一種檢測煙絲和卷煙煙氣中nnal和nna的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測煙絲或卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法。配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用內(nèi)標(biāo)法分別建立NNAL和NNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；然后向樣品中加入NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室溫震蕩，取上清液，進(jìn)行HPLC-MS-MS檢測。該方法具有檢測限低、穩(wěn)定性好、快速準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，檢測結(jié)果受主觀判斷因素影響小，易于推廣應(yīng)用。
【專利說明】—種檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于煙草化學(xué)檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]煙草特有的亞硝胺(TSNAs)是煙草內(nèi)源性生物堿與硝酸鹽和亞硝酸鹽通過亞硝化作用而產(chǎn)生的，只存在于煙草、煙草制品和卷煙煙氣中。近年來，隨著吸煙與健康問題受到人們的廣泛關(guān)注，國內(nèi)外對于煙氣中各種有害化學(xué)成分的研究也日益深入。據(jù)報(bào)道，目前已經(jīng)從煙葉或卷煙煙氣中鑒定出8種煙草特有亞硝胺，包括:N-亞硝基降煙堿(NNN)、4-(甲基亞硝胺基)-1_ (3-吡啶基)-1- 丁酮(NNK)、N-亞硝基假木賊堿(NAB)、N-亞硝基新煙堿(NAT)、4-(甲基亞硝胺基)-1-(3-吡啶基)-1_ 丁醇(NNAL)、4-(甲基亞硝胺基)_4_ (3-吡啶基)-1_ 丁醇(iso-NNAL)、4-(甲基亞硝胺基)-4-(3-吡啶基)丁酸(iso-NNAC)以及4-(甲基亞硝胺基)-4_ (3-吡啶基)-1-丁醛(NNA)。發(fā)現(xiàn)較早且研究最深入的4種煙草特有亞硝胺是NNN、NNK, NAB和NAT，其分析檢測方法也較成熟。目前，NNAL主要被作為NNK的生物標(biāo)志物進(jìn)行研究，而iso_NNAL、NNA和iso-NNAC的檢測和研究極少。1987年,Brunnemann等才在鼻煙和卷煙煙絲中鑒定出iso-NNAL，但在卷煙煙氣中沒有發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)的存在。隨著人們對煙草中特有亞硝胺含量的重視，煙草行業(yè)以及公共衛(wèi)生行業(yè)等迫切需要建立一種能準(zhǔn)確檢測煙草或煙氣中NNAL和NNA的方法。
[0003]但由于卷煙煙絲和每支卷煙煙氣中煙草特有亞硝胺的含量很低，加之煙草萃取物和煙氣基質(zhì)復(fù)雜，所以煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的檢測非常困難，國內(nèi)外許多相關(guān)行業(yè)都無法開展或未開展卷煙煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的檢測工作。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法，運(yùn)用高效液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法，實(shí)現(xiàn)對NNAL和NNA含量的快速準(zhǔn)確測定。
[0005]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
[0006]除非另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。
[0007]一種檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法，其特征在于:首先配制含有NNAL.NNA和NNA-甲基_d3的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用內(nèi)標(biāo)法分別建立NNAL和NNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；然后將檢測樣品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸銨水溶液，室溫震蕩，取上清液，進(jìn)行HPLC-MS-MS檢測。
[0008]該方法具體包括以下步驟:
[0009]( I)標(biāo)準(zhǔn)曲線建立:
[0010]以乙腈為溶劑，分別配制NNAL、NNA和NNA-甲基_d3標(biāo)準(zhǔn)品單標(biāo)溶液；以乙腈為溶齊U，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基_d3的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；以HPLC-MS-MS色譜圖中NNA的濃度與NNA-甲基-d3的濃度之比為橫坐標(biāo)，以色譜圖中NNA的定量離子對峰面積與NNA-甲基-d3的定量離子對峰面積之比為縱坐標(biāo)，建立NNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；以同樣方法建立NNAL的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；
