一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測(cè)用試劑盒，特別是用于檢測(cè)鏈霉素的化學(xué)發(fā)光試劑盒。包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，所述酶標(biāo)板的各孔包被有包被抗原；所述試劑包括：鏈霉素單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體、鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光液；酶標(biāo)板選擇乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原。本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒具有靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)的比色ELISA法比較，靈敏度可以提高一個(gè)數(shù)量綴，有望在動(dòng)物性食品（動(dòng)物組織、水產(chǎn)品）中的鏈霉素藥物殘留檢測(cè)中發(fā)揮重要作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測(cè)用試劑盒，特別是用于檢測(cè)鏈霉素的化學(xué)發(fā)光試劑盒。
【背景技術(shù)】[0002]隨著現(xiàn)代經(jīng)濟(jì)的迅速發(fā)展，現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)近年來(lái)也迅速發(fā)展，由此引起的抗生素的濫用導(dǎo)致的大量藥物殘留已經(jīng)成為威脅人類(lèi)健康的嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)社會(huì)問(wèn)題。動(dòng)物源性食品中抗菌素污染的問(wèn)題已引起全世界廣泛關(guān)注，許多國(guó)家均對(duì)各種動(dòng)物源性食品中的抗菌素殘留提出限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)農(nóng)業(yè)部在2002年公告的《關(guān)于動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量的通知》中，規(guī)定了 92種動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量，其中鏈霉素(Tylosin)在雞、豬、牛的肌肉、脂肪、肝、腎組織中的最高殘留限量為200yg / kg。鏈霉素對(duì)革蘭陽(yáng)性菌、革蘭陰性菌、類(lèi)菌介質(zhì)和某些病毒有抑制作用，尤其對(duì)禽敗血支原體、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌極其有效。鏈霉素主要通過(guò)抑制細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成而發(fā)揮作用隨著其廣泛應(yīng)用，在動(dòng)物性食品中的殘留問(wèn)題也日益突出。
[0003]因此殘留檢測(cè)方法是非常有必要的，很多國(guó)家已經(jīng)為此而建立了一些藥物殘留的監(jiān)測(cè)方法。包括傳統(tǒng)的儀器法，微生物檢測(cè)法和新興的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)。傳統(tǒng)檢測(cè)藥物殘留的儀器分析方法包括HPLC、LC-UV, LC-Ms和LC-MS-MS等。這些方法優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確、穩(wěn)定、特異性好，可以作為標(biāo)準(zhǔn)方法，但儀器設(shè)備昂貴，笨重，需要大量的溶劑，對(duì)操作人員要求很高，樣品前處理復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、不易普及，不適合對(duì)大規(guī)模的樣品進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)。微生物檢測(cè)法雖然可以進(jìn)行大量樣品的即時(shí)檢測(cè)，但是特異性差，不能進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析。酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(ELISA)克服了以上方法的缺點(diǎn)，是一種快速、靈敏、方便的檢測(cè)方法，可以用于大量樣品的即時(shí)檢測(cè)，有著廣闊的發(fā)展前景。在酶聯(lián)免疫基礎(chǔ)上結(jié)合化學(xué)發(fā)光分析的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(CL一ELISA)，有著更高的靈敏度，更寬的線性范圍，更適合藥物殘留檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供一種具備較高的靈敏度、特異性、而且具有較高的反應(yīng)速度的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒。
