量供試品置于具塞試管中，加有機(jī)溶劑3ml，振搖lmin，得到供試品粗提液；(2)用有機(jī)系微孔濾膜濾過供試品粗提液得到供試液；(3)取供試液1.5ml置裝有15mg香草醛的干燥試管中，使香草醛溶解；(4)向試管中加入濃硫酸2ml，振搖數(shù)次；(5)將試管置于微沸水浴中加熱約lmin，使有機(jī)溶劑盡量揮盡，取出放冷至室溫；(6)沿試管壁緩緩加入無水乙醇5ml ；(7)立即觀察Imin內(nèi)液面交界處及乙醇層的的顏色變化； 所述的I份量供試品為一次服用量的供試品； 所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，所述的膠囊和軟膠囊取內(nèi)容物置于具塞試管中，片劑和丸劑先研細(xì)，再置于具塞試管中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為二氯甲烷；昔康類非留體抗炎藥在三氯甲烷、二氯甲烷和丙酮中溶解性較好，但二氯甲烷是不可燃低沸點(diǎn)溶劑，加熱時易揮盡，且毒性較小，故采用二氯甲烷作為提取溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(5)所述的微沸水浴約85?95°C，加熱時間約lmin，必要時可適當(dāng)延長加熱時間使有機(jī)溶劑揮盡。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(7)所述的立即觀察Imin內(nèi)液面交界處及乙醇層的的顏色變化，應(yīng)是加入無水乙醇后立即觀察，只需輕輕晃動試管至可觀察到乙醇層的顏色變化即可，不宜過度振搖使兩層過分混合，否則顏色較深不利于觀察，決定判斷結(jié)果的現(xiàn)象應(yīng)是在加入無水乙醇后Imin內(nèi)所觀察到的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中昔康類非留體抗炎藥的篩查方法，其特征在于，步驟(7)所述的顏色變化，其判斷標(biāo)準(zhǔn)為:若加入無水乙醇后Imin內(nèi)液層交界處的乙醇層顏色先變?yōu)樽仙?，再變?yōu)樽陷郎蛩{(lán)色，可初步斷定樣品中含有昔康類非留體抗炎藥，若不符合此顏色變化規(guī)律，或Imin內(nèi)未觀察到此顏色變化現(xiàn)象，則為陰性結(jié)果，必要時應(yīng)平行進(jìn)行陽性對照試驗(yàn)和空白試驗(yàn)。
7.權(quán)利要求1所述的昔康類非留體抗炎藥包括:吡羅昔康、美洛昔康、氯諾昔康、辛諾昔康、安吡昔康、替諾昔康、舒多昔康和伊索昔康。
8.權(quán)利要求1所述的檢測方法在制備昔康類非留體抗炎藥快速檢驗(yàn)試劑盒中的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求6所述的一種昔康類非留體抗炎藥快速檢驗(yàn)試劑盒，包括盒體，其特征在于，盒體內(nèi)設(shè)有至少一個盛有3ml 二氯甲烷的具塞試管，至少一個盛有2ml濃硫酸的試劑瓶，至少一個盛有5ml無水乙醇的試劑瓶,至少一個盛有15mg香草醒的干燥具塞試管,至少一個5ml的一次性注射器，以及有機(jī)系微孔濾膜。
10.權(quán)利要求1所述的檢測方法在祛風(fēng)濕中成藥和保健食品中是否摻入昔康類非甾體抗炎藥的篩選檢驗(yàn)中的應(yīng)用。
【文檔編號】G01N21/78GK103616375SQ201310555545
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月11日
【發(fā)明者】宮旭, 蘆麗, 馮有龍, 曹玲, 樊夏雷, 孫晶, 張?jiān)倨? 尚姝, 吳莉 申請人:江蘇省食品藥品檢驗(yàn)所, 中國食品藥品檢定研究院, 宮旭