一種測定麥長管蚜抗藥性的方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種檢測麥長管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，快速檢測麥長管蚜田間種群對藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量：吡蟲啉為4289ng/cm2，抗蚜威為103ng/cm2，氧化樂果為224ng/cm2,高效氯氰菊酯為4695ng/cm2。本發(fā)明方法使用簡便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測麥長管蚜抗性水平，克服了傳統(tǒng)生測方法用樣本數(shù)量大、操作繁瑣、費時等缺點，可用于快速檢測麥長管蚜田間種群抗性水平。
【專利說明】一種測定麥長管蚜抗藥性的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種對農(nóng)業(yè)害蟲抗藥性進行監(jiān)測的測定技術(shù)方法，具體地說，涉及一種檢測麥長管蚜抗藥性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]麥長管蚜是世界性的為害小麥的重要農(nóng)業(yè)害蟲之一，遍及世界各個產(chǎn)麥國，在我國南北麥區(qū)均有發(fā)生。麥長管蚜不僅能夠直接刺吸植物營養(yǎng)，造成植物嚴重失水和營養(yǎng)不良，還可以傳播病毒，對植物造成更大的間接傷害，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失。長期以來，對麥長管蚜的防治主要以化學防治為主，由于化學殺蟲劑的大量、持續(xù)及不合理使用，致使許多國家和地區(qū)的麥長管蚜對常用殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗藥性。
[0003]麥長管蚜抗藥性的形成和發(fā)展給化學防治造成了很大困難，如何快速、準確的檢測麥長管蚜抗藥性水平是非常重要的?，F(xiàn)在用于抗藥性監(jiān)測的方法主要包括傳統(tǒng)的生物測定、生化檢測法、免疫學方法以及分子生物學方法。通常情況下，生物測定是最直接、最接近田間檢測的方法。
[0004]由于各種藥劑作用機理的不同，短時間內(nèi)昆蟲的中毒反應也各不相同，因此利用這個特點發(fā)展的玻璃管藥膜診斷劑量，能夠快速檢測田間種群的抗性水平，這一應用也是田間快速檢測抗性的重要手段。
[0005]毒力測定是室內(nèi)了解害蟲抗藥性常用的方法，但傳統(tǒng)的浸液法和點滴法進行毒力測定，操作繁瑣，要設定若干濃度和重復，以保證結(jié)果的可信度。玻璃管藥膜法是新出現(xiàn)的一種快速檢測害蟲抗藥性的方法，由于其作用效果明顯，縮短了檢查結(jié)果的時間，但對于濃度和重復問題上仍然與傳統(tǒng)方法一樣，沒有改進。利用本發(fā)明的診斷劑量，輔以玻璃管藥膜法，不僅利用了玻璃管藥膜法的快速檢測特點，而且在診斷劑量下可快速了解害蟲抗性，解決的傳統(tǒng)毒力測定實驗繁瑣的程序，提高了效率，并可用于田間害蟲抗藥性的快速檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種使用簡便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測麥長管蚜抗性水平的方法。
[0007]為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了一種檢測麥長管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，檢測麥長管蚜田間種群對藥劑的抗性水平，所述藥劑為吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量:吡蟲啉為4289ng/cm2，抗蚜威為103ng/cm2,氧化樂果為224ng/cm2，高效氯氰菊酯為4695ng/cm2。
[0008]其中，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑采用玻璃管藥膜法對室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群進行藥劑毒力測定，計算LC99作為藥劑的診斷劑量。
[0009]上述室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群為采集各地麥長管蚜田間種群，混合后，室內(nèi)飼養(yǎng)多代得至IJ?；旌戏N群是各地采集麥長管蚜種群，混合后飼養(yǎng)多代，因此該種群中含有各抗性水平的麥長管蚜個體，在生測、酶活及分子水平上都表現(xiàn)有不同抗性，以該種群作為本發(fā)明實驗種群，更接近田間種群，實驗結(jié)果更可靠、更準確。
[0010]進一步地，藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的:
[0011](I)麥長管蚜田間種群的室內(nèi)飼養(yǎng):采集各地麥長管蚜田間種群，混合飼養(yǎng)多代，獲得室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群；
[0012](2)丙酮稀釋四種殺蟲藥劑為不同的濃度梯度作為毒力測定濃度；
[0013](3)玻璃管藥膜的制作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑制作毒力測定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁，直至丙酮完全揮發(fā)；
[0014](4)毒力測定:用步驟(3)中制備的玻璃管進行麥長管蚜的毒力測定，至少進行三次生物學重復；