[0005]本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為:一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，所述酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素藥物與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原；所述試劑包括:鏈霉素單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體、鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光液；酶標(biāo)板選擇乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原。
[0006]其中所述包被抗原濃度優(yōu)選1.5ug/mL,所述鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液從鏈霉素純品中稀釋得到，所用稀釋液為含有10%甲醇的0.05mmol/L、pH-7.4的PBS，鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別是 0ng/mL,0.2ng/mL,0.4ng/mL, 1.2ng/mL, 3.6ng/mL 和 10.8ng/mL,所述百分比為體積百分比。
[0007]所述鏈霉素單克隆抗體是由鏈霉素藥物與牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫動(dòng)物制得的單克隆抗體，其鏈霉素單克隆抗體是用人工免疫抗原免疫動(dòng)物制得的單克隆抗體，將所得鏈霉素單克隆抗體用洗滌溶液稀釋成1:60000的工作濃度。
[0008]所用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體為辣根過(guò)氧化酶一羊抗鼠IgG原液，使用時(shí)用洗滌溶液配制成1:3000的工作濃度。
[0009]所述化學(xué)發(fā)光溶液包括A液和B液，其中，A液為魯米諾含量為0.01M、對(duì)甲苯酚含量為0.0OlM PH-8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為IOOmL含2.1g檸檬酸、2.82g無(wú)水Na2HPO4和0.64mL濃度0.75%的過(guò)氧化氫脲的溶液。
[0010]所述濃縮磷酸鹽緩沖液由5.74g NaH2PO4.2H20 和 32.6g Na2HPO4.12H20 溶于 IL去離子水中制得。
[0011]所述濃縮洗滌液為按體積百分比在0.05%，pH為7.4，濃度為0.lmol/L的鹽緩沖液中添加0.05%的吐溫-20后制得。
[0012]所述的包被溶液為:1.59g碳酸鈉和2.53g碳酸氫鈉溶于IL水中，并調(diào)節(jié)pH為
9.5后制得，所述的封閉溶液為:10g OVA溶于IL洗滌溶液中，再加入重量百分比為0.02%
的NaN3后制得。
[0013]所述酶標(biāo)板采用將鏈霉素藥物-OVA偶聯(lián)物置于設(shè)定的包被溶液中，在37°C恒溫箱中反應(yīng)包被，包被液采用的是pH-9.5的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液。
[0014]本發(fā)明中微孔板中所包被的鏈霉素藥物-OVA在堿性環(huán)境下可以很好的結(jié)合在微孔板塑料表面上，可以經(jīng)受多次洗板，采用的包被抗原濃度為1.5ug/mL，包被好的微孔板可以用封閉溶液封閉，封閉液中惰性蛋白優(yōu)選0VA，需加入NaN3防止變質(zhì)。
[0015]本發(fā)明申鏈霉素單克隆抗體溶液是決定本發(fā)明中鏈霉素酶聯(lián)免疫測(cè)試試劑盒測(cè)定范圍及靈敏度的重要因素。
[0016]本發(fā)明中涉及的鏈霉素單克隆抗體溶液可以用洗滌溶液稀釋成1:60000的工作濃度。
[0017]按照上述鏈霉素單克隆抗體溶液濃度制備的試劑盒可以達(dá)到很好的線性范圍。
[0018]本發(fā)明的原理是將抗體一抗原反應(yīng)的高度特異性與酶催化的高度靈敏性結(jié)合起來(lái)，利用酶催化底物的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)產(chǎn)物濃度。
[0019]有益效果:本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒具有靈敏度高、簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，與傳統(tǒng)的比色ELISA法比較，靈敏度可以提高一個(gè)數(shù)量綴，有望在動(dòng)物性食品(動(dòng)物組織、水產(chǎn)品)中的鏈霉素藥物殘留檢測(cè)中發(fā)揮重要作用。
