一種五倍子的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種五倍子的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途，所述乙酸乙酯提取物由以下方法制備：五倍子，用石油醚浸泡，石油醚滲濾，回收殘?jiān)?，揮干殘?jiān)械氖兔?，然后用乙醇回流提取，提取液濃縮至無醇味，然后用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取，收集上層清液，蒸干，即得乙酸乙酯提取物。經(jīng)過體外試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明提供的五倍子的乙酸乙酯提取物可抑制EGFR活性，效果明顯。
【專利說明】—種五倍子的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和用途
[【技術(shù)領(lǐng)域】]
[0001]本發(fā)明涉及五倍子提取物及其制備、檢測方法和應(yīng)用，具體涉一種五倍子的乙酸乙酯提取物及其制備、檢測方法和應(yīng)用。
[【背景技術(shù)】]
[0002]表皮生長因子受體(EGFR)是EGFR酪氨酸激酶家族的成員之一，它包含有一個(gè)細(xì)胞外配體結(jié)合區(qū)、單一的跨膜區(qū)和一個(gè)含酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)的胞內(nèi)區(qū)。EGFR與配體結(jié)合導(dǎo)致重要的構(gòu)象變化，暴露受體中的二聚環(huán)結(jié)構(gòu)，引發(fā)自身磷酸化，轉(zhuǎn)導(dǎo)下游信號，調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移、存活和一系列復(fù)雜的過程。EGRF在腫瘤細(xì)胞中常處于過度激活狀態(tài)，使細(xì)胞周期失去調(diào)控，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限制生長，如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、頭頸部鱗癌、宮頸癌、食管癌、前列腺癌、肝癌、結(jié)腸癌、胃癌等。EGFR是目前抗腫瘤分子靶向治療中，最成功也是最受關(guān)注的治療靶點(diǎn)之一。FDA已批準(zhǔn)兩種靶向EGFR的小分子抑制劑,gefitinib(吉非替尼，易瑞沙)和erlotinib (厄洛替尼,特羅凱),隨著時(shí)間的推移,在治療中出現(xiàn)了耐藥現(xiàn)象。而國內(nèi)迄今為止，尚未有特異性EGFR抑制劑出現(xiàn)。
[0003]五倍子，漆樹科植物鹽膚木Rhus chinensis Mill.、青麩楊Rhus potaniniiMaxim.或紅鉄楊Rhus punjabensis Stew.var.sinica(Diels)Rehd.et wils.葉上的蟲瘦，主要由五倍子姆Melaphis chinensis (Bell) Baker寄生而形成。具有斂肺降火、潘腸止灣，斂汗，止血，收濕斂瘡的作用。現(xiàn)代藥理研究表明，五倍子具有以下藥理作用:
[0004]1、抗 菌作用:五倍子水提液能夠減少牙齦卟啉菌內(nèi)毒素誘導(dǎo)人單核細(xì)胞膜表面CD14的表達(dá)，有助于對牙周病的防治；五倍子水、乙醇提取物對變形鏈球菌Ingbritt株、茸毛鏈球菌均有較強(qiáng)作用。
[0005]2、抗病毒作用:五倍子煎劑具有很強(qiáng)的抑制HIV-Rt活性。
[0006]3、清除自由基和抗氧化作用:五倍子水煎劑有對老鼠抗衰老的作用；五倍子提取物能夠抑制突變作用。
[0007]4、抗癌作用:五倍子提物對PGG具有抗癌作用；五倍子的醇浸提液具有治療早期宮頸癌的作用。
[0008]迄今為止，尚未有關(guān)于五倍子的乙酸乙酯提取物及其相關(guān)應(yīng)用于一直EGFR活性的報(bào)道。
[
【發(fā)明內(nèi)容】
]
[0009]為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)尚無用五倍子乙酸乙酯提取物用于制造抑制EGFR活性的藥物的空白，本發(fā)明提供了五倍子的乙酸乙酯提取物及其制備方法、檢測方法和用途。
[0010]為實(shí)現(xiàn)上述目的，設(shè)計(jì)一種五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成:
[0011]a.將五倍子加入到石油醚中浸泡12~48小時(shí)，每100g五倍子需要300~500毫升的石油醚，然后滲濾回收殘?jiān)?；[0012]b.所述的殘?jiān)脻舛葹?0%~90%的乙醇分2~3次提取，每100克殘?jiān)看涡枰?00~500毫升的乙醇，每次提取的時(shí)間是I~3小時(shí)，收集得到提取液；
[0013]c.所述的提取液進(jìn)行濃縮得到濃縮液；
[0014]d.用與濃縮液等體積的乙酸乙酯對所述的濃縮液進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯的萃取液；
[0015]e.蒸干所述的萃取液得到提取物。
[0016]每100g五倍子需要300毫升的石油醚浸泡。
[0017]所述的浸泡時(shí)間為18~36小時(shí)。
[0018]所述的乙醇濃度為70~90%。
[0019]所述的浸泡時(shí)間為24小時(shí)，每100克殘?jiān)看涡枰?00毫升的乙醇，所述的乙醇濃度為80%，所述的步驟(b)中的提取次數(shù)為2次。
[0020]本發(fā)明還包括一種用上述方法提取的五倍子的乙酸乙酯提取物，其特征在于該提取物含有主要成分:石榴皮鞣素，香草醛，六羥基二苯酰胺葡萄糖，鞣花單寧，楊梅苷，原兒茶素，五倍子單寧倍酰葡萄糖，五倍子單寧，鞣花酸，3，5- 二咖啡?？鼘幩幔琈onogalloyl—glucos eο
[0021]本發(fā)明還包括一種藥物制劑，由所述的五倍子的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
[0022]所述制劑為片劑、膠囊、顆?；蛲鑴?。
[0023]所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，選自填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、潤濕劑、溶劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種。
