一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，由底板、背襯和蓋板依次由下而上疊加組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，可將反應結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。蓋板上設置加樣孔和觀察窗，觀察窗分為檢測區(qū)和控制區(qū)。試劑板利用免疫膠體金法可進行飼料中玉米赤霉烯酮含量的半定量直觀檢測，適合飼料生產(chǎn)加工企業(yè)，檢驗檢疫機構(gòu)等對飼料樣品的大規(guī)模篩檢。
【專利說明】一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種膠體金檢測試劑板，更具體地，本實用新型涉及一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板。
【背景技術(shù)】
[0002]玉米赤霉烯酮(zeara lenone, ZEN)又稱F-2毒素,首先從有赤霉病的玉米中分離得到，其產(chǎn)毒菌是鐮刀菌屬的菌侏，主要由禾谷鐮刀菌產(chǎn)生，粉紅鐮刀菌、三線鐮刀菌等多種鐮刀菌也能產(chǎn)生這種毒素。玉米赤霉烯酮有多種衍生物，如7-脫氫玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸等。玉米赤霉烯酮的耐熱性較強，在食品或飼料加工過程中均不易破壞，主要污染玉米、小麥、大麥等糧谷類作物。
[0003]研究表明，玉米赤霉烯酮及其代謝物具有類雌激素作用，引起動物發(fā)生雌激素亢進癥，導致不孕或流產(chǎn)；能造成動物急慢性中毒，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的中毒癥狀，如惡心、發(fā)冷、頭痛、神智抑郁和共濟失調(diào)等，甚至死亡。給畜牧場造成巨大經(jīng)濟損失。此外，很多資料顯示ZEA具有生殖發(fā)育、免疫毒性，肝毒性，潛在致癌性等，最新研究顯示其對女性乳腺腫瘤發(fā)生也有一定影響。玉米赤霉烯酮污染飼料和食品后，不僅使農(nóng)業(yè)經(jīng)濟受到嚴重影響，而且還會帶來嚴重的食品安全問題，威脅到人類的健康。
[0004]目前，對動物玉米赤霉烯酮中毒尚無特效藥治療，為了控制ZEN對人和動物產(chǎn)生的危害，必須對飼料、谷物等中玉米赤霉烯酮含量進行檢測，確定是否含有玉米赤霉烯酮。歐盟規(guī)定仔豬日糧中ZEN的最高限量為100μ g/kg ;意大利規(guī)定在谷物和谷類產(chǎn)品中ZEN的含量不能超過100 μ g/kg ;中國GB13078.2-2006飼料衛(wèi)生標準中規(guī)定飼料中玉米赤霉烯酮的限量為500μ g/kg，GB2761-2011食品安全國家標準規(guī)定食品中玉米赤霉烯酮限量為60 μ g/kg。
[0005]目前，比較常用的ZEN檢測方法有薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法-質(zhì)譜法(GC-MS)、生物檢測法和免疫學檢測法等。薄層色譜分析法是較早用于毒素檢測的一種方法，操作人員無需經(jīng)過專門培訓，且成本低，無需價格昂貴的儀器。但此方法所需試劑繁多，檢測周期長，靈敏度不高等，已遠不能滿足現(xiàn)代檢測要求。高效液相色譜法、氣相色譜法-質(zhì)譜法等儀器分析方法具有準確度高、靈敏性強、可微量測定等優(yōu)點，且氣相色譜法-質(zhì)譜法可同時檢測不同的鐮刀菌毒素，適合于飼料中ZEN的定量分析。但設備昂貴、對樣品中毒素純度的要求較高，導致檢測成本高、周期長，無法滿足大批量樣品快速篩選的需要，所以使用受到限制。微生物檢測法雖然待檢樣品不需很純，但方法專一性差，靈敏度低，主要用于定性，一般只作為化學分析法的佐證。
[0006]ELISA法是免疫學檢測方法之一，具有特異、快速、靈敏度高和成本低的特點，適用于基層機構(gòu)大量樣品的篩選和普查。但此方法需接觸ZEN標準品，不利于保護操作者的健康，且酶的活性易受溫度影響，因此試劑需要低溫保藏、壽命短，并易造成測定結(jié)果重復性較差。實用新型內(nèi)容
[0007]為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷，本實用新型針對檢測需求，研制開發(fā)了一種檢測玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板和檢測試劑盒，通過膠體金免疫法檢測飼料中的玉米赤霉烯酮。試劑板檢測限符合要求，重現(xiàn)性好，檢測時間短，適合現(xiàn)場快速檢測，且檢測過程中無需昂貴的儀器設備，也無需使用玉米赤霉烯酮標準品，有利于保護操作者。
[0008]為了實現(xiàn)上述目的，本實用新型采用的技術(shù)方案是:一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，包括底板、背襯和蓋板，所述背襯上依次緊密粘貼的樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，相鄰各部分間有1_2_的重疊，其中，所述膠體金結(jié)合墊包被膠體金標記的抗體；所述硝酸纖維素膜包被特異性結(jié)合抗原和多克隆抗體。
[0009]優(yōu)選的，所述底板、背襯和蓋板由上而下依次壓制為一體。
[0010]優(yōu)選的，所述硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，所述檢測線包被玉米赤霉烯酮-BSA特異性結(jié)合抗原，所述控制線包被羊抗鼠多克隆抗體。
[0011]優(yōu)選的，所述膠體金顆粒的粒徑大小約為30nm，所述膠體金標記的抗體為玉米赤霉烯酮單克隆抗體。
[0012]優(yōu)選的，所述樣品墊由玻璃纖維制成，所述膠體金結(jié)合墊由聚酯膜制成，所述吸水墊為濾紙。
