一種燕窩鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明提出了一種燕窩鑒定方法。其特征在于采用核磁共振檢測(cè)。步驟為，前處理待鑒樣品：將待鑒樣品研磨成細(xì)粉，將細(xì)粉加含10%以上氘帶水的1%磷酸水溶液，在沸水中水浴加熱，冷卻后離心；取上清液至5mm核磁管中，將核磁管加封；設(shè)置技術(shù)參數(shù)，通過核磁共振儀采集樣品的1H-NMR譜圖；通過燕窩和待鑒樣品的1H-NMR譜圖對(duì)比，判斷燕窩的真?zhèn)?。方法?jiǎn)單易于操作，對(duì)分析樣品稱量無需非常精確，前處理可以一批同時(shí)進(jìn)行，將燕窩水解后直接對(duì)混合物進(jìn)行核磁檢測(cè)得到核磁共振氫譜；精確度高，速度快，采樣時(shí)間短；數(shù)據(jù)分析簡(jiǎn)單。
【專利說明】一種燕窩鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及燕窩的鑒定方法，尤其涉及一種核磁共振檢測(cè)燕窩的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]核磁共振作為一種重要的現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段，以強(qiáng)大的結(jié)構(gòu)解析能力確定了其在現(xiàn)代儀器分析中的地位，被廣泛應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、環(huán)境科學(xué)、生物，食品科學(xué)等眾多領(lǐng)域。但核磁共振一直以來因?yàn)橄鄬?duì)其他化學(xué)分析儀器檢測(cè)靈敏度不高而受人詬病。近年來，隨著磁場(chǎng)強(qiáng)度的提高、高靈敏探頭的出現(xiàn)、譜儀與實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)，核磁共振的檢測(cè)靈敏度得到了大幅度提高，已不再是制約核磁共振應(yīng)用的一個(gè)關(guān)鍵因素。Malz等就線性、穩(wěn)定性、專屬性、選擇性和準(zhǔn)確性等定量分析的基本問題對(duì)定量核磁共振方法(qNMR)進(jìn)行了系統(tǒng)的考察分析，并組織了多家國(guó)際上高水平的實(shí)驗(yàn)室對(duì)3個(gè)實(shí)際樣品進(jìn)行了比對(duì)分析，結(jié)果表明以氫譜核磁共振(IHNMR)為基礎(chǔ)建立的核磁共振定量分析方法的不確定度小于
1.5%，完全可以同HPLC等經(jīng)典定量分析方法媲美。從實(shí)驗(yàn)原理、設(shè)備功能和方法學(xué)等角度分析，核磁共振技術(shù)均能滿足定量分析要求，完全可作為日常食藥真?zhèn)舞b定分析的一種常規(guī)檢測(cè)手段。
[0003]利用核磁共振技術(shù)對(duì)食品和藥品的真?zhèn)舞b定主要包括幾個(gè)優(yōu)勢(shì):1)樣品前處理簡(jiǎn)便:核磁共振樣品預(yù)處理環(huán)節(jié)少，操作簡(jiǎn)便，能大大縮短實(shí)驗(yàn)周期。2)實(shí)驗(yàn)高效快速:NMR實(shí)驗(yàn)可以同時(shí)提供物質(zhì)結(jié)構(gòu)和含量信息，因此鑒定和檢測(cè)可同步進(jìn)行。3)對(duì)有機(jī)物的普適性:核磁共振實(shí)驗(yàn)是一種無偏向性的測(cè)試方法，能同時(shí)分析鑒定混合物中的多種組分，為定量分析中基準(zhǔn)物的選擇提供了較為寬松的空間；4)異構(gòu)體分析能力強(qiáng):核磁共振對(duì)異構(gòu)體獨(dú)特的識(shí)別能力是許多測(cè)試技術(shù)所不能比擬的。
