一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法：將清熱靈顆粒預(yù)處理制成待測(cè)樣品，待測(cè)樣品注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，獲得待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；根據(jù)待測(cè)樣品的高效液相色譜圖中相應(yīng)吸收峰的峰面積及各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量。本發(fā)明方法不僅測(cè)定《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部中清熱靈顆粒含量測(cè)定項(xiàng)下黃芩苷的成分，又增加測(cè)定連翹中的連翹苷含量、大青葉中的靛玉紅含量和甘草中的甘草酸含量，大大提高了清熱靈顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。該方法含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證完全符合規(guī)定，是一種先進(jìn)的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明能節(jié)約檢測(cè)時(shí)間和檢測(cè)成本。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法
(-)【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥制劑的含量測(cè)定方法，具體涉及一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法。
(二)【背景技術(shù)】
[0002]清熱靈顆粒的處方組成為黃芩250g、連翹250g、大青葉250g、甘草50g。其制法以上四味藥加水煎煮二次，每次1.5小時(shí)，合并濾液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度1.20?1.25(80°C)的清膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)58%?60%，靜置12小時(shí)以上，取上清液濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.29?1.31 (80°C)的稠膏，加蔗糖粉740g及適量糊精，制成顆粒，干燥，制成1000g ;或加入甜菊素6.66g及適量的糊精制成顆粒，干燥，制成333g，即得。本品為棕黃色至黃棕色的顆粒，味甜、微苦。功能與主治為:清熱解毒。用于感冒熱邪壅肺證，癥見(jiàn)發(fā)熱、咽喉腫痛。
[0003]清熱靈顆粒在《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部中含量測(cè)定項(xiàng)下只是測(cè)定了黃芩中的黃芩苷這一個(gè)成分，難以反應(yīng)出整個(gè)藥品的質(zhì)量，有一定的不足。
(三)
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明針對(duì)目前清熱靈顆粒含量測(cè)定方法的不足，提供了一種更加合理有效的含量測(cè)定方法用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制，在測(cè)定黃芩中黃芩苷含量的基礎(chǔ)上，增加測(cè)定連翹中連翹苷含量，大青葉中靛玉紅含量和甘草中的甘草酸含量。
[0005]本發(fā)明采用高效液相色譜法，在同一色譜條件下，采用流動(dòng)相梯度洗脫，使用DAD紫外檢測(cè)器，在不同波長(zhǎng)處同時(shí)測(cè)定黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量。
[0006]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0007]本發(fā)明提供一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法，所述方法包括以下步驟:
[0008]( 1)制備待測(cè)樣品:將清熱靈顆粒研細(xì)混勻后加入體積濃度0?100%乙醇水溶液a中，制成混合液a，將混合液a在超聲頻率25KHz、超聲功率80?100W的條件下超聲處理10?30分鐘，冷卻后取超聲處理后的混合液a加入體積濃度0?100%乙醇水溶液b補(bǔ)足重量，制成混合液b，使混合液b與混合液a的質(zhì)量相同，將混合液b搖勻、過(guò)濾，取濾液，獲得待測(cè)樣品；所述乙醇水溶液b與乙醇水溶液a的體積濃度相同；
[0009](2)含量測(cè)定:將步驟(1)制備的待測(cè)樣品注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，獲得待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；將黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品用體積濃度0?100%乙醇水溶液配制成黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取不同體積的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣品相同的條件下進(jìn)行入高效液相色譜檢測(cè)，獲得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖，以黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖中吸收峰的峰面積為橫坐標(biāo)，以黃芩苷準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)制作黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣方法制作連翹苷標(biāo)準(zhǔn)曲線、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線和甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)待測(cè)樣品的高效液相色譜圖中相應(yīng)吸收峰的峰面積及各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量，其中甘草酸的重量=甘草酸銨重量/1.0207，相應(yīng)換算得到清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量；高效液相色譜儀測(cè)試條件為:色譜柱以苯基鍵合硅膠為填充劑，以體積濃度0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為0?20min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80?72%，20?35min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為72?57%，35?50min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為57%，DAD紫外檢測(cè)器，分別同時(shí)在280nm、277nm、289nm和252nm處檢測(cè)吸收峰。
