一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型屬免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體公開(kāi)了一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于所提供檢測(cè)試劑盒由檢測(cè)條和塑料卡盒組成。檢測(cè)條是在襯板上將樣品墊a、膠體金墊、樣品墊b、硝酸纖維素膜、吸樣墊進(jìn)行有序組合；硝酸纖維素膜上設(shè)置包被解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a的檢測(cè)線(xiàn)和羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體的質(zhì)控線(xiàn)；膠體金墊上固化膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b；檢測(cè)條安裝于塑料卡盒內(nèi)。本實(shí)用新型提供的試劑盒應(yīng)用“雙抗體夾心”免疫技術(shù)原理，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速、無(wú)需專(zhuān)門(mén)儀器設(shè)備的優(yōu)點(diǎn)，適用于臨床對(duì)解脲支原體感染的快速檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及醫(yī)學(xué)臨床免疫檢測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]解脲支原體(Ureaplasma urealyticum,UU)是一類(lèi)介于細(xì)菌與病毒之間的最小原核微生物，屬支原體的一種，因生長(zhǎng)需要尿素而得名。菌體微小，直徑僅有15?25um，屬于柔膜綱脲原體目脲原體科的脲原體屬，主要分布于人體泌尿生殖道，是除沙眼衣原體外最常見(jiàn)的非淋病性尿道炎的病原菌。解脲支原體，除引起非淋菌性尿道炎、宮頸炎、輸卵管炎，導(dǎo)致不孕不育，還可通過(guò)母嬰垂直傳播(宮內(nèi)和產(chǎn)道)，引起宮內(nèi)感染而導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、新生兒呼吸道感染、腦膜炎等不良后果。國(guó)內(nèi)外資料顯示，不孕癥夫婦的宮頸粘液、精液中解脲支原體培養(yǎng)陽(yáng)性率高達(dá)50%以上；從流產(chǎn)的組織中檢查出解脲支原體的陽(yáng)性率高達(dá)40%以上；解脲支原體占非淋球菌陰道炎的67.6% ;在宮頸炎和陰道炎病例中，解脲支原體檢出率為67%。近年來(lái)，泌尿生殖道支原體感染在性傳播疾病(STD)中發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，特別是在非淋球菌性尿道炎患者中解脲支原體的檢出率占首位。因此，解脲支原體的檢測(cè)在泌尿生殖系統(tǒng)疾病的診斷上具有重要意義。
[0003]目前臨床診斷工作中，檢測(cè)解脲支原體的主要方法有培養(yǎng)法、PCR法、免疫學(xué)方法等。培養(yǎng)法是傳統(tǒng)的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，特異性高，但敏感性低、培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，易污染等因素影響，尤其新生兒病情變化迅速標(biāo)本不便采集，因此難以接受；PCR法憑借著敏感，特異等優(yōu)點(diǎn)逐漸顯示出了其臨床診斷的優(yōu)越性，但需要特殊的儀器和專(zhuān)門(mén)的人員操作，不利于基層醫(yī)院的推廣使用；免疫學(xué)方法包括ELISA法、單克隆或多克隆免疫熒光法(IFA)、膠體金法等，其快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、易于標(biāo)準(zhǔn)化和商品化等優(yōu)勢(shì)，使其在臨床快速檢測(cè)上具有很好的發(fā)展前景并易于開(kāi)發(fā)成商品化試劑盒。
[0004]膠體金快速診斷技術(shù)是在20世紀(jì)90年代以來(lái)在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新型層析材料基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)，近年來(lái)發(fā)展迅速，在生物領(lǐng)域尤其是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)基于以下原理:利用膠體金標(biāo)記一種抗原或抗體，在硝酸纖維素膜檢測(cè)層上包被相應(yīng)配對(duì)的特異性抗原或抗體，當(dāng)待測(cè)樣品中含有相對(duì)應(yīng)的特異性抗體或抗原時(shí)，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，與膠體金標(biāo)記物相結(jié)合形成待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物，在移動(dòng)至特異性抗原或抗體包被區(qū)時(shí)，待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，形成肉眼可觀(guān)察的色帶。