[0015](5)結(jié)果及診斷劑量:對步驟(4)的結(jié)果做毒力回歸曲線，并計算LC99得出各個藥劑的診斷劑量。
[0016]其中，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，并且用丙酮溶解，稀釋至5?7個濃度梯度。
[0017]其中，步驟(4)中每次毒力測定實驗做三次簡單獨立重復。
[0018]其中，步驟(5)用POLO軟件計算結(jié)果及診斷劑量。
[0019]本發(fā)明的有益效果在于:
[0020]本發(fā)明方法使用簡便，結(jié)果直觀明了，適用于田間快速檢測麥長管蚜抗性水平，克服了傳統(tǒng)生測方法用樣本數(shù)量大、操作繁瑣、費時等缺點，可用于快速檢測麥長管蚜田間種群抗性水平。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1為本發(fā)明所用診斷玻璃管；
[0022]圖2為本發(fā)明實驗選用的無翅成蚜。
【具體實施方式】
[0023]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0024]實施例1診斷劑量的獲得
[0025]1.研究對象
[0026]本發(fā)明的研究對象為實驗室飼養(yǎng)多代的各地麥長管蚜混合種群。
[0027]2.方法
[0028]供試藥劑吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果和高效氯氰菊酯，用玻璃管藥膜法，進行毒力測定。
[0029]2.1原藥母液的配置及稀釋
[0030]將原藥溶解于丙酮中，定容后裝于藥劑瓶中，封口膜封口，保存于4°C冰箱中。
[0031]毒力測定前，用丙酮將原藥母液稀釋到各濃度，備用。
[0032]2.2玻璃管藥膜的制作
[0033]實驗所用玻璃管(如圖1所示)必須經(jīng)過嚴格的洗滌，確保沒有任何藥物殘留。從稀釋好的藥液中吸取220 μ L加入到直徑1.7cm,高7.5cm的玻璃管(內(nèi)表面積40cm2)中，滾動玻璃管至藥液均勻吸附在玻璃管內(nèi)壁，直至丙酮完全揮發(fā)，對照單獨用丙酮處理，制作好的玻璃管藥膜室溫下過夜使用。
[0034]2.3毒力測定供試蚜蟲的選擇
[0035]選用室內(nèi)飼養(yǎng)的麥長管蚜種群，挑取健康一致的無翅成蚜(如圖2所示)進行實驗，每個制備好的藥膜管放置20頭蚜蟲，在室內(nèi)正常飼養(yǎng)條件下(溫度20~25°C，相對濕度50% ~75%，光照 16L:8D)0
[0036]2.4檢查結(jié)果及死亡標準的判斷
[0037]3h后檢查結(jié)果，其中只有一條腿動或者完全不動的記為死，以對照死亡率小于10%為有效測定，并用對照死亡率進行校正。每個藥劑6~7個濃度，每個濃度3次重復，數(shù)據(jù)處理采用POLO分析軟件，4種殺蟲藥劑對麥長管蚜的毒力測定結(jié)果如表1所示，計算LC99，即診斷劑量，該診斷劑量可用于快速檢測麥長管蚜田間種群對吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果和高效氯氰菊酯的抗性水平。
[0038]表1四種殺蟲藥劑對麥長管蚜的毒力測定結(jié)果
[0039]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測麥長管蚜抗藥性的方法，在藥劑的診斷劑量下制作診斷玻璃管，檢測麥長管蚜田間種群個體對藥劑的抗性水平，其特征在于，所述藥劑吡蟲啉、抗蚜威、氧化樂果或高效氯氰菊酯；藥劑的診斷劑量:卩比蟲啉為4289ng/cm2,抗姆威為103ng/cm2,氧化樂果為224ng/cm2,高效氯氰菊酯為4695ng/cm2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，藥劑的診斷劑量是通過不同濃度的藥劑采用玻璃管藥膜法對室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群進行藥劑毒力測定，計算LC99作為藥劑的診斷劑量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群為采集各地麥長管蚜田間種群，混合后，室內(nèi)飼養(yǎng)多代得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，藥劑的診斷劑量是通過如下步驟確定的: (1)麥長管蚜田間種群的室內(nèi)飼養(yǎng):采集各地麥長管蚜田間種群，混合飼養(yǎng)多代，獲得室內(nèi)飼養(yǎng)混合種群； (2)丙酮稀釋四種殺蟲藥劑至不同濃度梯度作為毒力測定濃度； (3)玻璃管藥膜的制作:用步驟(2)中丙酮稀釋的各梯度藥劑制作毒力測定所用的玻璃管藥膜，每管加入220 μ L各濃度藥液，滾動玻璃管直至丙酮完全揮發(fā)，使藥液均勻分布在玻璃管內(nèi)壁上； (4)毒力測定:用步驟(3)中制備的玻璃管進行麥長管蚜的毒力測定； (5)結(jié)果及診斷劑量:對步驟(4)的結(jié)果做毒力回歸曲線，并計算LC99得出各個藥劑的診斷劑量。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所用的殺蟲藥劑均為95%以上的原藥，并且用丙酮溶解，稀釋至6?7個濃度梯度。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(4)中每次毒力測定實驗做三次簡單獨立重復。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(5)用POLO軟件計算結(jié)果及診斷劑量。
【文檔編號】G01N33/48GK103698498SQ201310682351
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月12日
【發(fā)明者】高希武, 辛娟娟, 魯艷輝, 劉曉嵐, 張帥, 肖達, 楊婷, 王思一, 宋敦倫 申請人:中國農(nóng)業(yè)大學