[0004]目前燕窩真?zhèn)舞b定方法主要是經(jīng)驗(yàn)鑒別法、顯微鑒別法(主要通過燕窩和常見摻假物如豬皮，瓊脂，樹膠，白木耳等的顯微特征的不同來鑒別燕窩的真?zhèn)?和儀器鑒別法。儀器鑒別法主要包括了凝膠電泳法(根據(jù)天然燕窩特有的譜帶來區(qū)別不同的燕窩)、紅外光譜法(主要是通過紅外光譜法來建立燕窩的特征譜圖。不同的燕窩都有自己的特征圖譜，可通過比較譜圖吸收峰的波數(shù)位置和相對(duì)峰強(qiáng)度的差異來鑒定燕窩的真?zhèn)?、氣相色譜法(通過測(cè)定燕窩中氨基酸的總含量、組成以及某些氨基酸在摻假物中比例的變化進(jìn)行鑒別。)、液相色譜法(通過測(cè)定經(jīng)水解后燕窩中特征物質(zhì)-唾液酸來檢測(cè))、分光光度法(利用乙酸酸水解燕窩中的唾液糖蛋白成唾液酸來進(jìn)行檢測(cè))等。這些方法中有的準(zhǔn)確性不高，靈敏度低；有的提取純化程序冗長(zhǎng)，重現(xiàn)性不好，造假者在假燕窩中添加某一唾液酸，便可蒙混過關(guān)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于以燕窩為研究對(duì)象，建立一種基于核磁共振氫譜(1H-NMR)與模式識(shí)別方法相結(jié)合的指紋識(shí)別分析方法，用于鑒別真假燕窩。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種燕窩鑒定方法，其特征在于，采用核磁共振檢測(cè)。[0007]進(jìn)一步的，所述鑒定方法為包括如下步驟，
前處理待鑒樣品:將燕窩和待鑒樣品研磨成細(xì)粉，將細(xì)粉加含10%以上氘帶水的1%磷酸水溶液，在沸水中水浴加熱，冷卻后離心；取上清液至5 mm核磁管中，將核磁管加封；設(shè)置技術(shù)參數(shù)，通過核磁共振儀采集樣品的IH-NMR譜圖；
數(shù)據(jù)分析:通過燕窩和待鑒樣品的IH-NMR譜圖對(duì)比，判斷燕窩的真?zhèn)巍?br> [0008]進(jìn)一步的，所述前處理為將燕窩和待鑒樣品研磨成細(xì)粉，分別稱取10到20mg細(xì)粉加含10%以上氘帶水的1%磷酸水溶液I mL，在沸水中水浴加熱20min，冷卻后離心；各批樣本離心后取上清液400到900 μ L，轉(zhuǎn)移至5 mm核磁管中，將核磁管密封。
[0009]所述細(xì)粉的粒徑為500微米以下。
[0010]所述離心條件為3000到20000rpm，5分鐘。
[0011]所述技術(shù)參數(shù)為:以90% H2O + 10% D2O或D2O鎖場(chǎng),使用脈沖序列noesygpprld(654.7處壓制水峰，試驗(yàn)溫度為25°C ;譜寬SffH 15000.00Hz，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)TD 32768，掃描次數(shù)NS 32次，延遲時(shí)間Dl 2 S，接收增益RG 203。
[0012]所述核磁共振儀為300兆以上的核磁共振波譜儀。
[0013]所述數(shù)據(jù)分析為對(duì)待鑒樣品所得IH-NMR數(shù)據(jù)經(jīng)傅立葉變換得到譜圖，然后調(diào)整相位并進(jìn)行基線校正；將d0.3^4.6范圍內(nèi)的譜按照每段0.004到0.04 ppm進(jìn)行分段積分；將積分按每張譜的總積分強(qiáng)度歸一化；所得數(shù)據(jù)輸出并轉(zhuǎn)換到Excel文件保存；然后輸入到SMCA-P軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析；分析前先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行平均中心化處理和Pareto標(biāo)度處理；采用主成分分析法PCA對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理；分段積分值作為自變量(X)，樣本的分類變量作為因變量(Y);分析結(jié)果以前兩個(gè)主成分(PC) t (I) /t (2)作得分圖，與正品燕窩的數(shù)據(jù)聚在一起的就是正品燕窩，能明顯區(qū)分開來`的就不是正品燕窩。
[0014]本發(fā)明應(yīng)用核磁共振氫譜法測(cè)定燕窩中的總提取物，前處理方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快，不同來源的燕窩樣品的IHNMR指紋圖譜具有很好的重現(xiàn)性和高度的特征性。
[0015]燕窩核磁共振指紋圖譜是一種綜合的、整體的鑒定手段，其應(yīng)用在于鑒別真?zhèn)?，并還可評(píng)價(jià)燕窩質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性，其基本屬性是“整體性”和“模糊性”。核磁共振具有高度的重現(xiàn)性和特征性，易于解析和進(jìn)一步研究，這是其他光譜學(xué)方法無可比擬的。本發(fā)明運(yùn)用核磁共振技術(shù)對(duì)燕窩進(jìn)行指紋圖譜研究，探索簡(jiǎn)便易行的指紋圖譜分析方法。通過不同燕窩圖譜相似度分析，表明工藝流程穩(wěn)定，重現(xiàn)性良好。核磁共振技術(shù)可以作為燕窩指紋圖譜研究的輔助方法來鑒別燕窩。