通過(guò)檢測(cè)線(xiàn)的有無(wú)實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)果的判定。該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)迅速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適用于任何場(chǎng)地、經(jīng)濟(jì)適用等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]目前國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)到應(yīng)用膠體金快速診斷技術(shù)檢測(cè)解脲支原體抗原的檢測(cè)卡。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本實(shí)用新型是為了提供一種解脲支原體抗原的金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，用于臨床快速檢測(cè)、流行病學(xué)調(diào)查等。所述檢測(cè)試劑盒應(yīng)用“雙抗體夾心”的免疫原理，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)迅速，操作簡(jiǎn)便、無(wú)需專(zhuān)門(mén)設(shè)施等特點(diǎn)，為臨床提供一種快速簡(jiǎn)潔的診斷方法。
[0007]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，其使用方法包括下述步驟:取女性宮頸樣本或男性尿道樣本與樣品處理液混勻，再將混合液滴加于檢測(cè)試劑盒的加樣孔中，3^15分鐘即可判讀檢測(cè)結(jié)果。若樣品溶液中含有解脲支原體MB蛋白，則觀(guān)察窗處檢測(cè)線(xiàn)(C線(xiàn))和質(zhì)控線(xiàn)(T線(xiàn))均顯色，結(jié)果判定為陽(yáng)性；若樣品溶液中不含解脲支原體MB蛋白，則觀(guān)察窗處僅質(zhì)控線(xiàn)(C線(xiàn))顯色，結(jié)果判定為陰性。
[0008]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，由解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條、塑料卡盒和樣品處理液組成。
[0009]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，包括樣品墊a、膠體金墊、樣品墊b、硝酸纖維素膜、吸樣墊、襯板；檢測(cè)條是在襯板上依次設(shè)有樣品墊a、硝酸纖維素膜、吸樣墊；在膠體金墊下有樣品墊a，在膠體金墊上有樣品墊b ;在硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)。
[0010]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒塑料卡盒，其特征在于塑料卡盒蓋上依次有加樣孔和觀(guān)察窗，塑料卡盒蓋靠近觀(guān)察窗設(shè)有產(chǎn)品簡(jiǎn)稱(chēng)和樣本編號(hào)，觀(guān)察窗上設(shè)有結(jié)果判別標(biāo)識(shí)T和C ;塑料卡盒底部設(shè)有的單卡槽；塑料卡盒蓋和盒底通過(guò)凸起連接。
[0011]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條安裝在塑料卡盒底部的單卡槽內(nèi)，樣品墊b和膠體金墊對(duì)應(yīng)塑料卡盒的加樣孔處，所述硝酸纖維素膜對(duì)應(yīng)塑料卡盒觀(guān)察窗處，所述檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)分別對(duì)應(yīng)觀(guān)察窗的T線(xiàn)和C線(xiàn)。
[0012]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑條膠體金墊標(biāo)記物為解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b，膠體金的載體為無(wú)紡布或玻璃纖維。
[0013]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其特征在于質(zhì)控線(xiàn)包被羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體。
[0014]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其特征在于檢測(cè)線(xiàn)包被解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a。
[0015]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其特征在樣品墊a/b為無(wú)紡布。
[0016]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其特征在于吸樣墊為吸水濾紙。
