本發(fā)明涉及測(cè)定樣品中的LAL反應(yīng)物質(zhì)濃度的領(lǐng)域。更具體而言，本發(fā)明涉及與美國(guó)、歐洲和日本藥典細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試(“BET”)和全球等價(jià)藥典BET標(biāo)準(zhǔn)相容的預(yù)裝載的測(cè)試基板和新測(cè)量方法。相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本專利申請(qǐng)享有下述專利申請(qǐng)的利益：于2012年10月8日提交并且名稱為MICROFLUIDICBACTERIAENDOTOXINTESTINGMETHODANDAPPARATUS的臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)61/710,908；于2012年10月8日提交并且名稱為CENTRIPETALMICROFLUIDICPLATFORMFORBACTERIALENDOTOXINTESTING的臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)61/710,990；于2012年10月8日提交并且名稱為SENSITIVEANDRAPIDMETHODFORDETECTIONOFLOWLEVELSOFENDOTOXINSUSINGLALREAGENTS的臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)61/710,898；以及于2012年10月8日提交并且名稱為MICROPLATESPRELOADEDWITHENDOTOXINDETECTIONREAGENTSWITHCALIBRATIONMEANS的臨時(shí)專利申請(qǐng)序列號(hào)61/710,903。所有上文列出的專利申請(qǐng)均以引用的方式并入本說(shuō)明書(shū)。

背景技術(shù)：
微生物污染例如革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母和真菌可在人中引起嚴(yán)重疾病，甚至死亡。當(dāng)人們變得被革蘭氏陰性菌感染時(shí)，該細(xì)菌可產(chǎn)生誘導(dǎo)發(fā)熱的細(xì)菌內(nèi)毒素。內(nèi)毒素可為危險(xiǎn)的且甚至對(duì)人是致命的。其為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖組分的內(nèi)毒素分子可存在于藥物制劑和醫(yī)療裝置的表面上，獨(dú)立于微生物污染。即使系統(tǒng)通過(guò)無(wú)菌測(cè)試，也可發(fā)生內(nèi)毒素污染，這是需要獨(dú)立的內(nèi)毒素測(cè)試的原因。目前，已開(kāi)發(fā)使用來(lái)自鱟的血細(xì)胞裂解物的多種測(cè)定，用于檢測(cè)被測(cè)試樣品中或樣品上的內(nèi)毒素存在。當(dāng)血細(xì)胞裂解物暴露于內(nèi)毒素時(shí)，將發(fā)生凝固。血細(xì)胞裂解物是由多個(gè)鱟物種的血淋巴產(chǎn)生的變形細(xì)胞裂解物，所述多個(gè)鱟物種包括鱟屬(Limulus)、東方鱟屬(Tachypleus)和褐鱟屬(Carcinoscorpius)物種。常用的變形細(xì)胞裂解物由鱟屬或東方鱟屬物種的血淋巴產(chǎn)生，被稱為鱟變形細(xì)胞裂解物(“LAL”)。使用LAL作為測(cè)試試劑的常規(guī)測(cè)試包括凝膠凝固測(cè)定、終末點(diǎn)濁度測(cè)定、動(dòng)力學(xué)濁度測(cè)定、終末點(diǎn)生色測(cè)定和動(dòng)力學(xué)生色測(cè)定。使用LAL試劑的測(cè)試還可用于測(cè)試葡聚糖，這是真菌污染的標(biāo)記。關(guān)于LAL測(cè)定和所使用標(biāo)準(zhǔn)的更多信息可在美國(guó)藥典(“USP”)第85章“BacterialEndotoxinsTest”(“BET”)、日本藥典4.01“BacterialEndotoxinTest”、歐洲藥典2.6.14“BacterialEndotoxins”及其他等價(jià)國(guó)家藥典中找到。上文列出的藥典中的許多已經(jīng)被統(tǒng)一。另外的國(guó)際統(tǒng)一的藥典信息可在ICHQ4BAnnex14“BacterialEndotoxinTestGeneralChapter”中找到。關(guān)于醫(yī)療裝置中的內(nèi)毒素測(cè)試，信息可在USP第161章“TransfusionandInfusionAssembliesandSimilarMedicalDevices”和ANSI/AAMIST72“Bacterialendotoxins-Testmethods，routinemonitoring，andalternativestobatchtesting”中找到。這些標(biāo)準(zhǔn)和程序一般可被稱為正式綱要(compendia)。制藥行業(yè)、醫(yī)療裝置行業(yè)和食品行業(yè)中的制造商必須滿足某些標(biāo)準(zhǔn)，以確保它們的產(chǎn)品不含微生物或內(nèi)毒素污染。這些行業(yè)需要關(guān)于內(nèi)毒素存在的頻繁、準(zhǔn)確和靈敏的測(cè)試，以滿足多種安全標(biāo)準(zhǔn)，例如由美國(guó)食品與藥品管理局或環(huán)境保護(hù)局(EnvironmentalProtectionAgency)設(shè)定的安全標(biāo)準(zhǔn)。這些機(jī)構(gòu)承認(rèn)正式綱要程序標(biāo)準(zhǔn)中的許多。因此，如果制造商希望獲得政府批準(zhǔn)以使新產(chǎn)品上市，如果產(chǎn)品遵從上文列出的正式綱要中的方法和標(biāo)準(zhǔn)，則可滿足FDA要求中的許多。這基本上可減少制造商獲得FDA新產(chǎn)品批準(zhǔn)的成本。多種正式綱要中的這些測(cè)定需要包含已知濃度的內(nèi)毒素的水性溶液用作“標(biāo)準(zhǔn)物”。這些水性溶液通常是不穩(wěn)定的；因此它們通常緊鄰在測(cè)試前在測(cè)試場(chǎng)所由粉狀毒素制備。