【具體實(shí)施方式】
[0020]一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，所述酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素藥物與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原；所述試劑包括:鏈霉素單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體、鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光液；酶標(biāo)板選擇乳白色不透明聚苯乙烯96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原。
[0021]其中所述包被抗原濃度優(yōu)選1.5ug/mL,所述鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液從鏈霉素純品中稀釋得到，所用稀釋液為含有10%甲醇的0.05mmol/L、pH-7.4的PBS，鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別是 0ng/mL,0.2ng/mL,0.4ng/mL, 1.2ng/mL, 3.6ng/mL 和 10.8ng/mL,所述百分比為體積百分比。
[0022]所述鏈霉素單克隆抗體是由鏈霉素藥物與牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫動(dòng)物制得的單克隆抗體，其鏈霉素單克隆抗體是用人工免疫抗原免疫動(dòng)物制得的單克隆抗體，將所得鏈霉素單克隆抗體用洗滌溶液稀釋成1:60000的工作濃度。
[0023]所用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體為辣根過(guò)氧化酶一羊抗鼠IgG原液，使用時(shí)用洗滌溶液配制成1:3000的工作濃度。
[0024]所述化學(xué)發(fā)光溶液包括:A液為魯米諾含量為0.01M、對(duì)甲苯酚含量為
0.0OlM PH-8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為IOOmL溶液含檸檬酸2.1g,的無(wú)水Na2HP042.82g，0.75%的過(guò)氧化氫脲0.64mL的溶液，采用辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記底物發(fā)光系統(tǒng)，
主要是魯米諾一過(guò)氧化氫系統(tǒng)。
[0025]所述濃縮磷酸鹽緩沖液為5.74g的NaH2PO4.2H20、32.6g的Na2HPO4.12H20溶于IL去離子水中。
[0026]所述濃縮洗滌溶液為按體積分?jǐn)?shù)0.05%將吐溫-20添加至pH-7.4，0.1mol/L鹽緩沖液中制成。
[0027]所述的包被溶液為:1.59g碳酸鈉和2.53g碳酸氫鈉溶于IL水中，調(diào)節(jié)PH_9.5制得，所述的封閉溶液為:10g OVA溶于IL洗滌溶液中，再加入重量比為0.02%的NaN3。
[0028]本發(fā)明中包被酶標(biāo)板采用將鏈霉素藥物-OVA偶聯(lián)物置于設(shè)定的包被溶液中，以設(shè)定的濃度，在37°C恒溫箱中反應(yīng)包被，本發(fā)明包被液采用的是pH-9.5的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液。
[0029]本發(fā)明中微孔板中所包被的鏈霉素藥物-OVA在堿性環(huán)境下可以很好的結(jié)合在微孔板塑料表面上，可以經(jīng)受多次洗板，采用的包被抗原濃度為1.5ug/mL，包被好的微孔板可以用封閉溶液封閉，封閉液中惰性蛋白優(yōu)選0VA，需加入NaN3防止變質(zhì)。
[0030]本發(fā)明申鏈霉素單克隆抗體溶液是決定本發(fā)明中鏈霉素酶聯(lián)免疫測(cè)試試劑盒測(cè)定范圍及靈敏度的重要因素。
[0031]本發(fā)明中涉及的鏈霉素單克隆抗體溶液可以用洗滌溶液稀釋成1:60000的工作濃度。
[0032]檢測(cè)步驟:
1)加樣:向酶標(biāo)板中加入50μ L/孔的鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液或樣品溶液，然后加入鏈霉素抗體工作液50 μ L/孔，室溫(25°C )恒溫孵育2.5h;
2)洗滌:傾出孔中液體，向酶標(biāo)板中加入280μ L/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復(fù)三次；
3)加酶標(biāo)二抗:每孔加入酶標(biāo)二抗工作液IOOuL,室溫恒溫孵育1.5h ；
4)洗滌:傾出孔中液體，向酶標(biāo)板中加入280μ L/孔的洗滌液，靜置5min后拍干，重復(fù)三次；