[0010]進(jìn)一步，所述步驟(1)中，所述乙醇水溶液a優(yōu)選為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b優(yōu)選為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b與乙醇水溶液a的體積濃度相同。
[0011]進(jìn)一步，所述步驟(1)中，超聲處理時(shí)間優(yōu)選為20?30分鐘。
[0012]所述步驟(1)中，混合液a或混合液b的質(zhì)量通常以清熱靈顆粒的質(zhì)量計(jì)為5?15mL/g,優(yōu)選 8 ?10mL/g。
[0013]進(jìn)一步，所述步驟(2)中，所述色譜柱中填充劑的粒徑優(yōu)選為5 μ m。
[0014]進(jìn)一步，所述步驟(2)中，所述色譜柱長(zhǎng)優(yōu)選為250mm,內(nèi)徑優(yōu)選為4.6mm。
[0015]進(jìn)一步，所述步驟(2)中,洗脫劑的流速優(yōu)選為l.0ml/min。
[0016]所述步驟(2)中，梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)是指流動(dòng)相A相對(duì)于流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的總體積的體積分?jǐn)?shù)。
[0017]所述步驟(2)中，0?20min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80?72%，是指起始時(shí)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80%，設(shè)定0至20min，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)從80%線性下降至72%。
[0018]20?35min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為72?57%,是20?35min,流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)從72%線性下降至57%。
[0019]35?50min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為57%，此時(shí)間內(nèi)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)保持57%不變。
[0020]本發(fā)明所述清熱靈顆粒配方為黃岑、連翅、大青葉、甘草，廠家:正大青春寶藥業(yè)有限公司。
[0021]本發(fā)明方法中，檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷的含量遠(yuǎn)高于連翹苷、靛玉紅或甘草酸的含量，在液相色譜圖中最大峰面積與最小峰面積相差約兩個(gè)數(shù)量級(jí)，為提高黃芩苷的檢測(cè)準(zhǔn)確度，優(yōu)選本發(fā)明方法按以下步驟操作:
[0022](a)制備待測(cè)樣品:將清熱靈顆粒研細(xì)混勻后加入體積濃度0?100%乙醇水溶液a中，制成混合液a，將混合液a在超聲頻率25KHz、超聲功率80?100W的條件下超聲處理10?30分鐘，冷卻后取超聲處理后的混合液a加入體積濃度0?100%乙醇水溶液b補(bǔ)足重量，制成混合液b，使混合液b與混合液a的質(zhì)量相同，將混合液b搖勻、過(guò)濾，取濾液，獲得用于檢測(cè)連翹苷、靛玉紅和甘草酸的待測(cè)樣品A ;取部分待測(cè)樣品A，用體積濃度0?100%的乙醇水溶液c稀釋30?100倍(優(yōu)選50倍)，獲得用于檢測(cè)黃芩苷的待測(cè)樣品B ;所述乙醇水溶液a、b、c的體積濃度相同；
[0023](b)含量測(cè)定:將步驟(1)制備的待測(cè)樣品A和待測(cè)樣品B分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，按相同條件檢測(cè)，分別獲得待測(cè)樣品A和B的高效液相色譜圖；將黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品用體積濃度0?100%乙醇水溶液配制成黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取不同體積的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣品A或B相同的條件下進(jìn)行入高效液相色譜檢測(cè)，獲得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖，以黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖中吸收峰的峰面積為橫坐標(biāo)，以黃芩苷準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)制作黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣方法制作連翹苷標(biāo)準(zhǔn)曲線、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線和甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)待測(cè)樣品A的高效液相色譜圖中相應(yīng)吸收峰的峰面積及連翹苷、靛玉紅和甘草酸的標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品A中連翹苷、靛玉紅和甘草酸的含量，其中甘草酸的重量=甘草酸銨重量/1.0207，根據(jù)待測(cè)樣品B的高效液相色譜圖中黃芩苷吸收峰的峰面積及黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品B中黃芩苷的含量，最后分別換算得到清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量；高效液相色譜儀測(cè)試條件為:色譜柱以苯基鍵合硅膠為填充劑，以體積濃度0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為0?20min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80?72%，20?35min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為72?57%，35?50min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為57%，DAD紫外檢測(cè)器，分別同時(shí)在280nm、277nm、289nm和252nm處檢測(cè)吸收峰。
