一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，涉及物質(zhì)的確定方法。所述方法包括下列步驟：（1）未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化：A.粉碎、篩選；B.蛋白純化；C.粗多糖純化；（2）經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆蛋白和多糖液純化：A.粉碎、篩選；B.加水攪拌；C.擠壓膨化；D.粉碎、篩選；E.蛋白純化；F.粗多糖純化；（3）利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。通過比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化，很容易發(fā)現(xiàn)經(jīng)過擠壓膨脹的蛋白和多糖含量顯著增高。利用體外測定糖苷酶一致的方法，能夠輕松測定經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆粉與未經(jīng)過擠壓膨化紅小豆粉的糖苷酶抑制率。
【專利說明】一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及物質(zhì)的確定方法，具體而言，本發(fā)明涉及一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]在過去，紅豆由于其高纖維及蛋白含量，被推薦為降糖食物。植物化學家對紅豆中化學成分進行分析，發(fā)現(xiàn)其富含酚類化合物，兒茶素、綠原酸等。紅豆具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，對鏈脲佐菌素(STZ)誘導的糖尿病大鼠血糖有改善作用。紅豆汁可降低甘油三酯并抑制胰脂肪酶活性，有利于防治高甘油三酯血癥。在保健功能食品領域，對小豆的深入研究開發(fā)相對較少，尤其對小豆粉起降糖作用的中關(guān)鍵生物活性物質(zhì)缺乏研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法。藥理實驗結(jié)果表明，通過擠壓膨化制備的小豆粉多糖和蛋白含量更高，降血糖功效更好。
[0004]本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是:一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，包括下列步驟:
[0005]( I)未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0006]Α、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質(zhì)的成分；
[0007]B、蛋白純化:采用常規(guī)酸堿沉降法進行蛋白純化；
[0008]C、粗多糖常規(guī)純化:
[0009]a、粗多糖液制備；
[0010]b、粗多糖純化；
[0011](2)經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0012]A、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆,粉碎、過篩；
[0013]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8-10%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0014]C、擠壓膨化:取攪拌后的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；
[0015]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化后的紅小豆粉粉碎、過篩，測定獲得的物質(zhì)的成分，比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化；
[0016]E、蛋白純化:采用常規(guī)酸堿沉降法進行蛋白純化；
[0017]F、粗多糖常規(guī)純化:
[0018]a、粗多糖液制備；
[0019]b、粗多糖純化；
[0020](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0021]所述過篩為過55-65目篩。
[0022]所述進行蛋白純化的酸堿沉降法的具體做法為:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5-15min,收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到8.0-10.0,磁力攪拌25-35min, 5000r離心15_25min，收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到6.0-8.0, 5000r離心15-25min,棄去上清液,沉淀用去離子水潤洗2_3遍,凍干備用。
[0023]所述粗多糖液制備的具體做法為:稱取原料粉，浸泡20_40min，加15_25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70-90%，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15_25min，沉淀加5-15mL水溶解，得到粗多糖液。
[0024]所述粗多糖純化的具體做法為:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5-1.5mL,3-5 °C冷藏過夜，3500r離心15-25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70_90%，3-5°C冷藏過夜，4500r離心5-10min，棄去上清液，沉淀加5_15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25-35min,過濾,加蒸懼水定容于25mL容量瓶。
[0025]所述擠壓膨化過程中擠壓機I區(qū)溫度范圍為140-180°C、II區(qū)溫度范圍為120-160。。。
[0026]本發(fā)明的有益效果是:
[0027]1、通過比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化，很容易發(fā)現(xiàn)經(jīng)過擠壓膨脹的蛋白和多糖含量顯著增高。經(jīng)過擠壓膨脹的小豆的蛋白和多糖具有明顯較高的α糖苷酶一致活性。
[0028]2、利用體外測定糖苷酶一致的方法，能夠輕松測定經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆粉與未經(jīng)過擠壓膨化紅小豆粉的糖苷酶抑制率，結(jié)果顯示可提高糖苷酶抑制率4倍以上。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029] 圖1為為擠壓膨脹紅小豆粉對正常鼠降血糖活性實驗結(jié)果圖
[0030]圖2為擠壓膨脹紅小豆粉對糖尿病鼠降血糖活性實驗結(jié)果圖
[0031]圖3為擠壓膨脹紅小豆蛋白對糖尿病鼠降血糖活性實驗結(jié)果圖
[0032]圖4為擠壓膨脹紅小豆蛋白對糖尿病鼠口服葡萄糖耐量影響結(jié)果圖
【具體實施方式】
[0033]實施例1:
[0034]一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，包括下列步驟:
[0035]( I)未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0036]Α、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆，粉碎、過55目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分；
[0037]B、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5min，收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到8.0，磁力攪拌25min，5000r離心15min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到6.0, 5000r離心15min,棄去上清液,沉淀用去尚子水潤洗2遍,凍干備用；
[0038]C、粗多糖純化:
[0039]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡20min，加15倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70%，3°C冷藏過夜，3500r離心15min，沉淀加5_15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0040]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5mL, 3°C冷藏過夜，3500r離心15min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70%，31:冷藏過夜，450(^離心5min，棄去上清液，沉淀加5mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；
[0041](2)經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0042]A、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆,粉碎、過55目篩；
[0043]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0044]C、擠壓膨化:取攪拌后的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區(qū)溫度為140°C、II 區(qū)溫度為 120。。； [0045]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化后的紅小豆粉粉碎、過55目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分，比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化；
[0046]E、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照I:8比例浸泡過夜，3500r離心5min，收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到8.0，磁力攪拌25min，5000r離心15min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到6.0, 5000r離心15min,棄去上清液,沉淀用去離子水潤洗2遍，凍干備用；
[0047]F、粗多糖純化:
[0048]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡20min，加15倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70%，31:冷藏過夜，350(^離心15min，沉淀加5mL水溶解，得到粗多糖液；
[0049]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5mL, 3°C冷藏過夜，3500r離心15min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70%，31:冷藏過夜，450(^離心5min，棄去上清液，沉淀加5mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；
[0050](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0051]實施例2:
[0052]一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，包括下列步驟:
[0053]( I)未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0054]Α、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆，粉碎、過60目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分；
[0055]B、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心IOmin,收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到9,磁力攪拌30min, 5000r離心20min，收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到7.0, 5000r離心20min，棄去上清液，沉淀用去尚子水潤洗2遍,凍干備用；
[0056]C、粗多糖純化:
[0057]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡30min，加20倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達80%，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，沉淀加IOmL水溶解，得到粗多糖液；
[0058]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.0mL，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到80%，4°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉淀加IOmL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮30min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；[0059](2)經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0060]A、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆,粉碎、過60目篩；
[0061]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加9%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0062]C、擠壓膨化:取攪拌后的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區(qū)溫度為160°C、II 區(qū)溫度為 140。。；
[0063]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化后的紅小豆粉粉碎、過60目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分，比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化；
[0064]E、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心lOmin，收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到9.0，磁力攪拌30min, 5000r離心20min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到7.0, 5000r離心20min,棄去上清液，沉淀用去離子水潤洗3遍，凍干備用；
[0065]F、粗多糖純化:
[0066]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡30min，加20倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達80%，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，沉淀加IOmL水溶解，得到粗多糖液；
[0067]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.0mL，4°C冷藏過夜，3500r離心20min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到80%，4°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉淀加IOmL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮30min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；