[0016]IHNMR是有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)鑒定的強(qiáng)有力手段之一，將其用于燕窩鑒定是繼紫外和紅外等光譜指紋圖譜之后的新嘗試。因燕窩是分子量較大的唾液糖蛋白，并不適合用核磁共振進(jìn)行直接檢測(cè)，若直接進(jìn)行核磁檢測(cè)則耗時(shí)并難以解析，本發(fā)明選擇適當(dāng)?shù)乃夥蛛x方法，將唾液酸從唾液酸糖蛋白的結(jié)合狀態(tài)游離出來，獲取燕窩特征性化學(xué)成分水溶性總提取物(燕窩特定的小分子水解產(chǎn)物)，通過對(duì)燕窩水解產(chǎn)物進(jìn)行整體分析，測(cè)定其IHNMR指紋圖譜。圖譜具有特征性，如人的指紋一樣，沒有混淆的余地，具有唯一性。若要將其特征物質(zhì)衍生化或分離提純進(jìn)行分析，將增添繁重的前處理工作。本發(fā)明中將這些總提物進(jìn)行整體分析，可以反映燕窩的更為全面的特征，使得前處理大大簡(jiǎn)化，加快了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，準(zhǔn)確性和靈敏度也有較大的提高。經(jīng)過多次提取和多次測(cè)試，每次的譜圖都十分吻合，說明重現(xiàn)性很好。得到的燕窩特征提取物核磁共振指紋圖譜，可以成為燕窩產(chǎn)品的鑒定依據(jù)之一。
[0017]本發(fā)明燕窩的鑒定方法需要對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的前處理，然后進(jìn)行核磁譜圖的采集，其特點(diǎn)是譜圖采集(采樣時(shí)間幾分鐘)及分析時(shí)間短，只需比對(duì)特征指紋譜便可知燕窩真?zhèn)巍?br> [0018]燕窩所含主要特征成分唾液酸具有特定構(gòu)型和種類，見圖3，其中R為多種不同取代基團(tuán)。唾液酸根據(jù)5位碳上R基團(tuán)的不同可分為四類:即N-乙酰神經(jīng)氨酸，N-羥乙酰神經(jīng)氨酸，去氨基神經(jīng)氨酸和神經(jīng)氨酸。燕窩中唾液酸以N -乙磨神經(jīng)氨酸和N -輕乙磨神經(jīng)氨酸形式為主。通過核磁共振波譜的方法可以很好地反映化合物的結(jié)構(gòu)信息，并非只針對(duì)其中一種唾液酸進(jìn)行測(cè)定，這是其它儀器所不可比擬的。而核磁共振氫譜法對(duì)燕窩樣品中總提取物進(jìn)行整體分析，燕窩作為一個(gè)唾液糖蛋白混合物具有多種化學(xué)成分，所含的唾液酸也不是單一種的唾液酸，這些特征的化學(xué)成分相對(duì)之間的含量比例是基本固定的。因此提出以燕窩特征性總成分為基礎(chǔ)的提取物鑒定方法，特征總提取物的IH NMR指紋圖譜與燕窩間存在著嚴(yán)格的對(duì)應(yīng)關(guān)系，通過IHNMR指紋圖譜分析，可以達(dá)到快速準(zhǔn)確鑒別真假燕窩的目的。
[0019]同現(xiàn)有技術(shù)比較，本法不僅省去了唾液酸衍生化的過程，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，而且具有穩(wěn)定性及重復(fù)性好、靈敏度高等特點(diǎn)，對(duì)所有組分的靈敏度一致，無偏向性。同時(shí)，IH-NMR指紋圖譜還可以提供化學(xué)位移、偶合常數(shù)、峰裂分情況以及峰面積等大量重要的結(jié)構(gòu)信息。能夠準(zhǔn)確地反映出燕窩中多種唾液酸的信息，可以用作燕窩質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的定性定量方法。
[0020]本發(fā)明建立了一種基于IH-NMR的指紋識(shí)別分析方法，旨在從化學(xué)組成方面快速、簡(jiǎn)單地區(qū)分真假燕窩，為燕窩的質(zhì)量控制和鑒定提供新思路。