5)加發(fā)光液:每孔加入發(fā)光液IOOuL；
6)檢測(cè):用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)定每孔的發(fā)光強(qiáng)度。
[0033]結(jié)果判斷: 以所測(cè)得的標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)光值，除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(O標(biāo)準(zhǔn))的發(fā)光值再乘以100，得到抑制率(Β/Β0)，以抑制率為縱坐標(biāo)，鏈霉素濃度的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，每一個(gè)樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。
[0034]試劑盒具體組分的制備
I)鏈霉素半抗原
購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。
[0035]2)鏈霉素免疫原的制備
稱(chēng)取40mg羰基二咪唑，用0.8ml丙酮充分溶解，加入25mg鏈霉素單克隆抗體37°C振蕩反應(yīng)3h后，真空干燥過(guò)夜；加入Iml用0.2 mo I/LpH 8.0的硼酸緩沖液溶解的BSA IOmg,4°C振蕩3d ;用0.2mol/LPH8.0的硼酸緩沖液透析2 d，加入柳硫汞，置4°C保存；采用紫外掃描法進(jìn)行鑒定，BSA在280 nm處應(yīng)有一明顯吸收峰；而鏈霉素單體紫外掃描圖譜，在225nm處應(yīng)有一明顯吸收峰；BSA—鏈霉素偶聯(lián)物經(jīng)紫外掃描，若最大吸收峰發(fā)生藍(lán)移，可初步認(rèn)定偶聯(lián)物結(jié)合成功。
[0036]3)單克隆抗體的制備
I動(dòng)物免疫:用上述制備出的免疫原按IOOug/只，以生理鹽水溶解免疫原與弗氏完全佐劑等體積混勻，頸背部皮下注射免疫6?8周齡Balb/c雌鼠，初次免疫后第7、14、28天以免疫原與弗氏不完全佐劑等體積混勻，各追加免疫一次，融合前3天以免疫復(fù)合物IOOug/只，不加弗氏佐劑再追加免疫一次。
[0037]2細(xì)胞融合:按常規(guī)方法進(jìn)行，取免疫小鼠的脾細(xì)胞與處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(SP2/0)混合，然后在45秒內(nèi)緩慢加入預(yù)熱的融合劑(PEG4000)進(jìn)行融合，用HAT培養(yǎng)基懸浮均勻，再加入適量的飼養(yǎng)細(xì)胞，培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板，于37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5天后用HT培養(yǎng)基半換液，9天時(shí)候進(jìn)行全換液。
[0038]3雜交瘤細(xì)胞的篩選:細(xì)胞融合后，待細(xì)胞長(zhǎng)到培養(yǎng)孔面積的1/2時(shí)，采用分步篩選法篩選雜交瘤細(xì)胞。初選采用間接ELISA方法，以包被抗原(預(yù)先用方陣法常規(guī)滴定其最佳包被濃度和陽(yáng)性血清稀釋度)包被酶標(biāo)板，加入被測(cè)孔培養(yǎng)上清，孵育，清洗后加入羊抗鼠IgG-HRP和IgM-HRP，鄰苯二胺(OPD)進(jìn)行顯色反應(yīng)。篩選出的陽(yáng)性孔再用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法篩選，先將細(xì)胞上清與100 u g/mL的蘇丹紅等體積混合，37°C水浴作用30min，再加入到包被好的酶標(biāo)板中。同時(shí)用PBS取代蘇丹紅對(duì)照，其余步驟同上。若經(jīng)蘇丹紅阻斷后的0D450nm值下降到對(duì)照孔的50%以下，則判為陽(yáng)性，經(jīng)2?3次檢測(cè)都為陽(yáng)性的孔，立即用有限稀釋法進(jìn)行亞克隆化。
[0039]4單克隆抗體制備:將2?3次亞克隆建株后的雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，收集上清液用間接ELISA測(cè)定效價(jià)，凍存；并取8?10周齡Balb/c小鼠腹腔注射液體石蠟0.5mL/只，7?10日后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞I?2X106/只，7?10日后抽取小鼠腹水，離心取上清，測(cè)定效價(jià)，并凍存?zhèn)溆谩?br> [0040]實(shí)際樣品中鏈霉素的檢測(cè)
1、樣本前處理
(一)肌肉、肝臟等組織前處理方法
用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；稱(chēng)取3g均質(zhì)后的組織樣本到50mL聚苯乙烯離心管中，加入6mL乙酸乙酯，用振蕩器振蕩lOmin，3000g以上，室溫(20?25°C )離心IOmin ;移取4mL上層有機(jī)相至IOmL干凈的玻璃管中，于50?60°C水浴氮?dú)獯蹈?，加入ImL正己烷，用渦旋儀渦動(dòng)lmin，再加ImL復(fù)溶工作液，用渦旋儀渦動(dòng)10S，3000g以上，室溫離心IOmin ;除去上層有機(jī)相，取下層5 OL用于檢測(cè)。