[0024]所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等;
[0025]所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、淀粉、糊精、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等；
[0026]所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；
[0027]所述潤滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、微粉硅膠、滑石粉或硬脂酸鎂；
[0028]所述助懸劑選自微粉硅膠、蜂蠟、纖維素、固態(tài)聚乙二醇；
[0029]所述潤濕劑選自甘油、吐溫-80、乙氧基氫化蓖麻油或卵磷脂；
[0030]所述溶劑選自乙醇、液態(tài)聚乙二醇、異丙醇、吐溫-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油選自大豆油、蓖麻油、花生油、調(diào)和油等；
[0031]所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、月旨肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)等；
[0032]所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、檸檬酸或糖精鈉。
[0033]本發(fā)明的五倍子的乙酸乙酯提取物還可以用于制備抑制EGFR活性藥物。
[0034]在抑制EGRF活性時(shí)，五倍子的乙酸乙酯提取物的用量(即每日服用量限定為
0.lmg_3g)。
[0035]本發(fā)明還包括一種檢測所述五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對所述五倍子提取物進(jìn)行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-TOF-MS圖譜，其條件為:
[0036]a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力50psi ;干燥氣N2，流速15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50—1200 ;自動(dòng)3級質(zhì)譜；
[0037]b.色譜分析條件為:色譜柱:Waters ACQUITY UPLC TM BEHC18Column (50mm32.1mm.1 d., 1.7 μ m) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.35mL/min,梯度洗脫的程序如下:
【權(quán)利要求】
1.一種五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于該方法由以下步驟組成: a.將五倍子加入到石油醚中浸泡12~48小時(shí)，每100g五倍子需要300~500毫升的石油醚，然后滲濾回收殘?jiān)? b.所述的殘?jiān)脻舛葹?0%~90%的乙醇分2~3次提取，每100克殘?jiān)看涡枰?00~500毫升的乙醇，每次提取的時(shí)間是I~3小時(shí)，收集得到提取液； c.所述的提取液進(jìn)行濃縮得到濃縮液； d.用與濃縮液等體積的乙酸乙酯對所述的濃縮液進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯的萃取液； e.蒸干所述的萃取液得到提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于每100g五倍子需要300毫升的石油醚浸泡。
3.如權(quán)利要求1所述的五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的浸泡時(shí)間為18~36小時(shí)。
4.如權(quán)利要求1所述的五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的乙醇濃度為70~90%ο
5.如權(quán)利要求1所述的五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，其特征在于所述的浸泡時(shí)間為24小時(shí)，每100克殘?jiān)看涡枰?00毫升的乙醇，所述的乙醇濃度為80%，所述的步驟(b)中的提取次數(shù)為2次。
6.一種用權(quán)利要求1所述方法提取的五倍子的乙酸乙酯提取物，其特征在于該提取物含有主要成分:石榴皮鞣素，香草醛，六羥基二苯酰胺葡萄糖，鞣花單寧，楊梅苷，原兒茶酸，五倍子單寧倍酰葡萄糖，五倍子單寧，鞣花酸-己糖，3，5- 二咖啡酰奎寧酸，Monogalloyl—glucoseο
7.—種藥物制劑，由權(quán)利要求6所述的五倍子的乙酸乙酯提取物和藥學(xué)上可接受的載體組成。
8.權(quán)利要求6所述五倍子的乙酸乙酯提取物在制備抑制EGFR活性藥物中的應(yīng)用。
9.一種檢測權(quán)利要求6所述五倍子的乙酸乙酯提取物的方法，用超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)儀對所述五倍子提取物進(jìn)行分析，以獲得乙酸乙酯提取物的UPLC-Q-T0F-MS圖譜，其特征在于: a.質(zhì)譜條件為:ESI離子源，正離子模式檢測；霧化器N2壓力50psi;干燥氣N2，流速15L/min ;質(zhì)量掃描范圍50—1200 ;自動(dòng)3級質(zhì)譜； b.色譜分析條件為:色譜柱:WatersACQUITY UPLC TM BEH C18Column(50mmX2.lmm.1 d., 1.7ym) ;二元梯度洗脫，A相為0.1%甲酸水溶液；B相為乙腈，流速為0.35mL/min，梯度洗脫的程序如下:
【文檔編號】G01N30/36GK103690567SQ201310680435
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月28日
【發(fā)明者】陳士林, 黃林芳, 王冬梅, 林森森, 卞兆祥, 徐宏喜, 楊大堅(jiān), 陳新滋 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所, 香港浸會大學(xué)