[0021]與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，本方法具有以下優(yōu)點(diǎn):實(shí)驗(yàn)步驟簡(jiǎn)單:樣品無需準(zhǔn)確稱量定量，歸一化和標(biāo)準(zhǔn)化可以去除樣品間的差別；將燕窩水解，得到幾種唾液酸、檸檬酸等水溶性混合物，不分離直接對(duì)混合物進(jìn)行核磁檢測(cè)。得到核磁共振氫譜，譜圖反映了水解產(chǎn)物的總體特征，從整體上，多組分來作為燕窩的鑒別標(biāo)志。2.精確度高，圖譜采集、處理以及數(shù)據(jù)分析均有計(jì)算機(jī)完成，避免人為誤差的干擾。3.速度快，采樣時(shí)間短，只需幾分鐘。檢測(cè)時(shí)可以僅對(duì)檢測(cè)樣品進(jìn)行測(cè)試，帶入數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，檢測(cè)速度快，只需幾分鐘就可以完成，大大減小了工作量。4、方法簡(jiǎn)單易于操作，對(duì)分析樣品稱量無需非常精確，前處理可以一批同時(shí)進(jìn)行。5、數(shù)據(jù)分析簡(jiǎn)單，主成分分析結(jié)果只需肉眼觀察，與正品燕窩聚集在一起的是真燕窩，遠(yuǎn)離正品燕窩的為假燕窩。具有單一性、全面性、易辯性的特點(diǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為正品燕窩指紋IH氫譜圖；
圖2是10個(gè)樣品的指紋IH氫譜圖；
圖3為唾液酸的結(jié)構(gòu)式圖；
圖4為用PCA進(jìn)行模式識(shí)別的得分圖；
圖5是中南馬區(qū)毛燕的IHNMR譜圖；
圖6是東海岸毛燕的IHNMR譜圖；
圖7是東馬區(qū)毛燕的IHNMR譜圖；
圖8是北馬區(qū)毛燕的IHNMR譜圖； 圖9是印尼血燕的IHNMR譜圖；
圖10是印尼毛燕的IHNMR譜圖；
圖11是假白燕的IHNMR譜圖；
圖12是豬皮的IHNMR譜圖；
圖13是瓊脂的IHNMR譜圖；
圖14是白木耳的IHNMR譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類似的標(biāo)號(hào)表示相同或類似的元件或具有相同或類似功能的元件。下面通過參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，旨在用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0024]實(shí)施例1:核磁共振鑒定燕窩 材料與試劑:
氘代水(阿達(dá)瑪斯，瑞士)，磷酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán))，試驗(yàn)樣品:中南馬區(qū)毛燕、東海岸毛燕、東馬區(qū)毛燕、北馬區(qū)毛燕、印尼血燕、印尼毛燕、假白燕、假血燕均由廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局提供；瓊脂、白木耳和豬皮。試驗(yàn)樣品均可以市面上購(gòu)得。
[0025]儀器:
AVANCE III 600超導(dǎo)核磁共振波譜儀(布魯克，瑞士)，電子天平(精確到0.0OOlg ；Sartorious,德國(guó))，電熱爐(朝鳳CL-200,中國(guó)江蘇)。
[0026]前處理:
將上述10種樣品分別研磨成細(xì)粉(粒徑500微米以下)，取10到20mg細(xì)粉于1.5mL離心管中，加I mLl%磷酸水溶液(含10%以上氘帶水)，在沸水中水浴加熱20min，冷卻后離心(3000到20000rpm)。各批樣本離心后取上清液600 μ L，轉(zhuǎn)移至5 mm核磁管中，將核磁管加封，直接用于IH-NMR測(cè)試。
[0027]測(cè)定條件:
AVANCE III 600超導(dǎo)核磁共振波譜儀(質(zhì)子激發(fā)頻率:600.13 MHz )，配置BBO正相觀察寬帶探頭和BVT3200數(shù)字控溫儀(瑞士 Bruker公司)。氘帶水(D2O,氘代度> 99.8%，美國(guó)Norell公司)
IH-NMR測(cè)試在所有樣品測(cè)試中使用統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)參數(shù)。以90% H2O + 10% D2O鎖場(chǎng)，使用脈沖序列noesygpprld在δ 4.7處壓制水峰，試驗(yàn)溫度為25°C ;主要參數(shù):譜寬(SWH)15000.00Hz，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)(TD) 32768，掃描次數(shù)(NS) 32次，延遲時(shí)間(Dl) 2 S，接收增益(RG) 203。
[0028]2.3譜圖處理與分析