LAL試劑通常還以粉末形式出現(xiàn)，并且必須在使用前在水性溶液中重構(gòu)。通常，僅需要幾毫克內(nèi)毒素和LAL粉末，因此這些粉末的準(zhǔn)確測(cè)量可能是繁瑣的。由于其細(xì)小顆粒大小，這些粉末通常粘住容器和藥匙表面，并且在測(cè)試程序期間難以局限于容器中，從而造成另外的處理問(wèn)題。使用常規(guī)測(cè)試方法，熟練的操作者必須將內(nèi)毒素和LAL粉末手動(dòng)重構(gòu)到無(wú)內(nèi)毒素的水中，同時(shí)不使試劑溶液不會(huì)受實(shí)驗(yàn)室設(shè)備或通過(guò)環(huán)境接觸污染。由于關(guān)鍵生物分子的緩慢溶劑化及其在混合期間粘住表面和其后在表面上凝結(jié)的傾向，內(nèi)毒素和LAL粉末的制備是困難的。LAL試劑還在重構(gòu)后緩慢開(kāi)始反應(yīng)，并且具有極短的貯存期限。雖然最佳實(shí)踐是在緊鄰使用前混合這些，但工作流通常需要在過(guò)程開(kāi)始時(shí)混合它們。此外，制備過(guò)程易于被在環(huán)境中普遍存在的內(nèi)毒素污染。這些機(jī)構(gòu)還需要一系列校正測(cè)試以確保使用的設(shè)備和試劑是正常工作的。校正測(cè)試和樣品測(cè)量還必須進(jìn)行超過(guò)一次。遵從BET及其他正式綱要的目前實(shí)驗(yàn)室方法是非常詳細(xì)的，并且需要流體體積的反復(fù)和高度精確測(cè)量以用于分配到微板等等的多個(gè)入口內(nèi)，而不污染。最常見(jiàn)的執(zhí)行LAL分析的方法是使用微孔板和閱讀器。將在頂部開(kāi)放且在底部具有透明窗口的反應(yīng)孔矩陣置于用于多重同時(shí)測(cè)定的加熱的分光光度計(jì)閱讀器中。存在許多缺點(diǎn)，包括制備板花費(fèi)的冗長(zhǎng)時(shí)間、它的高成本、錯(cuò)誤和污染的機(jī)會(huì)、以及該工作需要由為該任務(wù)專門(mén)訓(xùn)練且致力于該任務(wù)的技術(shù)員來(lái)完成。連續(xù)監(jiān)控高度熟練的操作者以確保適當(dāng)?shù)臏y(cè)量和測(cè)試技術(shù)和準(zhǔn)確度，并且操作者根據(jù)需要進(jìn)行再訓(xùn)練，以便確保重復(fù)動(dòng)作的準(zhǔn)確度。通常方法可具有多達(dá)248個(gè)緩慢和耗時(shí)的移液步驟，使得它由于其復(fù)雜性成為易于出錯(cuò)的方法和由于其操作長(zhǎng)度和數(shù)目成為易于污染的方法。已開(kāi)發(fā)了方法和裝置用于減少內(nèi)毒素測(cè)試的步驟量或者使內(nèi)毒素測(cè)試步驟中的一些或全部自動(dòng)化。一些方法包括使一個(gè)或多個(gè)移液或等分步驟自動(dòng)化，樣品的自動(dòng)化混合，或?qū)⒃噭╊A(yù)裝載到測(cè)試基板中，這僅允許非常有限數(shù)目的測(cè)試。其他自動(dòng)化方法依賴機(jī)械手來(lái)測(cè)量和分配微板中的樣品和試劑。一旦制備，板就手動(dòng)或使用另一個(gè)機(jī)械手裝載到閱讀器中。機(jī)械手通常是基于移液管的分配系統(tǒng)，其將樣品和試劑從小瓶支架準(zhǔn)確轉(zhuǎn)移到板，從而代替移液管頭以防止交叉污染。這是需要其機(jī)械手操作的頻繁驗(yàn)證的昂貴系統(tǒng)，并且可使用多重一次性使用的移液管、管頭、多孔板、稀釋管、移液管填充托盤(pán)、取樣小瓶等，用于每次運(yùn)行。它還按順序制備孔，并且如同手動(dòng)制備，不能同時(shí)開(kāi)始所有反應(yīng)。污染仍是問(wèn)題，因?yàn)檫^(guò)程通常是未被監(jiān)控的，所以不存在拒絕被污染樣品的合理方法。然而，所有開(kāi)發(fā)的方法或裝置均缺少下述方面中的一個(gè)或多個(gè)：設(shè)計(jì)到基板內(nèi)的低成本自動(dòng)化、確保清潔的一次性使用的清潔基板、在每個(gè)基板上的正式綱要測(cè)試順應(yīng)、內(nèi)置的個(gè)別測(cè)試測(cè)量驗(yàn)證和測(cè)量操作的簡(jiǎn)單性。相應(yīng)地，存在對(duì)更半自動(dòng)化的測(cè)試方法或程序的需要，以用于測(cè)試和分析流體樣品中的內(nèi)毒素濃度，其減少或消除遵從正式綱要的潛在操作者錯(cuò)誤的量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
相應(yīng)地，本發(fā)明公開(kāi)了其中步驟數(shù)目顯著減少的測(cè)試基板和方法，由此使污染、時(shí)間延遲和錯(cuò)配降到最低，并且因此改善準(zhǔn)確度。該方法適合于與FDA許可的LAL一起使用。公開(kāi)的測(cè)試基板和測(cè)量方法適用于藥劑和生物藥劑制造，并且與美國(guó)、歐洲和日本藥典細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試和全球等價(jià)藥典BET標(biāo)準(zhǔn)相容。對(duì)于醫(yī)療裝置制造，公開(kāi)的實(shí)施例與國(guó)際藥典以及共識(shí)的標(biāo)準(zhǔn)組織中見(jiàn)到的內(nèi)毒素條例和標(biāo)準(zhǔn)以及國(guó)際等價(jià)標(biāo)準(zhǔn)相容。本發(fā)明通過(guò)制備具有檢測(cè)試劑(可為預(yù)裝載到測(cè)試基板上的內(nèi)毒素檢測(cè)試劑和/或LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物)的專門(mén)測(cè)試基板來(lái)改善標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試(“BET”)。在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了預(yù)裝載的測(cè)試基板，其中所述預(yù)裝載的測(cè)試基板已預(yù)裝載有至少一種檢測(cè)試劑和/或至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物。這些預(yù)裝載的測(cè)試基板可用于測(cè)定水性樣品中的LAL反應(yīng)物質(zhì)濃度的測(cè)試中。