[0041](二)原奶處理方法
將原奶樣品回溫到室溫(25±2°C)后，上下顛倒20次以上，使其充分混勻；(注:切勿采用劇烈的方式混勻，否則將產(chǎn)生沉淀，影響結(jié)果)然后去50 u I上述混合后的樣品于2ml離心管中，再加入950ul樣品稀釋液，上下顛倒20次以上混勻，最后去50ul進(jìn)行檢測(cè)。
[0042](三)蛋處理方法
取50uL均質(zhì)后的全蛋品于離心管中，加入950uL去離子水，充分渦動(dòng)10s，取50uL進(jìn)行檢測(cè)。
【權(quán)利要求】
1.一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，包括盒體、設(shè)在盒體內(nèi)的酶標(biāo)板和設(shè)在盒體內(nèi)的試劑，其特征在于:所述酶標(biāo)板的各孔包被有包被抗原；所述試劑包括:鏈霉素單克隆抗體、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體、鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光液；所述酶標(biāo)板為乳白色不透明的聚苯乙烯96孔化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)板，酶標(biāo)板的各孔包被有以鏈霉素與卵清蛋白偶聯(lián)制成的包被抗原。
2.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述包被抗原以鏈霉素藥物與卵清蛋白偶聯(lián)制成，其濃度為1.5ug/mL,所述鏈霉素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液從鏈霉素純品中稀釋得到，所用稀釋液為含有10%甲醇的0.05mmol/L、pH為7.4的 PBS,鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別是 0ng/mL,0.2ng/mL,0.4ng/mL, 1.2ng/mL, 3.6ng/mL 和10.8ng/mL,所述百分比為體積百分比。
3.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述鏈霉素單克隆抗體是由鏈霉素藥物與牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫動(dòng)物制得的單克隆抗體，其工作濃度為為1:60000。
4.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠抗體為辣根過(guò)氧化酶一羊抗鼠IgG原液，使用時(shí)用洗滌溶液配制成1:3000的工作濃度。
5.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述化學(xué)發(fā)光溶液包括A液和B液，其中，A液為魯米諾含量為0.01M、對(duì)甲苯酚含量為0.0OlMPH-8.8的三(羥甲基)氨基甲烷溶液；B液為IOOmL含2.1g檸檬酸、2.82g無(wú)水Na2HPO4和0.64mL濃度0.75%的過(guò)氧化氫脲的溶液。
6.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述濃縮磷酸鹽緩沖液由5.74g NaH2PO4.2H20和32.6g Na2HPO4.12H20溶于IL去離子水中制得。
7.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述濃縮洗滌液為按體積百分比在0.05%, pH為7.4，濃度為0.lmol/L的鹽緩沖液中添加0.05%的吐溫-20后制得。
8.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述的包被溶液為:1.59g碳酸鈉和2.53g碳酸氫鈉溶于IL水中，并調(diào)節(jié)pH為9.5后制得，所述的封閉溶液為:10g OVA溶于IL洗滌溶液中，再加入重量百分比為0.02%的NaN3后制得。
9.如權(quán)利要求1所述的一種鏈霉素的化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于:所述酶標(biāo)板采用將鏈霉素藥物-OVA偶聯(lián)物置于設(shè)定的包被溶液中，在37°C恒溫箱中反應(yīng)包被，包被液采用的是pH-9.5的碳酸鈉一碳酸氫鈉緩沖溶液。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103645322SQ201310673607
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】王善普, 劉姍姍, 鄭鳴, 王宇東, 智雪玲 申請(qǐng)人:洛陽(yáng)萊普生信息科技有限公司