對(duì)上述所得NMR數(shù)據(jù)經(jīng)傅立葉變換得到譜圖，然后調(diào)整相位并進(jìn)行基線校正?；瘜W(xué)位移在0.3?4.6范圍內(nèi)的譜按照每段0.01 ppm進(jìn)行分段積分。積分值按每張譜的總積分強(qiáng)度歸一化。所得數(shù)據(jù)輸出并轉(zhuǎn)換到Excel文件保存，然后輸入到SIMCA-P+12.0軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析。分析前先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行平均中心化處理和Pareto標(biāo)度處理。采用主成分分析法(PCA)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。分段積分值作為自變量(X)，樣本的分類變量作為因變量(Y)。分析結(jié)果以前兩個(gè)主成分(PC)t(l)/t(2)作得分圖(如圖4)。
[0029]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
不同來源燕窩和假燕窩的區(qū)分
得到的指紋1H氫譜結(jié)果見圖1、2，5-14。其中圖1為正品燕窩指紋1H氫譜；在圖1中，橫坐標(biāo)為化學(xué)位移；化學(xué)位移0.3到4.6ppm區(qū)間的峰為燕窩的特征指紋峰。圖2自上而下分別為1,2,3、4、5、6、7、8、9、10號(hào)樣品的指紋1H氫譜；橫坐標(biāo)為化學(xué)位移；1到6號(hào)正品燕窩指紋譜峰中化學(xué)位移0.3到4.6ppm區(qū)間的峰為燕窩的特征指紋峰。樣品具體信息:1號(hào)(中南馬區(qū)毛燕)，2號(hào)(東海岸毛燕)，3號(hào)(東馬區(qū)毛燕)，4號(hào)(北馬區(qū)毛燕)，5號(hào)(印尼血燕)，6號(hào)(印尼毛燕)，7號(hào)(假白燕)，8號(hào)(豬皮)，9號(hào)(瓊脂)，10號(hào)(白木耳)。從10個(gè)IHNMR圖譜(圖5-14)可以看出，第1、2、3、4、5、6號(hào)樣品具有較高的相似度，同時(shí)從圖4中可以看到正品燕窩集聚一個(gè)小的范圍內(nèi)，7號(hào)樣品假白燕、8號(hào)樣品豬皮、9號(hào)樣品瓊脂、10號(hào)樣品白木耳的共振峰差異性巨大，在圖4中呈分散分布，且遠(yuǎn)離正品燕窩?？梢宰鳛楸鎰e燕窩真假的依據(jù)。正品燕窩化學(xué)位移S 2.7-2.9的共振峰是檸檬酸的指紋圖譜，可能是由于燕子唾液中本身含有少量檸檬，筑巢時(shí)混入燕窩中。因其在燕窩的水解產(chǎn)物中穩(wěn)定存在，因此將其一并列為真假燕窩辨別的特征指紋。
[0030]實(shí)驗(yàn)比較了不同地區(qū)不同種類以及常用摻假材料共10個(gè)批次燕窩。PCA是采用線性投影將原來的多個(gè)變量空間轉(zhuǎn)換轉(zhuǎn)化成一組新的正交變量的模式識(shí)別分析方法，相互正交的新變量稱為“主成分”，主要用于對(duì)高維數(shù)據(jù)空間進(jìn)行降維，從而降低數(shù)據(jù)的復(fù)雜性。以PC1/PC2作圖獲得PCA得分矩陣圖(圖4)，獲得好的分組信息，使10個(gè)燕窩樣品中真假燕窩可以明顯區(qū)分。
[0031]如圖4，其中R2X[1]為第一主成分對(duì)變量的解釋能力，即解釋變量的46.18%;R2X[2]為第二主成分對(duì)變量的解釋能力，即解釋變量的33.45%。從圖中可以看出，10個(gè)批次燕窩核磁氫譜PCA分析結(jié)果顯示，不同來源的正品燕窩相似度很高，差異性非常??；而假燕窩的IH NMR數(shù)據(jù)差異性顯著。通過PCA分析成功實(shí)現(xiàn)了真假燕窩的區(qū)分。從得分圖可以看到正品燕窩組同假燕窩組能明顯區(qū)分開來，紅圈中是正品燕窩1、2、3、4、5、6，6組數(shù)據(jù)很好地聚集在一起，假燕窩組數(shù)據(jù)較為分散，反映了假燕窩取材不是單一品種的。
[0032]可以看出核磁共振結(jié)合模式識(shí)別的方法能鑒別出真假燕窩，是一種快捷簡(jiǎn)便的測(cè)試方法，且測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確度高，為燕窩分析和品質(zhì)檢測(cè)提供了一種快捷的檢測(cè)方法。