[0017]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)卡盒設(shè)有連接裝置，盒蓋和盒底可拆卸式連接，一方面盒蓋和盒底可重復(fù)使用，節(jié)省資源。
[0018]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其膠體金墊的制備方法如下:i膠體金的制備:在濃度為0.004%~0.012%的氯金酸中加入其體積的1.3%~2%、濃度為1%~3%的檸檬酸三鈉，煮沸10-20分鐘，可得到15~50納米的膠體金溶液；ii膠體金標(biāo)記解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b:將(i)中所得膠體金溶液中用0.2M碳酸鉀溶液調(diào)pH至8.0-8.4，按4"l2mg/100ml加入解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b,攪拌均勻后,按0.1 "0.6g/100ml在溶液中加入動(dòng)物血清蛋白，4°C靜置2~4小時(shí)；iii將(ii)中所得膠體金溶液經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心10-15分鐘，去沉淀物，取上清液；iv將(iii)中所得上清液經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘離心60~80分鐘，取上清液，取沉淀物；v將(iv)中所得沉淀物按4~10ml/100ml溶于0.02M pH7.4 Tris-Hcl緩沖液(該緩沖液中含0.2%~0.6%的動(dòng)物血清蛋白和0.ΟΡ/1-Ο.06%疊氮鈉)中，得膠體金溶液；vi將玻璃纖維或無(wú)紡布浸入(V)中所得膠體金溶液中，待浸入的玻璃纖維或無(wú)紡布有液體滲出為止，37°C干燥，即得膠體金墊。
[0019]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其質(zhì)控線(xiàn)和檢測(cè)線(xiàn)的包被方法如下:取解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a，調(diào)濃度為lmg/ml，加入適量甲醛，用專(zhuān)用噴膜機(jī)在NC膜中段噴檢測(cè)線(xiàn)；取羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體，調(diào)濃度為2mg/ml，加入適量甲醛，用專(zhuān)用噴膜機(jī)在NC膜中段，距檢測(cè)線(xiàn)0.5cm處噴質(zhì)控線(xiàn)(11)，檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)均按10-20 μ Ι/ml設(shè)置噴量，噴膜后37°C條件下干燥2小時(shí)；在37°C條件下，用含10%小牛血清的0.01M pH 7.0PBS液(磷酸鹽緩沖溶液)封閉30分鐘，用0.01M pH 7.0 PBS漂洗，37°C干燥，即得。
[0020]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于所用樣品處理液包括樣品處理液A和樣品處理液B，樣品處理液A為0.01M pH7.2的磷酸鹽緩沖溶液，樣品處理液B為0.9%的氯化鈉溶液。
[0021]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條采用免疫層析技術(shù)和抗原抗體特異性結(jié)合原理。本產(chǎn)品以膠體金標(biāo)記解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b,以解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a、羊抗鼠IgG抗體分別包被硝酸纖維素膜的檢測(cè)線(xiàn)(T線(xiàn))和質(zhì)控線(xiàn)(C線(xiàn))，當(dāng)待測(cè)樣品中含有解脲支原體MB蛋白時(shí)，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，與膠體金標(biāo)記物相結(jié)合形成待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物，在移動(dòng)至解脲支原體MB蛋白單克隆抗體包被區(qū)時(shí)，待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，形成肉眼可觀(guān)察的紅色條帶；待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物繼續(xù)向前移動(dòng)，與包被在質(zhì)控線(xiàn)(C線(xiàn))上的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體結(jié)合，形成紅色條 帶。無(wú)論待測(cè)樣本中是否存在解脲支原體MB蛋白，質(zhì)控線(xiàn)上包被的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體都會(huì)與膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b結(jié)合形成一條紅色線(xiàn)(C線(xiàn))。C線(xiàn)的顯色是判定是否有足夠樣本，層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為該檢測(cè)卡的內(nèi)部質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。若硝酸纖維素膜上質(zhì)控線(xiàn)和檢測(cè)線(xiàn)均不出現(xiàn)，則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