如本說(shuō)明書(shū)使用的，LAL反應(yīng)物質(zhì)意指與檢測(cè)試劑反應(yīng)的物質(zhì)。LAL反應(yīng)物質(zhì)的例子包括內(nèi)毒素或1，3-β-D-葡聚糖例如昆布多糖和凝膠多糖。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物在其中包含LAL反應(yīng)物質(zhì)。本發(fā)明還可與任何商業(yè)來(lái)源的檢測(cè)試劑一起使用。合適的用于檢測(cè)LAL反應(yīng)物質(zhì)的檢測(cè)試劑包括變形細(xì)胞裂解物(美洲鱟(LimulusPolyphemus)或LAL和中國(guó)鱟(TachypleusTridentatus)或TAL)、重組鱟因子C或rFc、單核細(xì)胞活化型熱原試劑、重組因子C和LAL的混合物、和包括壽司肽、壽司肽片段、壽司肽二聚體以及其他特異性結(jié)合蛋白例如源自細(xì)菌噬菌體的抗體和受體結(jié)合蛋白的制劑、以及能夠與脂質(zhì)A反應(yīng)以產(chǎn)生可測(cè)量響應(yīng)的任何其他試劑。本發(fā)明可減少用戶在制備和測(cè)量校正標(biāo)準(zhǔn)物和樣品兩者中必須執(zhí)行的步驟數(shù)目。這可減少高技術(shù)水平、經(jīng)驗(yàn)和訓(xùn)練的需要，并且減少成本、時(shí)間和人為失誤的機(jī)會(huì)。另外，本發(fā)明可以遵從正式綱要要求和FDA條例的方式構(gòu)建或利用。本發(fā)明還適合于與使反應(yīng)進(jìn)展與內(nèi)毒素水平相關(guān)的所有定量正式綱要光度法一起使用，包括1)動(dòng)態(tài)生色，其中直到光吸收改變指定量的時(shí)間與濃度相關(guān)，2)終末點(diǎn)生色，其中經(jīng)過(guò)固定時(shí)間的光吸收變化與濃度相關(guān)，3)動(dòng)態(tài)濁度，其中直到濁度(通常通過(guò)光吸收測(cè)量)改變指定量的時(shí)間與濃度相關(guān)，和4)終末點(diǎn)濁度，其中經(jīng)過(guò)固定時(shí)間的濁度變化與濃度相關(guān)。在另一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分可具有經(jīng)修飾的表面。該表面可使用等離子體刻蝕進(jìn)行修飾。作為另外一種選擇，該表面可使用至少一個(gè)涂層進(jìn)行修飾。涂層可為靜態(tài)涂層、動(dòng)態(tài)涂層或其組合。合適的靜態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、膠原及其組合。合適的動(dòng)態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、脫氧膽酸鈉及其組合。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有在所述部分中的至少一個(gè)之間的至少一個(gè)機(jī)械阻隔件。機(jī)械阻隔件可為可溶的。預(yù)裝載的測(cè)試基板還可包括部分標(biāo)識(shí)機(jī)構(gòu)例如示蹤劑。在另一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可為微板。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有阻隔材料，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了用于測(cè)量樣品中的LAL反應(yīng)物質(zhì)的方法。該方法包括使樣品與預(yù)裝載的測(cè)試基板接觸，其中所述預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分已預(yù)裝載有至少一種檢測(cè)試劑和/或至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物，由此形成制備樣品。隨后可測(cè)量樣品的吸光度。在另一個(gè)方法實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分可具有經(jīng)修飾的表面。該表面可使用等離子體刻蝕進(jìn)行修飾。作為另外一種選擇，該表面可使用至少一個(gè)涂層進(jìn)行修飾。涂層可為靜態(tài)涂層、動(dòng)態(tài)涂層或其組合。合適的靜態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、膠原及其組合。合適的動(dòng)態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、脫氧膽酸鈉及其組合。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可為微板。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有阻隔材料，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了用于將至少一種測(cè)試試劑沉積到微板上的方法。測(cè)試試劑可為幫助測(cè)試樣品的任何試劑。合適的測(cè)試試劑包括但不限于檢測(cè)試劑和LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物。合適的檢測(cè)試劑在上文描述，并且可包含變形細(xì)胞裂解物。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物也在上文描述，并且包括USP內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)物(RSE)，其已針對(duì)目前世界衛(wèi)生組織國(guó)際內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行校正。該方法可包括提供具有包括多個(gè)孔的孔陣列的測(cè)試基板，其中每個(gè)孔具有至少一個(gè)光學(xué)窗口表面和多個(gè)非光學(xué)窗口表面?？