[0068](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0069]實施例3:
[0070]一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，包括下列步驟:
[0071]( I)未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化:
[0072]Α、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆，粉碎、過65目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分；
[0073]B、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心15min,收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到10.0，磁力攪拌35min,5000r離心25min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到8.0, 5000r離心25min,棄去上清液,沉淀用去離子水潤洗3遍，凍干備用；
[0074]C、粗多糖純化:
[0075]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡40min，加25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達90%，5°C冷藏過夜，3500r離心25min，沉淀加15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0076]b、粗多糖純化:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.5mL, 5°C冷藏過夜，3500r離心25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到90%，5°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉淀加15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮35min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；
[0077](2)經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化:
[0078]A、粉碎、篩選:取質(zhì)量合格的紅小豆，粉碎、過65目篩；[0079]B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加10%的水，用攪拌機攪拌均勻；
[0080]C、擠壓膨化:取攪拌后的紅小豆粉，放入擠壓機中進行擠壓膨化；I區(qū)溫度為180°C、II 區(qū)溫度為 1600C ；
[0081]D、粉碎、篩選:將擠壓膨化后的紅小豆粉粉碎、過65目篩，測定獲得的物質(zhì)的成分，比較擠壓膨化前后的物質(zhì)成分變化；
[0082]E、蛋白純化:采用酸堿沉降法進行蛋白純化:稱取一定量原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心15min，收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到10.0,磁力攪拌35min, 5000r離心25min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到8.0, 5000r離心25min,棄去上清液，沉淀用去離子水潤洗3遍，凍干備用；
[0083]F、粗多糖純化:
[0084]a、粗多糖液制備:稱取原料粉，浸泡40min，加25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達90%，5°C冷藏過夜，3500r離心25min，沉淀加15mL水溶解，得到粗多糖液；
[0085]b、粗多糖純化；粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液1.5mL, 5°C冷藏過夜，3500r離心25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到90%，5°C冷藏過夜，4500r離心lOmin，棄去上清液，沉淀加15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮35min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶；
[0086](3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
[0087]下面通過實驗方法來具體說明本發(fā)明的有益效果:
[0088]實驗1:糖苷酶測定體外實驗，利用化學測定方法，選用葡萄糖測定試劑盒，測定不同品種的紅小豆粉的糖苷酶 抑制率，其中以降血糖拜糖平為陽性對照，實驗結(jié)果平行測定2次。
[0089]結(jié)果如下:不同品種紅小豆糖苷酶抑制率:
[0090]
【權(quán)利要求】
1.一種提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，包括下列步驟: (1)未經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖的純化: A、粉碎、篩選:取紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質(zhì)的成分； B、蛋白純化:采用常規(guī)酸堿沉降法進行蛋白純化； C、粗多糖常規(guī)純化: a、粗多糖液制備； b、粗多糖純化； (2)經(jīng)過擠壓膨化的紅小豆的蛋白和多糖液純化: A、粉碎、篩選:另取紅小豆，粉碎、過篩，測定獲得的物質(zhì)的成分； B、加水攪拌:在紅小豆粉中添加8-10%的水，攪拌均勻； C、擠壓膨化:取攪拌后的紅小豆粉，進行擠壓膨化； D、粉碎、篩選:將擠壓膨化后的紅小豆粉粉碎、過篩； E、蛋白純化:采用常規(guī)酸堿沉降法進行蛋白純化； F、粗多糖常規(guī)純化: a、粗多糖液制備； b、粗多糖純化； (3)利用體外測定糖苷酶一致的方法比較經(jīng)過擠壓膨脹前后的蛋白和多糖對α糖苷酶的抑制活性。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，所述過篩為過55-65目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，所述進行蛋白純化的酸堿沉降法的具體做法為:稱取原料粉末用蒸餾水按照1:8比例浸泡過夜，3500r離心5-15min,收集上清用IM氫氧化鈉調(diào)pH到8.0-10.0,磁力攪拌25_35min, 5000r離心15-25min,收集上清液。用IN鹽酸調(diào)pH到6.0-8.0, 5000r離心15_25min，棄去上清液，沉淀用去尚子水潤洗2-3遍,凍干備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，所述粗多糖液制備的具體做法為:稱取原料粉，浸泡20-40min，加15-25倍量水超聲溶解豆粉，溶液加無水乙醇使含醇量達70-90%，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15-25min，沉淀加5-15mL水溶解，得到粗多糖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，所述粗多糖純化的具體做法為:粗多糖液加10%三氯乙酸水溶液0.5-1.5mL，3-5°C冷藏過夜，3500r離心15-25min，取上清液，再加無水乙醇使含醇量達到70_90%，3_5°C冷藏過夜，4500r離心5-10min,棄去上清液，沉淀加5_15mL水溶解再加0.5%活性炭，沸水煮25_35min，過濾，加蒸餾水定容于25mL容量瓶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高紅小豆降血糖效果的物質(zhì)的確定方法，所述擠壓膨化過程中的擠壓機I區(qū)溫度范圍為140-180°C、II區(qū)溫度范圍為120-160°C。
【文檔編號】G01N1/34GK103743869SQ201410008568
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月8日
【發(fā)明者】任貴興, 么楊 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所