[0022]本實(shí)用新型使用以上技術(shù)方案，提供了一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒。本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)便、使用方便快捷、無(wú)需專(zhuān)門(mén)的設(shè)施，且能滿(mǎn)足臨床樣本快速檢測(cè)、體檢、流行病學(xué)普查等的要求，容易普及到基層醫(yī)院。以符號(hào)顯示結(jié)果，結(jié)果觀(guān)察更為直觀(guān)、快捷，同時(shí)也擺脫了對(duì)儀器設(shè)備、人員的特殊要求，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，具有準(zhǔn)確、快捷、方便、價(jià)廉的特點(diǎn)。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1是本實(shí)用新型檢測(cè)卡的立體結(jié)構(gòu)示意圖:
[0024]I 一檢測(cè)卡盒 2—加樣孔3—觀(guān)察窗
[0025]4 一樣品編號(hào) 5—廣品簡(jiǎn)稱(chēng)。
[0026]圖2是本實(shí)用新型檢測(cè)卡盒蓋的結(jié)構(gòu)示意圖:
[0027]2 一加樣孔3—觀(guān)察窗6—凸起。
[0028]圖3是本實(shí)用新型檢測(cè)卡盒底的結(jié)構(gòu)示意圖:
[0029]6—凸起7—單卡槽。
[0030]圖4本實(shí)用新型檢測(cè)卡中檢測(cè)條的結(jié)果示意圖:
[0031]8—檢測(cè)條9一樣品墊a10—膠體金墊
[0032]11 一樣品塾b 12—硝酸纖維素膜13—檢測(cè)線(xiàn)[0033]14 一質(zhì)控線(xiàn)15—吸樣墊16—襯板。
【具體實(shí)施方式】
[0034]提供下述實(shí)施例是為了能更好的理解本實(shí)用新型，并不局限于所述最佳實(shí)施方式，任何人在本實(shí)用新型的啟示下或是將本實(shí)用新型與其他現(xiàn)有技術(shù)的特征進(jìn)行組合而得出的任何與本實(shí)用新型相同或相似的產(chǎn)品，均落在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0035]本實(shí)用新型用于檢測(cè)解脲支原體抗原，用于臨床樣本快速檢測(cè)、體檢、流行病學(xué)普查等。結(jié)果觀(guān)察更為直觀(guān)、快捷，擺脫了對(duì)儀器設(shè)備、人員的特殊要求，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，具有操作簡(jiǎn)便、使用方便、無(wú)需專(zhuān)門(mén)的設(shè)施、準(zhǔn)確、快捷、方便、價(jià)廉的特點(diǎn)。
[0036]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，其使用方法包括下述步驟:取女性宮頸樣本或男性尿道樣本與樣品處理液混勻，再將混合液滴加于檢測(cè)卡的加樣孔中，3~15分鐘即可判讀檢測(cè)結(jié)果。若樣品溶液中含有解脲支原體MB蛋白，則觀(guān)察窗處檢測(cè)線(xiàn)(C線(xiàn))和質(zhì)控線(xiàn)(T線(xiàn))均顯色，結(jié)果判定為陽(yáng)性；若樣品溶液中不含解脲支原體MB蛋白，則觀(guān)察窗處僅質(zhì)控線(xiàn)(T線(xiàn))均顯色，結(jié)果判定為陰性。
[0037]本實(shí)用 新型的解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，包括解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條、塑料卡盒和樣品處理液。
[0038]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條(8)，包括樣品墊a (9)、膠體金墊(10)、樣品墊b (11)、硝酸纖維素膜(12)、吸樣墊(15)、襯板(16);檢測(cè)試劑條是在襯板(16)上依次設(shè)有樣品墊a (9)、膠體金墊(10)、硝酸纖維素膜(12)、吸樣墊(15);在膠體金墊(10)上有樣品墊b (11);在硝酸纖維素膜(12)上包被有檢測(cè)線(xiàn)(13)和質(zhì)控線(xiàn)(14)。具體操作如下:在襯板(16)中部粘貼包被檢測(cè)線(xiàn)(13)和質(zhì)控線(xiàn)(14)的硝酸纖維素膜(12)，樣品墊a (9)位于硝酸纖維素膜(12)的一側(cè)，并與其有部分重疊；在樣品墊a (9)上設(shè)有膠體金墊(10)，在膠體金墊(10)上設(shè)有樣品墊b (11)，并使膠體金墊(10)和樣品墊b (11)與硝酸纖維素膜(12)有部分重疊，在硝酸纖維素膜(12)的另一側(cè)粘貼有吸樣墊(15)，且與硝酸纖維素膜