蓪⒃谄渲芯哂兄辽僖环N檢測(cè)試劑的第一液體溶液置于至少一個(gè)孔的第一非光學(xué)窗口表面上?？墒沟谝灰后w溶液在第一非光學(xué)窗口表面上干燥，由此將檢測(cè)試劑沉積到第一非光學(xué)表面上，以形成預(yù)裝載的測(cè)試基板。在另一個(gè)實(shí)施例中，用于將至少一種測(cè)試試劑沉積到測(cè)試基板上的方法還可包括將在其中具有至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物的第二溶液置于第二非光學(xué)窗口表面上?？墒沟诙后w溶液在第二非光學(xué)窗口表面上干燥，由此將LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物沉積到第二非光學(xué)窗口表面上。在另一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板可為微板。在另外一個(gè)實(shí)施例中，該方法還可包括在干燥步驟后用阻隔材料覆蓋預(yù)裝載的測(cè)試基板，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。附圖說(shuō)明圖1顯示了本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，其中測(cè)試試劑可沉積到微板的側(cè)壁上。具體實(shí)施方式在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了預(yù)裝載的測(cè)試基板，其中所述預(yù)裝載的測(cè)試基板已預(yù)裝載有至少一種檢測(cè)試劑和/或至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物。預(yù)裝載的測(cè)試基板設(shè)計(jì)為測(cè)量樣品中的BET。它還可用于提供來(lái)自使用LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物的已知摻料的校正數(shù)據(jù)。預(yù)裝載的測(cè)試基板可設(shè)計(jì)為滿足所有目前的BET藥劑條例要求，并且可與濁度、生色和凝膠凝固BET方法一起使用。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物可為已針對(duì)相關(guān)條例主內(nèi)毒素(CSE)和條例主內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物(RSE)進(jìn)行校正的內(nèi)毒素。當(dāng)其他方法可接受或已驗(yàn)證為等價(jià)的且是管理機(jī)構(gòu)可接受的時(shí)，可使用基于歷史數(shù)據(jù)的貯存校正代替來(lái)自個(gè)別標(biāo)準(zhǔn)物的結(jié)果相應(yīng)地，本發(fā)明公開(kāi)了其中測(cè)試步驟數(shù)目顯著減少的測(cè)試基板和方法，由此使污染、時(shí)間延遲和錯(cuò)配降到最低，并且因此改善準(zhǔn)確度。該方法適合于與FDA許可的檢測(cè)試劑一起使用。該方法可與具有內(nèi)置熱控制器的標(biāo)準(zhǔn)吸光度或微板閱讀器、混合器和光閱讀器一起使用，以測(cè)定BET結(jié)果。在另一個(gè)實(shí)施例中，LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物可預(yù)裝載在預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少三個(gè)不同部分中。這三個(gè)不同部分可形成校正部分。每個(gè)部分中的LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物的濃度可為相同或不同的。如果使用內(nèi)毒素，則第一部分可具有使得當(dāng)水性樣品(或空白水)存在于該部分中時(shí)，樣品中的內(nèi)毒素濃度范圍為0.005至0.5EU/mL的量。類似地，第二部分可具有對(duì)應(yīng)于范圍為0.05至5.0EU/mL的濃度的量，并且第三部分可具有對(duì)應(yīng)于范圍為0.5至50EU/mL的濃度的量。在另一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少兩個(gè)部分可形成樣品測(cè)量部分。兩個(gè)部分可裝載有LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物，以形成摻料。檢測(cè)試劑和/或LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物可沉積到多種測(cè)試基板上，例如微板孔的側(cè)壁上以允許樣品空白測(cè)量，微板孔的光學(xué)窗口上，可溶性涂層上，或光學(xué)上半透明或反射性不溶性膜上。作為另外一種選擇，測(cè)試試劑可作為干燥珠或粗糙顆粒加入，或沉積到加入測(cè)試基板中的載體介質(zhì)內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分可具有經(jīng)修飾的表面。該表面可使用等離子體刻蝕進(jìn)行修飾。作為另外一種選擇，該表面可使用至少一個(gè)涂層進(jìn)行修飾。涂層可為靜態(tài)涂層、動(dòng)態(tài)涂層或其組合。合適的靜態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、膠原及其組合。合適的動(dòng)態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、脫氧膽酸鈉及其組合。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有在所述部分中的至少一個(gè)之間的至少一個(gè)機(jī)械阻隔件。機(jī)械阻隔件可為可溶的。具有預(yù)裝載的試劑的測(cè)試基板可包裝成使得它通過(guò)使用阻隔材料與環(huán)境密封，所述阻隔材料阻止水分、細(xì)菌和內(nèi)毒素試劑污染預(yù)裝載的試劑。