[0013]優(yōu)選的，所述底板和蓋板為兩塊塑料模板，所述蓋板上設置加樣孔和觀察窗，所述加樣孔和觀察窗不均勻的分布在蓋板上，所述加樣孔和觀察窗之間有間隔，所述觀察窗分為檢測區(qū)和控制區(qū)。
[0014]本實用新型試劑板應用層析式抗體免疫競爭原理，通過抗原和金標抗體反應顯色，特異性檢測飼料樣品中的玉米赤霉烯酮含量，如果樣品溶液中含有玉米赤霉烯酮，玉米赤霉烯酮就先和膠體金顆粒上的玉米赤霉烯酮單克隆抗體結(jié)合，而無法與檢測線上的玉米赤霉烯酮特異性抗原結(jié)合。當樣品中的玉米赤霉烯酮含量等于或超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測線顯色較控制線淺甚至無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中玉米赤霉烯酮含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測線顯色與控制線相近或偏深，判定為陰性。
[0015]本實用新型試劑板由底板、背襯和蓋板組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。底板、背襯和蓋板由上而下依次壓制為一體。
[0016]膠體金結(jié)合墊上包被有膠體金標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有玉米赤霉烯酮-BSA特異性結(jié)合抗原和羊抗鼠多克隆抗體IgG，分別作為檢測線和控制線。偶聯(lián)玉米赤霉烯酮的載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白等。蓋板上設置加樣孔和觀察窗，加樣孔和觀察窗不均勻的分布在蓋板上，加樣孔和觀察窗之間有間隔，觀察窗分為檢測區(qū)和控制區(qū)。
[0017]本實用新型試劑板的各部分組成成分和功能如下:
[0018]底板、蓋板，為兩塊塑料模板，起固定背襯和標示各功能區(qū)(加樣孔、檢測區(qū)、控制區(qū))的作用。
[0019]背襯，由一面涂有不干膠的不吸水韌性材料制成，起固定支撐試劑板其他組成部分的作用。
[0020]樣品墊，由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液和緩沖樣品溶液pH值的作用。[0021]膠體金結(jié)合墊，由聚酯膜制成，其上有抗玉米赤霉烯酮單克隆抗體與膠體金顆粒的結(jié)合物，為樣品溶液中有效成分和金標抗體反應提供場所。
[0022]硝酸纖維素膜，從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，將反應結(jié)果以肉眼可見的顏色表征出來。
[0023]吸水墊，由濾紙制成，將反應過程中多余的溶液吸收。
[0024]本實用新型試劑板具有如下有益效果:
[0025](I)特異性好。本實用新型試劑板對玉米赤霉烯酮的交叉反應率為100%，對嘔吐毒素、伏馬菌素、赭曲霉毒素A等真菌毒素的交叉反應率均低于I %。可見，本實用新型試劑板對玉米赤霉烯酮反應具有高度專一性。
[0026](2)靈敏度高。本實用新型試劑板對飼料中玉米赤霉烯酮的最低檢出限為100 μ g/kg，符合國家限量要求，在對飼料中玉米赤霉烯酮的快速檢測領(lǐng)域中達到了較優(yōu)水平。根據(jù)實際檢測需求，通過對樣品前處理過程中上層溶液、專用稀釋液用量的不同可調(diào)整試劑板的檢測限，具體見表1，適用于各類企業(yè)及檢測機構(gòu)。
[0027]表1玉米赤霉烯酮免疫膠體金快速檢測試劑板檢出限參照表
[0028]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，包括底板、背襯和蓋板，所述背襯上依次緊密粘貼的樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，相鄰各部分間有1-2 mm的重疊，其中，所述膠體金結(jié)合墊包被膠體金標記的抗體；所述硝酸纖維素膜包被特異性結(jié)合抗原和多克隆抗體。
2.如權(quán)利要求1所說的檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，所述底板、背襯和蓋板由上而下依次壓制為一體。
3.如權(quán)利要求1所說的檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，所述硝酸纖維素膜從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，所述檢測線包被玉米赤霉烯酮-BSA特異性結(jié)合抗原，所述控制線包被羊抗鼠多克隆抗體。
4.如權(quán)利要求1所說的檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，所述膠體金標記的抗體為玉米赤霉烯酮單克隆抗體。
5.如權(quán)利要求1所說的檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，所述樣品墊由玻璃纖維制成，所述膠體金結(jié)合墊由聚酯膜制成，所述吸水墊為濾紙。
6.如權(quán)利要求1所說的檢測飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，其特征在于，所述底板和蓋板為兩塊塑料模板，所述蓋板上設置加樣孔和觀察窗，所述加樣孔和觀察窗不均勻的分布在蓋板上，所述加樣孔和觀察窗之間有間隔，所述觀察窗分為檢測區(qū)和控制區(qū)。
【文檔編號】G01N33/558GK203535047SQ201320335935
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年6月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月13日
【發(fā)明者】洪平, 鄔本成, 孫滿義 申請人:安佑生物科技集團有限公司