[0024]進(jìn)一步，所述步驟(a)中，所述乙醇水溶液a優(yōu)選為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b優(yōu)選為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，所述乙醇水溶液c優(yōu)選為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液a、b、c的體積濃度相同。
[0025]進(jìn)一步，所述步驟(a)中，超聲處理時(shí)間優(yōu)選為20?30分鐘。
[0026]所述步驟(a)中，混合液a或混合液b的質(zhì)量通常以清熱靈顆粒的質(zhì)量計(jì)為5?15mL/g,優(yōu)選 8 ?10mL/g。
[0027]進(jìn)一步，所述步驟(b)中，所述色譜柱中填充劑的粒徑優(yōu)選為5 μ m。
[0028]進(jìn)一步，所述步驟(b)中,所述色譜柱長(zhǎng)優(yōu)選為250mm,內(nèi)徑優(yōu)選為4.6mm。
[0029]進(jìn)一步，所述步驟(b)中,洗脫劑的流速優(yōu)選為l.0ml/min。
[0030]所述步驟(b)中，梯度洗脫時(shí)，流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)是指流動(dòng)相A相對(duì)于流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的總體積的體積分?jǐn)?shù)。
[0031]待測(cè)樣品B經(jīng)過(guò)稀釋，檢測(cè)黃芩苷含量時(shí)，數(shù)據(jù)更為準(zhǔn)確。
[0032]本發(fā)明所述乙醇水溶液a、乙醇水溶液b均為乙醇水溶液，為了便于區(qū)分不同步驟所用量不同而命名，混合液a和混合液b均為混合液，為了便于區(qū)分不同步驟所獲得混合液不同而命名，字母本身沒(méi)有化學(xué)含義。
[0033]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在:《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部中清熱靈顆粒含量測(cè)定項(xiàng)下只是測(cè)定了黃芩中的黃芩苷含量，本發(fā)明方法不僅測(cè)定黃芩苷含量，又增加測(cè)定連翹中的連翹苷含量、大青葉中的靛玉紅含量和甘草中的甘草酸含量，大大提高了清熱靈顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。且采用同一色譜條件，在流動(dòng)相梯度洗脫的方法下，利用DAD紫外檢測(cè)器同時(shí)在280nm處測(cè)定黃芩苷、在277nm處測(cè)定連翹苷、在289nm處測(cè)定靛玉紅、在252nm處測(cè)定甘草酸。該方法含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證完全符合規(guī)定，是一種先進(jìn)的質(zhì)量控制方法。
[0034]目前已公開(kāi)的關(guān)于清熱靈顆粒含量測(cè)定的文獻(xiàn)中只是測(cè)定黃芩和連翹兩種藥物中的一些成分的含量，對(duì)于大青葉和甘草的成分并沒(méi)有同時(shí)測(cè)定。而本發(fā)明對(duì)于清熱靈顆粒中的四味藥物每種都做了含量測(cè)定，且是在同一個(gè)色譜條件下測(cè)得。相對(duì)于一般中藥固體制劑如果要用高效液相色譜法檢測(cè)不同成分的含量需要不同的色譜條件，因此需要大量的檢測(cè)時(shí)間及檢測(cè)成本，采用本發(fā)明則能節(jié)約時(shí)間和檢測(cè)成本，且能更加有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
(四)【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為實(shí)施例1中黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0036]圖2為實(shí)施例1中連翹苷標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0037]圖3為實(shí)施例1中靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0038]圖4為實(shí)施例1中甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0039]圖5為實(shí)施例1中黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖，峰a為黃芩苷。
[0040]圖6為實(shí)施例1中連翹苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖，峰b為連翹苷。
[0041 ] 圖7為實(shí)施例1中靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖，峰c為靛玉紅。
[0042]圖8為實(shí)施例1中甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖，峰d為甘草酸銨。
[0043]圖9為實(shí)施例5中方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察缺黃芩處方提取液色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。
[0044]圖10為實(shí)施例5中方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察有黃芩處方的提取液色譜圖，峰a為黃芩苷，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。
[0045]圖11為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察缺連翹處方提取液色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。