相應(yīng)地，在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有阻隔材料，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。在另一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可為微板。樣品引入錯(cuò)誤還可通過(guò)在預(yù)裝載的測(cè)試基板上或閱讀器中的多個(gè)任選標(biāo)識(shí)機(jī)構(gòu)而減少，所述閱讀器配置為閱讀或測(cè)量測(cè)試基板中的樣品。標(biāo)識(shí)機(jī)構(gòu)可為用戶標(biāo)識(shí)樣品或通知用戶是否需要另外的試劑。合適的標(biāo)識(shí)方法可包括光學(xué)標(biāo)記例如顏色標(biāo)記、字母數(shù)字標(biāo)記或發(fā)光二極管。在一個(gè)實(shí)施例中，標(biāo)識(shí)機(jī)構(gòu)可為示蹤劑。示蹤劑是加入流體中幫助測(cè)定體積、流體位置和移動(dòng)(流體運(yùn)動(dòng))的惰性化合物。示蹤劑還可用于幫助驗(yàn)證測(cè)量數(shù)據(jù)。合適的示蹤劑包括但不限于染料。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了用于測(cè)量樣品中的內(nèi)毒素的方法。如本說(shuō)明書(shū)中使用的，術(shù)語(yǔ)“樣品”不僅可包括待分析的樣品，還包括顯示與以檢測(cè)極限采用的檢測(cè)試劑或裂解物不反應(yīng)的水。非反應(yīng)性的水的樣品還可被稱為“LAL試劑水”、“用于BET的水”或“注射用水”。該方法可包括使樣品與預(yù)裝載的測(cè)試基板接觸，其中所述預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分已預(yù)裝載有至少一種檢測(cè)試劑和/或至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物，由此形成制備樣品。隨后可測(cè)量樣品的吸光度。樣品可接觸測(cè)試基板的超過(guò)一個(gè)部分。接觸預(yù)裝載的測(cè)試基板的制備樣品可與測(cè)試試劑接觸或不接觸。例如，制備樣品可為“空白”或陰性對(duì)照，其不接觸任何測(cè)試試劑，或僅與檢測(cè)試劑接觸。在另一種方法中，基板的一部分還可預(yù)裝載有至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物。如果LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物是內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物，則它可以多個(gè)濃度存在，其中如上所述每個(gè)濃度存在于基板的不同部分上。內(nèi)毒素可預(yù)裝載到基板上，使得可如USP85中要求的生成“標(biāo)準(zhǔn)曲線”。在另一個(gè)實(shí)施例中，多個(gè)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物濃度可用于生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。在另一個(gè)方法實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板的至少一部分可具有經(jīng)修飾的表面。該表面可使用等離子體刻蝕進(jìn)行修飾。作為另外一種選擇，該表面可使用至少一個(gè)涂層進(jìn)行修飾。涂層可為靜態(tài)涂層、動(dòng)態(tài)涂層或其組合。合適的靜態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、膠原及其組合。合適的動(dòng)態(tài)涂層包括但不限于聚乙二醇(PEG)、脫氧膽酸鈉及其組合。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可為微板。在另外一個(gè)實(shí)施例中，預(yù)裝載的測(cè)試基板可具有阻隔材料，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了用于將至少一種測(cè)試試劑沉積到微板上的方法。測(cè)試試劑可為幫助測(cè)試樣品的任何試劑。合適的測(cè)試試劑包括但不限于檢測(cè)試劑和LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物。合適的檢測(cè)試劑在上文描述，并且可包含變形細(xì)胞裂解物。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物也在上文描述，并且包括USP內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)物(RSE)，其已針對(duì)目前世界衛(wèi)生組織國(guó)際內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行校正。該方法可包括提供具有包括多個(gè)孔的孔陣列的測(cè)試基板，其中每個(gè)孔具有至少一個(gè)光學(xué)窗口表面和多個(gè)非光學(xué)窗口表面。可將在其中具有至少一種檢測(cè)試劑的第一液體溶液置于至少一個(gè)孔的第一非光學(xué)窗口表面上。可使第一液體溶液在第一非光學(xué)窗口表面上干燥，由此將檢測(cè)試劑沉積到第一非光學(xué)表面上，以形成預(yù)裝載的測(cè)試基板。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物可以多個(gè)濃度存在，其中每個(gè)濃度存在于測(cè)試基板的分開(kāi)孔中。在另一個(gè)實(shí)施例中，用于將至少一種測(cè)試試劑沉積到測(cè)試基板上的方法還可包括將在其中具有至少一種LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物的第二溶液置于第二非光學(xué)窗口表面上。可使第二液體溶液在第二非光學(xué)窗口表面上干燥，由此將LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物沉積到第二非光學(xué)窗口表面上。