[0033]盡管上面已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實(shí)施例，可以理解的是，上述實(shí)施例是示例性的，不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明的原理和宗旨的情況下在本發(fā)明的范圍內(nèi)可以對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行變化、修改、替換和變型。
【權(quán)利要求】
1.一種燕窩鑒定方法，其特征在于，采用核磁共振檢測(cè)。
2.權(quán)利要求1所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述鑒定方法為包括如下步驟， 前處理待鑒樣品:將燕窩和待鑒樣品研磨成細(xì)粉，將細(xì)粉加含10%以上氘帶水的1%磷酸水溶液，在沸水中水浴加熱，冷卻后離心；取上清液至5 mm核磁管中，將核磁管加封； 設(shè)置技術(shù)參數(shù)，通過核磁共振儀采集樣品的IH-NMR譜圖； 數(shù)據(jù)分析:通過燕窩和待鑒樣品的IH-NMR譜圖對(duì)比，判斷燕窩的真?zhèn)巍?br> 3.權(quán)利要求2所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述前處理為將燕窩和待鑒樣品分別研磨成細(xì)粉，分別稱取10到20mg細(xì)粉加含10%以上氘帶水的1%磷酸水溶液I mL，在沸水中水浴加熱20min，冷卻后離心；各批樣本離心后取上清液400到900 μ L，轉(zhuǎn)移至5 mm核磁管中，將核磁管密封。
4.權(quán)利要求2所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述細(xì)粉的粒徑為500微米以下。
5.權(quán)利要求2所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述離心條件為3000到20000rpm，5分鐘。
6.權(quán)利要求1所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述技術(shù)參數(shù)為:以90%H2O + 10%D2O或D2O鎖場(chǎng),使用脈沖序列noesygpprld在δ 4.7處壓制水峰,試驗(yàn)溫度為25°C ;譜寬SffH 15000.00Hz，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)TD 32768，掃描次數(shù)NS 32次，延遲時(shí)間Dl 2 S，接收增益RG 203。
7.權(quán)利要求1所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述核磁共振儀為300兆以上的核磁共振波譜儀。
8.權(quán)利要求1所述的燕窩鑒定方法，其特征在于，所述數(shù)據(jù)分析為對(duì)待鑒樣品所得IH-NMR數(shù)據(jù)經(jīng)傅立葉變換得到譜圖，然后調(diào)整相位并進(jìn)行基線校正；將d0.3^4.6范圍內(nèi)的譜按照每段0.004到0.04 ppm進(jìn)行分段積分；將積分按每張譜的總積分強(qiáng)度歸一化；所得數(shù)據(jù)輸出并轉(zhuǎn)換到Excel文件保存；然后輸入到SIMCA-P軟件進(jìn)行多元統(tǒng)計(jì)分析；分析前先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行平均中心化處理和Pareto標(biāo)度處理；采用主成分分析法PCA對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理；分段積分值作為自變量(X)，樣本的分類變量作為因變量(Y);分析結(jié)果以前兩個(gè)主成分(PC) t (I)/t (2)作得分圖，與正品燕窩的數(shù)據(jù)聚在一起的就是正品燕窩，能明顯區(qū)分開來的就不是正品燕窩。
【文檔編號(hào)】G01N24/08GK103698353SQ201310742605
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年12月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月30日
【發(fā)明者】徐敦明, 黃慧英, 高志亮, 吳敏, 周昱 申請(qǐng)人:廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心