[0046]圖12為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察有連翹處方的提取液色譜圖，峰b為連翹苷，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。
[0047]圖13為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察缺大青葉處方提取液色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm。
[0048]圖14為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察有大青葉處方的提取液色譜圖，峰c為靛玉紅，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm。
[0049]圖15為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察缺甘草處方提取液色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)252nm。
[0050]圖16為實(shí)施例5方法學(xué)驗(yàn)證中專屬性考察有甘草處方的提取液色譜圖，峰d為甘草酸，檢測(cè)波長(zhǎng)252nm。
[0051]圖17為實(shí)施例1中清熱靈顆粒的黃芩苷含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。
[0052]圖18為實(shí)施例1中清熱靈顆粒的連翹苷含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。
[0053]圖19為實(shí)施例1中清熱靈顆粒的靛玉紅含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm。
[0054]圖20為實(shí)施例1中清熱靈顆粒的甘草酸含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)252nm。
[0055]圖21為實(shí)施例2中清熱靈顆粒的黃芩苷含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)280nm。
[0056]圖22為實(shí)施例2中清熱靈顆粒的連翹苷含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)277nm。
[0057]圖23為實(shí)施例2中清熱靈顆粒的靛玉紅含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm。
[0058]圖24為實(shí)施例2中清熱靈顆粒的甘草酸含量測(cè)定色譜圖，檢測(cè)波長(zhǎng)252nm。
(五)【具體實(shí)施方式】[0059]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此:
[0060]實(shí)施例1:采用高效液相色譜法測(cè)定清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸的含量。
[0061 ] ( 1)高效液相色譜條件
[0062]儀器名稱:安捷倫1100高效液相色譜儀
[0063]色譜條件:色譜柱:Z0RBAX SB—phenyl (柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm)，填充劑:苯基鍵合硅膠(粒徑5 μ m),流速:1.0ml/min,柱溫:25°C
[0064]DAD 紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng):280nm、277nm、289nm、252nm
[0065]以體積濃度0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。
[0066]表1梯度洗脫條件
[0067]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟:(1)制備待測(cè)樣品:將清熱靈顆粒研細(xì)混勻后加入體積濃度ο~100%乙醇水溶液a中，制成混合液a，將混合液a在超聲頻率25KHz、超聲功率80~100W的條件下超聲處理10~30分鐘，冷卻后取超聲處理后的混合液a加入體積濃度0~100%乙醇水溶液b補(bǔ)足重量，制成混合液b，使混合液b與混合液a的質(zhì)量相同，將混合液b搖勻、過(guò)濾，取濾液，獲得待測(cè)樣品；所述乙醇水溶液b與乙醇水溶液a的體積濃度相同；(2)含量測(cè)定:將步驟(1)制備的待測(cè)樣品注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，獲得待測(cè)樣品的高效液相色譜圖；將黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品用體積濃度0~100%乙醇水溶液配制成黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取不同體積的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣品相同的條件下進(jìn)行入高效液相色譜檢測(cè)，獲得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖，以黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖中吸收峰的峰面積為橫坐標(biāo)，以黃芩苷準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)制作黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣方法制作連翹苷標(biāo)準(zhǔn)曲線、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線和甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)待測(cè)樣品的高效液相色譜圖中相應(yīng)吸收峰的峰面積及各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量，其中甘草酸的重量=甘草酸銨重量/1.0207，相應(yīng)換算得到清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量；高效液相色譜儀測(cè)試條件為:色譜柱以苯基鍵合硅膠為填充劑，以體積濃度0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為0~20min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80~72%，20~35min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為72~57%，35~50min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為57%，DAD紫外檢測(cè)器，分別同時(shí)在280nm、277nm、289nm和252nm處檢測(cè)吸收峰。