在另一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板可為微板。在另外一個(gè)實(shí)施例中，該方法還可包括在干燥步驟后用阻隔材料覆蓋預(yù)裝載的測(cè)試基板，以保護(hù)預(yù)裝載的測(cè)試基板不受環(huán)境暴露和表面污染。合適的測(cè)試基板包括幫助評(píng)估或測(cè)試樣品的任何測(cè)試基板，例如可得自Sigma-Aldrich的微板，或微量滴定板。如圖1中所示，微板(100)可具有以2乘3矩形矩陣排列的多個(gè)樣品孔(102)。微板通常具有6、24、96、384或1536個(gè)孔。在一個(gè)實(shí)施例中，微板(100)可具有96個(gè)孔(102)。盡管在一塊微板內(nèi)的個(gè)別孔的容納能力通常是相同的，但孔的容納能力可在微板和微板之間變化?？?102)的側(cè)壁(104)和底部(106)可為彎曲或筆直的，使得壁在形狀中是半球形、圓柱形或矩形。板還可包括基本上平面的底表面(108)，使得微板平坦地位于工作表面上。工作表面可包括但不限于地面、實(shí)驗(yàn)室工作臺(tái)頂部、微板閱讀器和加熱板，以及制造表面例如桌子、傳送帶和輥。微板完全不位于工作表面上也是可能的，而是經(jīng)由懸浮工具例如鉤子、夾子等懸浮于工作表面上方。微板可由多種材料制成，所述多種材料包括聚苯乙烯和聚丙烯或聚碳酸酯。光學(xué)檢測(cè)微板可由聚苯乙烯或其他合適聚合物制成，所述聚合物不干擾測(cè)試試劑與樣品的化學(xué)表現(xiàn)。在一些實(shí)施例中，可加入二氧化鈦，以使得聚苯乙烯變白，以幫助光學(xué)吸光度方法。測(cè)試基板的一個(gè)或多個(gè)部分可具有經(jīng)修飾的表面。具有經(jīng)修飾的表面的部分可包括但不限于側(cè)壁和孔。表面可通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法進(jìn)行修飾，包括但不限于施加涂層、輻射、等離子體刻蝕、紫外線和臭氧、或可動(dòng)態(tài)覆蓋表面的溶解試劑，使得表面和試劑或樣品的相互作用模擬標(biāo)準(zhǔn)微板分析的相互作用，使得制造商的規(guī)格或正式綱要分析得以滿足。在一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板的表面可進(jìn)行修飾，以控制生物化學(xué)LAL和LAL反應(yīng)物質(zhì)相互作用或者控制表面能?？刂婆c反應(yīng)化學(xué)的表面化學(xué)相互作用的水平可改善生物化學(xué)表現(xiàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確度。例如，適合于制造測(cè)試基板的材料還可以生物化學(xué)方式抑制或增強(qiáng)LAL或LAL反應(yīng)物質(zhì)反應(yīng)化學(xué)。施加涂層或通過(guò)表面的化學(xué)修飾，可控制或減少在材料表面和反應(yīng)化學(xué)之間的該生物化學(xué)相互作用。另外，測(cè)試基板的未經(jīng)修飾的表面可對(duì)于存在于測(cè)試基板上的微流體具有不期望的表面能。表面能還可通過(guò)化學(xué)修飾或添加涂層修飾至所需值，以使得表面能更親水或更疏水，或?qū)崿F(xiàn)這些狀態(tài)之間的任何其他表面能。通過(guò)優(yōu)化表面能，存在于測(cè)試基板上的微流體也可得到優(yōu)化。修飾測(cè)試基板表面的另一種方法包括等離子體刻蝕，其中表面通過(guò)使其暴露于等離子體進(jìn)行修飾，以影響特定最終表面化學(xué)結(jié)構(gòu)。不同元素例如氧或氨可加入等離子體中，以修飾表面的化學(xué)。另外的方法包括使用永久的靜態(tài)或動(dòng)態(tài)表面涂層?？杉尤腱o態(tài)表面涂層以在測(cè)試基板表面上形成層來(lái)改變表面特征。靜態(tài)表面涂層可作為具有溶劑的溶液施加并且干燥，或通過(guò)其中涂層與表面化學(xué)鍵合的表面接枝施加?？勺鳛橥繉咏又蚴┘拥撵o態(tài)涂層的例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)和膠原。動(dòng)態(tài)表面涂層可加入試劑、樣品或標(biāo)準(zhǔn)物中，并且當(dāng)流體在測(cè)試基板上或樣品孔中移動(dòng)時(shí)原位涂覆表面。動(dòng)態(tài)涂層的例子包括但不限于PEG和表面活性劑如脫氧膽酸鈉。在一個(gè)實(shí)施例中，該方法可包括提供具有包括多個(gè)孔的孔陣列的微板，其中每個(gè)孔具有至少一個(gè)光學(xué)窗口表面和多個(gè)非光學(xué)窗口表面；提供在其中具有至少一種測(cè)試試劑的液體溶液；將液體溶液置于至少一個(gè)孔的所述非光學(xué)窗口表面中的第一個(gè)上；和使所述液體溶液在所述第一非光學(xué)窗口表面上干燥，由此將所述檢測(cè)試劑沉積到所述第一非光學(xué)窗口表面上。在另一個(gè)實(shí)施例中，沉積步驟可在后續(xù)非光學(xué)窗口表面上重復(fù)，使得另外的測(cè)試試劑沉積到后續(xù)側(cè)壁部分上。測(cè)試試劑可加入孔的非光學(xué)窗口表面，以允許在測(cè)試試劑有機(jī)會(huì)混合之前樣品的初始光學(xué)測(cè)量。這可用于測(cè)定光學(xué)零。另外，每種測(cè)試試劑具有在反應(yīng)開(kāi)始前，可用于檢查加入的測(cè)試試劑的正確水平的光學(xué)標(biāo)記。在另一個(gè)實(shí)施例中，每種測(cè)試試劑可用光學(xué)材料加上標(biāo)簽，所述光學(xué)材料對(duì)于內(nèi)毒素測(cè)試反應(yīng)是惰性的。如果用戶在反應(yīng)發(fā)生(反應(yīng)滯后階段時(shí)期)前發(fā)現(xiàn)預(yù)期水平的測(cè)試試劑的不正確水平，則用戶可拒絕該樣品的測(cè)量測(cè)試。這對(duì)藥學(xué)用戶具有極大價(jià)值，因?yàn)槿魏尾灰?guī)范(OOS)測(cè)試均必須進(jìn)行評(píng)估和說(shuō)明。