(12)也有部分重疊，固定。然后按4-5毫米寬、8厘米長(zhǎng)規(guī)格切條。參考附圖4。
[0039]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條制備方法主要包括膠體金墊(10)的制備和硝酸纖維素膜(12)上檢測(cè)線(xiàn)(13)和質(zhì)控線(xiàn)(14)的包被。
[0040]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其膠體金墊(10)其制備方法包括以下步驟:i膠體金的制備:取IOOmg氯金酸溶于1000ml三蒸水中，加入15ml、在濃度為1%的朽1檬酸三鈉，煮沸15分鐘，可得到15~50納米的膠體金溶液；ii膠體金標(biāo)記解脲支原體MB蛋白單克隆抗體:取(i)中所得膠體金溶液100ml，用0.2M碳酸鉀溶液調(diào)pH至8.2，加入4mg解脲支原體MB蛋白單克隆抗體，攪拌20分鐘后，在溶液中加入240mg牛血清白蛋白，繼續(xù)攪拌5分鐘，4°C靜置4小時(shí)；iii將(ii)中所得膠體金溶液經(jīng)2000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，去沉淀物，取上清液；iv將(iii)中所得上清液經(jīng)10000轉(zhuǎn)/分鐘離心60分鐘，取上清液，取沉淀物；V將(iv)中所得沉淀物按5ml/100ml溶于0.02M pH 7.4 Tris-Hcl緩沖液(該緩沖液中含0.25%的牛血清白蛋白和0.02%疊氮鈉)中，得膠體金溶液；vi將無(wú)紡布浸Λ(ν)中所得膠體金溶液中，待浸入的無(wú)紡布有液體滲出為止，37°C干燥2小時(shí)，即得。
[0041]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條，其檢測(cè)線(xiàn)(13)和質(zhì)控線(xiàn)(14)的包被方法為:取解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a，調(diào)濃度為lmg/ml，加入0.2%甲醛，用專(zhuān)用噴膜機(jī)在NC膜中段噴檢測(cè)線(xiàn)(13);取羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體調(diào)濃度為2mg/ml，加入0.2%甲醛，用專(zhuān)用噴膜機(jī)在NC膜中段，距檢測(cè)線(xiàn)0.5cm處噴質(zhì)控線(xiàn)(14)，檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)均按20 μ I/ml設(shè)置噴量，噴膜后37°C條件下干燥2小時(shí)；在37°C條件下，用含10%小牛血清的0.0lMpH 7.0 PBS液(磷酸鹽緩沖溶液)封閉30分鐘，用0.0lM pH 7.0 PBS漂洗，37°C干燥，即得。
[0042]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)條安裝在塑料卡盒底部的單卡槽內(nèi)，樣品墊b
(11)和膠體金墊(10)對(duì)應(yīng)塑料卡盒的加樣孔(2)處，所述硝酸纖維素膜(12)對(duì)應(yīng)于塑料卡盒觀(guān)察窗處，所述檢測(cè)線(xiàn)(13)和質(zhì)控線(xiàn)(14)分別對(duì)應(yīng)于觀(guān)察窗(3)的T線(xiàn)和C線(xiàn)。
[0043]所述樣品墊a/b (9/11)為無(wú)紡布；所述膠體金墊(10)標(biāo)記抗體為解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b ;所述質(zhì)控線(xiàn)(14)包被的抗體為羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體；所述檢測(cè)線(xiàn)(13)包被的抗體為解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a ;所述吸樣墊(15)為吸水濾紙；所述襯板(16)為PVC膠板。
[0044]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，其特征在于所用樣品處理液包括樣品處理液A和樣品處理液B，樣品處理液A為0.0lM pH7.2的磷酸鹽緩沖溶液，樣品處理液B為0.9%的氯化鈉溶液。