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，所述乙醇水溶液a為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇 水溶液，乙醇水溶液b為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b與乙醇水溶液a的體積濃度相同。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)，超聲處理時(shí)間為20~30分鐘。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(1)中，混合液a或混合液b的質(zhì)量以清熱靈顆粒的質(zhì)量計(jì)為5~15mL/g。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，填充劑的粒徑為5μπι。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(2)中，洗脫劑的流速為l.0ml/min。
7.—種檢測(cè)清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量的方法，其特征在于所述方法按以下步驟操作:(a)制備待測(cè)樣品:將清熱靈顆粒研細(xì)混勻后加入體積濃度0~100%乙醇水溶液a中，制成混合液a，將混合液a在超聲頻率25KHz、超聲功率80~100W的條件下超聲處理10~30分鐘，冷卻后取超聲處理后的混合液a加入體積濃度0~100%乙醇水溶液b補(bǔ)足重量，制成混合液b，使混合液b與混合液a的質(zhì)量相同，將混合液b搖勻、過(guò)濾，取濾液，獲得用于檢測(cè)連翹苷、靛玉紅和甘草酸的待測(cè)樣品A ;取部分待測(cè)樣品A，用體積濃度0~100%的乙醇水溶液c稀釋30~100倍，獲得用于檢測(cè)黃芩苷的待測(cè)樣品B ;所述乙醇水溶液a、b、c的體積濃度相同；(b)含量測(cè)定:將步驟(1)制備的待測(cè)樣品A和待測(cè)樣品B分別注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，按相同條件檢測(cè)，分別獲得待測(cè)樣品A和B的高效液相色譜圖；將黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品用體積濃度0~100%乙醇水溶液配制成黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液，取不同體積的黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測(cè)樣品A或B相同的條件下進(jìn)行入高效液相色譜檢測(cè)，獲得黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖，以黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高效液相色譜圖中吸收峰的峰面積為橫坐標(biāo)，以黃芩苷準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)制作黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)曲線，按同樣方法制作連翹苷標(biāo)準(zhǔn)曲線、靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)曲線和甘草酸銨標(biāo)準(zhǔn)曲線；根據(jù)待測(cè)樣品A的高效液相色譜圖中相應(yīng)吸收峰的峰面積及連翹苷、靛玉紅和甘草酸的標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品A中連翹苷、靛玉紅和甘草酸的含量，其中甘草酸的重量=甘草酸銨重量/1.0207，根據(jù)待測(cè)樣品B的高效液相色譜圖中黃芩苷吸收峰的峰面積及黃芩苷的標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到待測(cè)樣品B中黃芩苷的含量，最后分別換算得到清熱靈顆粒中黃芩苷、連翹苷、靛玉紅和甘草酸含量；高效液相色譜儀測(cè)試條件為:色譜柱以苯基鍵合硅膠為填充劑，以體積濃度0.5%冰乙酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫，梯度洗脫條件為0~20min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為80~72%，20~35min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為72~57%，35~50min時(shí)流動(dòng)相A的體積分?jǐn)?shù)為57%，DAD紫外檢測(cè)器，分別同時(shí)在280nm、277nm、289nm和252nm處檢測(cè)吸收峰。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟(a)中，部分待測(cè)樣品A，用體積濃度0~100%的乙醇水溶液c稀釋50倍，獲得用于檢測(cè)黃芩苷的待測(cè)樣品B。
9.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟(a)中，所述乙醇水溶液a為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液b為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，所述乙醇水溶液c為體積濃度50%乙醇水溶液或70%乙醇水溶液，乙醇水溶液a、b、c的體積濃度相同。
10.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟(a)中，混合液a或混合液b的質(zhì)量以清熱靈顆粒的質(zhì)量計(jì)為5~15m`L/g。
【文檔編號(hào)】G01N30/06GK103698422SQ201310667679
【公開(kāi)日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月10日
【發(fā)明者】林徐劍, 吳碧元, 柴建國(guó), 施曉萍, 沈瑩 申請(qǐng)人:正大青春寶藥業(yè)有限公司