在另一個(gè)方法實(shí)施例中，該方法可包括提供在其中具有至少一種測(cè)試試劑的液體溶液；提供具有基本上平坦的底表面、多個(gè)邊緣(110)和孔陣列的微板，其中底表面相對(duì)于水平工作表面(112)是基本上平行的，并且其中孔陣列包括具有多個(gè)側(cè)壁的多個(gè)孔。多個(gè)邊緣(110)中的第一個(gè)可為傾斜的，使得第一邊緣相對(duì)于水平工作表面以大致垂直方向傾斜(114)，使得底表面不再相對(duì)于工作表面基本上平行，并且使得最接近于工作表面的側(cè)壁部分處于相對(duì)于工作表面的大致平行方向。液體溶液可置于(116)側(cè)壁部分上且隨后干燥，由此將測(cè)試試劑沉積到側(cè)壁部分上。適合于轉(zhuǎn)移液體的任何工具均可為合適的，包括但不限于移液管或噴嘴。任何干燥過(guò)程均適合于本發(fā)明，只要干燥過(guò)程不改變測(cè)試試劑的反應(yīng)性。這些干燥過(guò)程包括但不限于在環(huán)境溫度下的真空干燥過(guò)程或冷凍干燥過(guò)程(凍干)。在另外一個(gè)實(shí)施例中，液體溶液可在環(huán)境溫度下干燥或冷凍干燥。應(yīng)當(dāng)理解液體溶液無(wú)需完全干燥；它可部分干燥，尤其當(dāng)使用非水性溶劑時(shí)。以下情況是足夠的：測(cè)試試劑沉積使得它保留在原位之后，它被物理固定。如果使用甘油糊劑，將測(cè)試試劑固定后可仍存在一些液體，如在一些藥劑和制備用于穩(wěn)定貯存的其他材料中。相同過(guò)程可對(duì)于圓壁和平壁孔兩者使用。微板的傾斜位置可在沉積步驟期間通過(guò)使用支持工具例如支架或支撐物得到維持。在另一個(gè)實(shí)施例中，微板可為旋轉(zhuǎn)的并且沉積步驟可對(duì)于微板的后續(xù)邊緣重復(fù)，使得另外的測(cè)試試劑沉積到后續(xù)側(cè)壁部分上。在另一個(gè)方法實(shí)施例中，包含內(nèi)毒素檢測(cè)試劑的至少一種測(cè)試試劑可存在于每一個(gè)孔中。在另一個(gè)方法實(shí)施例中，至少一種測(cè)試試劑包含內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物。在另外一個(gè)方法實(shí)施例中，內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物可以多個(gè)濃度存在，其中每個(gè)濃度存在于不同孔中。在另外一個(gè)方法實(shí)施例中，微板還可包括孔標(biāo)識(shí)機(jī)構(gòu)。測(cè)試試劑沉積的許多方法可用于減少混合時(shí)間、氣泡形成、再溶解時(shí)間、易于制造和檢測(cè)靈敏度。該方法可包括化學(xué)和物理方法兩者以產(chǎn)生所需結(jié)果。化學(xué)方法可包括使用化學(xué)添加劑?；瘜W(xué)添加劑的例子包括溶解度增強(qiáng)劑，例如糖類蔗糖、葡萄糖和甘露醇，以及防剝落劑，例如包含聚(環(huán)氧乙烷)、羥丙基纖維素或羥丙基甲基纖維素的水性聚合物溶液或設(shè)計(jì)為防止降解的試劑(例如右旋糖和多種糖類例如乳糖和海藻糖)。物理方法可包括在沉積過(guò)程期間的多種涂覆、噴射或干燥技術(shù)。在一些實(shí)施例中，檢測(cè)試劑可沉積在每一個(gè)孔中。作為另外一種選擇，在孔的任一個(gè)中均不存在檢測(cè)試劑，從而允許用戶加入來(lái)自優(yōu)選供應(yīng)商的檢測(cè)試劑。在一個(gè)實(shí)施例中，檢測(cè)試劑可為變形細(xì)胞裂解物。還可利用LAL的天然吸收或者濁度或生色非LAL反應(yīng)示蹤劑對(duì)LAL和內(nèi)毒素的添加來(lái)用于減少測(cè)試錯(cuò)誤。LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物可沉積在孔的僅一部分中。另外，多個(gè)孔可預(yù)裝載有或預(yù)沉積有在其中具有不同濃度的LAL反應(yīng)物質(zhì)的LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物，使得用戶僅需要將待測(cè)試的樣品加入孔中。在一個(gè)實(shí)施例中，檢測(cè)試劑和LAL反應(yīng)物質(zhì)可沉積到孔中，使得USP85要求的全部測(cè)試和重復(fù)可通過(guò)添加樣品來(lái)簡(jiǎn)單執(zhí)行。在此類實(shí)施例中，每個(gè)孔包含分開(kāi)的給定測(cè)試或給定測(cè)試的重復(fù)。在一個(gè)實(shí)施例中，最低濃度可在四個(gè)重復(fù)中加以證實(shí)，其中96孔中的4個(gè)各自包含一個(gè)重復(fù)。作為另外一種選擇，孔可預(yù)裝載有LAL反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物，使得可執(zhí)行抑制/增強(qiáng)測(cè)試(或“摻料”)，包括重復(fù)。作為另外一種選擇，孔可預(yù)裝載為使得可執(zhí)行在其中定量給定樣品中的細(xì)菌內(nèi)毒素濃度的定量測(cè)試。在另外一個(gè)實(shí)施例中，孔可預(yù)裝載為使得USP85下要求的所有測(cè)試和重復(fù)，包括裂解物靈敏度、抑制/增強(qiáng)和定量測(cè)試可在相同微板上執(zhí)行。相似概念可對(duì)于任何測(cè)試基板或測(cè)試基板的任何部分采用，并且并不限于具有孔的微板。在一個(gè)實(shí)施例中，孔可用密封工具例如粘合標(biāo)簽進(jìn)行覆蓋，所述粘合標(biāo)簽僅在孔開(kāi)口外部的標(biāo)簽部分上具有粘合劑。密封工具可由阻隔材料制成，所述阻隔材料阻止水和氧的通過(guò)，由此孔可保持干燥至小于約5％的濕度水平。公開(kāi)的方法可用于將LAL試劑、生色試劑和內(nèi)毒素預(yù)沉積到預(yù)清潔(不含內(nèi)毒素)的96或384孔微板中。在液體溶液中的測(cè)試試劑可置于孔的壁上，或光學(xué)孔的光學(xué)窗口表面上。液體溶液還可包含化學(xué)添加劑例如溶解度增強(qiáng)劑和防剝落劑。公開(kāi)的方法允許試劑沉積到標(biāo)準(zhǔn)96或384孔微板的壁上，而不干擾光學(xué)窗口或光路，由此允許初始樣品吸收測(cè)量。