[0045]所述解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒采用免疫層析技術(shù)和抗原抗體特異性結(jié)合原理。其具體使用方法如下:1將樣品處理液A液，滴6滴(300ul)加入樣品處理管中。II將樣品拭子放入滴有樣品稀釋液A液的處理管內(nèi)，室溫2分鐘，在處理過(guò)程中要多次旋轉(zhuǎn)并在管壁上擠壓拭子，使液體不斷被擠出。III 2分鐘后加入6滴(300ul)樣品處理液B液，在管壁擠壓拭子，使液體盡量擠出，隨后將拭子丟棄在密封的醫(yī)療垃圾容器內(nèi)，按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行處置。IV撕開(kāi)鋁箔袋取出測(cè)試板平放，用吸管滴加約2滴處理好的樣品液在測(cè)試板右端的圓加樣孔中，3?5分鐘后觀(guān)察測(cè)試板中部檢視窗的結(jié)果，20分鐘內(nèi)觀(guān)察結(jié)果有效。當(dāng)待測(cè)樣品溶液中含有解脲支原體MB蛋白時(shí)，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，與膠體金標(biāo)記物相結(jié)合形成待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物，在移動(dòng)至解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a包被區(qū)時(shí)，待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，形成肉眼可觀(guān)察的紅色條帶；待測(cè)物膠體金標(biāo)記復(fù)合物繼續(xù)向前移動(dòng)，與包被在質(zhì)控線(xiàn)(C線(xiàn))上的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體結(jié)合，形成紅色條帶，則結(jié)果為陽(yáng)性；當(dāng)待測(cè)樣品溶液中含有解脲支原體MB蛋白時(shí)，只在質(zhì)控線(xiàn)(C線(xiàn))上出現(xiàn)紅色條帶。無(wú)論待測(cè)樣本中是否存在解脲支原體MB蛋白，質(zhì)控線(xiàn)上包被的羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體都會(huì)與膠體金標(biāo)記的解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b結(jié)合形成一條紅色線(xiàn)(C線(xiàn))。C線(xiàn)的顯色是判定是否有足夠樣本，層析過(guò)程是否正常的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)也作為該檢測(cè)卡的內(nèi)部質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。若反應(yīng)膜上質(zhì)控線(xiàn)線(xiàn)和檢測(cè)線(xiàn)均不出現(xiàn)，則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
[0046]本實(shí)用新型操作簡(jiǎn)便、使用方便快捷、無(wú)需專(zhuān)門(mén)的設(shè)施，且能滿(mǎn)足臨床樣本快速檢測(cè)、體檢、流行病學(xué)普查等的要求，容易普及到基層醫(yī)院。以符號(hào)顯示結(jié)果，結(jié)果觀(guān)察更為直觀(guān)、快捷，同時(shí)也擺脫了對(duì)儀器設(shè)備、人員的特殊要求，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，具有準(zhǔn)確、快捷、方便、價(jià)廉的特點(diǎn)。
【權(quán)利要求】
1.一種解脲支原體抗原金標(biāo)快速檢測(cè)試劑盒，包括檢測(cè)條和塑料卡盒；檢測(cè)條由樣品墊、膠體金墊、硝酸纖維素膜、吸樣墊和襯板組成，樣品墊a、膠體金墊、樣品墊b、硝酸纖維素膜、吸樣墊，由下到上依次粘貼在襯板上；在硝酸纖維素膜上包被有檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)；塑料卡盒由盒蓋與盒底組成，盒蓋上設(shè)有加樣孔和觀(guān)察窗，正面靠近觀(guān)察窗處標(biāo)注有產(chǎn)品說(shuō)明文字，盒底內(nèi)面設(shè)有的卡槽，盒蓋與盒底通過(guò)凹凸連接；檢測(cè)條安裝在塑料卡盒底部的卡槽內(nèi)，樣品墊b對(duì)應(yīng)塑料卡盒的加樣孔處，硝酸纖維素膜對(duì)應(yīng)塑料卡盒觀(guān)察窗處，檢測(cè)線(xiàn)和質(zhì)控線(xiàn)分別對(duì)應(yīng)塑料卡盒觀(guān)察窗T和C標(biāo)示處。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述膠體金墊為固化膠體金標(biāo)記解脲支原體MB蛋白單克隆抗體b的無(wú)紡布或玻璃纖維；所述檢測(cè)線(xiàn)上包被解脲支原體MB蛋白單克隆抗體a，所述質(zhì)控線(xiàn)上包被的抗體為羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG抗體。
3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述樣品墊a和樣品墊b為無(wú)紡布；所述吸樣墊為吸水濾紙；所述襯板為PVC膠板。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK203772870SQ201320634463
【公開(kāi)日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2013年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月15日
【發(fā)明者】李克生, 杜惠芬 申請(qǐng)人:李克生, 杜惠芬