[0011](2)樣品處理
[0012]①煙絲樣品處理:準(zhǔn)確稱取煙絲于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸銨水溶液，室溫震蕩，取上清液，過水相濾膜，待用；
[0013]②煙氣樣品處理:煙支和劍橋?yàn)V片(CFP)在溫度22°C、濕度60%的條件下平衡；使用前，每個劍橋?yàn)V片用抗壞血酸甲醇溶液處理，并在通風(fēng)櫥中風(fēng)干后備用；用濾片捕集卷煙的主流煙氣總粒相物進(jìn)行檢測；在捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片中加入的NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室溫震蕩，取上清液，過水相濾膜，待用；
[0014](3) HPLC-MS-MS 檢測條件
[0015]液相條件:用C18色譜柱和甲酸銨水溶液-甲酸銨乙腈溶液對樣品進(jìn)行分離；
[0016]質(zhì)譜條件:用正離子模式(ESI+)進(jìn)行多反應(yīng)檢測(MRM)，分析物特征離子對如表I ;
[0017]表1分析物特征離子對
[0018]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法，其特征在于:首先配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基-d3的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用內(nèi)標(biāo)法分別建立NNAL和NNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；然后將檢測樣品置于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸銨水溶液，室溫震蕩，取上清液，進(jìn)行HPLC-MS-MS檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測煙絲和卷煙煙氣中NNAL和NNA的方法，其特征在于該方法具體包括以下步驟: (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線建立: 以乙腈為溶劑，分別配制NNAL、NNA和NNA-甲基-d3標(biāo)準(zhǔn)品單標(biāo)溶液；以乙腈為溶劑，配制含有NNAL、NNA和NNA-甲基_d3的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；以HPLC-MS-MS色譜圖中NNA的濃度與NNA-甲基-d3的濃度之比為橫坐標(biāo)，以色譜圖中NNA的定量離子對峰面積與NNA-甲基-d3的定量離子對峰面積之比為縱坐標(biāo)，建立NNA的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線；以同樣方法建立NNAL的標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線； (2)樣品處理 ①煙絲樣品處理:準(zhǔn)確稱取煙絲于具塞三角瓶中，加入NNA-甲基-d3溶液，加入甲酸銨水溶液，室溫震蕩，取上清液，過水相濾膜，待用； ②煙氣樣品處理:煙支和劍橋?yàn)V片在溫度22°C、濕度60%的條件下平衡；使用前，每個劍橋?yàn)V片用抗壞血酸甲醇溶液處理，并在通風(fēng)櫥中風(fēng)干后備用；用濾片捕集卷煙的主流煙氣總粒相物進(jìn)行檢測；在捕集有主流煙氣總粒相物的劍橋?yàn)V片中加入的NNA-甲基-d3溶液，加入萃取溶液，室溫震蕩，取上清液，過水相濾膜，待用； (3)HPLC-MS-MS 檢測條件 液相條件:用C18色譜柱和甲酸銨水溶液-甲酸銨乙腈溶液對樣品進(jìn)行分離；` 質(zhì)譜條件:用正離子模式進(jìn)行多反應(yīng)檢測，分析物特征離子對如表1 ; 表1分析物特征離子對
I分子量I定量離子對(m/z) I輔助定性離子對(m/z)
NNAL209.1 210 — 180210 — 149
NNA207.1 208 — 178208 — 206
NNAL-甲基-d3210.1 211 — 181 (4)實(shí)際檢測:使用優(yōu)化后的液相色譜分離條件，對處理好的煙絲樣品溶液或煙氣樣品溶液進(jìn)行HPLC-MS-MS檢測，使用標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線計(jì)算煙絲樣品溶液或煙氣樣品溶液中的NNAL和NNA濃度，進(jìn)而換算得到煙絲樣品或煙氣樣品中NNAL和NNA的含量。
【文檔編號】G01N30/88GK103776944SQ201410013061
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月13日
【發(fā)明者】段焰青, 夏建軍, 者為, 王文元, 蔣舉興, 黨立志, 陳興 申請人:紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司