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明公開(kāi)了測(cè)試基板，其中測(cè)試基板的至少一部分已預(yù)裝載有至少一種測(cè)試試劑。測(cè)試基板適合于液體的光學(xué)監(jiān)控和用于執(zhí)行內(nèi)毒素或葡聚糖的LAL測(cè)定。LAL測(cè)定的試劑可在測(cè)試基板的區(qū)段中隔離。測(cè)試基板可為一次性使用的。測(cè)試基板可具有多種形式、幾何學(xué)和形狀，包括典型的微板形狀。其他合適形式包括但不限于卡、液筒或盤(pán)。測(cè)試基板還可配置為使得樣品和流體可加入其中。測(cè)試基板還允許當(dāng)測(cè)試基板振蕩、渦旋、自旋或旋轉(zhuǎn)時(shí)樣品混合。測(cè)試基板還允許液體的光學(xué)監(jiān)控。測(cè)試基板可用于執(zhí)行分析功能，例如但不限于測(cè)量樣品(伴隨添加的其為內(nèi)毒素或葡聚糖摻料的陽(yáng)性產(chǎn)物對(duì)照)，測(cè)量水空白(不含內(nèi)毒素或LAL試劑)，測(cè)量一系列至少三種校正溶液。此外，測(cè)試基板可用于執(zhí)行以兩個(gè)或更多個(gè)一式兩份列出的全部分析功能。測(cè)試基板可與光學(xué)儀器或閱讀器一起使用，所述光學(xué)儀器或閱讀器測(cè)量在光學(xué)吸收狀態(tài)之間的時(shí)間或在時(shí)間之間的光學(xué)吸收變化。預(yù)裝載的測(cè)試基板還可用于證實(shí)試劑和分析器滿足規(guī)范，對(duì)至樣品中的內(nèi)毒素或葡聚糖濃度的轉(zhuǎn)換進(jìn)行校正，驗(yàn)證性能或者滿足正式綱要或光學(xué)儀器制造商的規(guī)范，以及測(cè)量被分析的樣品。測(cè)試基板可由任何合適材料制成。在另一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板的一部分可涂覆有聚合物材料、表面處理或涂層，以滿足正式綱要或測(cè)試試劑制造商的規(guī)范。在另外一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板的一部分可涂覆有靜態(tài)涂層，以減少LAL試劑或標(biāo)準(zhǔn)物喪失。測(cè)試基板的另一個(gè)部分可涂覆有微板孔的動(dòng)態(tài)涂層，以減少LAL試劑或標(biāo)準(zhǔn)物喪失。動(dòng)態(tài)涂層還可與標(biāo)準(zhǔn)物或試劑混合。測(cè)試基板的一部分可涂覆有添加劑，以幫助或調(diào)節(jié)測(cè)試試劑或樣品材料的適當(dāng)分析和相互作用。示例性添加劑包括但不限于溶解度助劑、運(yùn)輸助劑和穩(wěn)定劑。在另外一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板可包括機(jī)械阻隔件分開(kāi)試劑，以阻止當(dāng)它們?cè)跍y(cè)試基板中隔離或長(zhǎng)期貯存時(shí)的相互作用。阻隔件可為不溶性的，并且排列為使得它們不干擾光學(xué)測(cè)量。其他阻隔件可為一定程度可溶的，使得它們?cè)跍y(cè)量期間溶解且不干擾測(cè)量。在另外一個(gè)實(shí)施例中，測(cè)試基板可預(yù)裝載有標(biāo)準(zhǔn)物和由對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素(CSE)或參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備的摻料。摻料可作為干燥材料貯存，使得它們處于正確濃度，同時(shí)不稀釋或干擾被摻料的樣品。實(shí)例下述實(shí)例證實(shí)其中內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物預(yù)裝載到測(cè)試基板上的實(shí)施例。內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物范圍在表1中顯示。然而，內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物范圍在其他實(shí)施例中可不同。表1范圍(EU/mL)最低(EU/mL)中間范圍(EU/mL)最高(EU/mL)0.005-0.50.0050.050.50.01-10.010.110.05-50.050.550.1-100.11100.5-500.5550表2是預(yù)裝載的測(cè)試基板的描述，其中測(cè)試基板具有96個(gè)部分。第1列指示測(cè)試基板的部分。第2列指示操作者必須加入測(cè)試基板中的樣品。測(cè)試基板的每個(gè)部分可預(yù)裝載有如第3列中所示的不同內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物濃度。第4列是可在每個(gè)部分中完成的BET測(cè)試的描述。內(nèi)毒素檢測(cè)試劑在表2中未顯示，因?yàn)樗?6個(gè)部分均可預(yù)裝載有相同量的內(nèi)毒素檢測(cè)試劑。作為另外一種選擇，測(cè)試基板可不具有任何內(nèi)毒素檢測(cè)試劑，從而允許操作者加入來(lái)自優(yōu)選供應(yīng)商的內(nèi)毒素檢測(cè)試劑。表2該書(shū)面說(shuō)明書(shū)使用例子包括最佳模式來(lái)公開(kāi)本發(fā)明，并且還允許本領(lǐng)域任何技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明，包括制備且使用任何裝置或系統(tǒng)且執(zhí)行任何引入的方法。本發(fā)明的專利范圍通過(guò)權(quán)利要求限定，并且可包括本領(lǐng)域技術(shù)人員想到的其他例子。例如，存在沉積試劑而不混合LAL和內(nèi)毒素且引起過(guò)早反應(yīng)的許多其他方法。如果此類其他方法具有并非不同于權(quán)利要求的文字語(yǔ)言的結(jié)構(gòu)元件，或如果它們包括與權(quán)利要求的文字語(yǔ)言具有非實(shí)質(zhì)差異的等價(jià)結(jié)構(gòu)元件，則它們預(yù)期在權(quán)利要求的范圍內(nèi)。