磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括：分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10-100ul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量；分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各10-100ul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。本發(fā)明的目的提供一種方法簡(jiǎn)單，靈敏度高、可靠性強(qiáng)，檢測(cè)成本低的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法。
【專利說(shuō)明】磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]磷酸肌酸二鈉鹽是一種心肌保護(hù)劑，臨床用于心麻痹癥的心臟保護(hù)及心肌代謝窘迫的其他情況，如心肌缺血、肥厚、心梗及心衰的治療。由于存在高能磷酸鍵，磷酸肌酸鈉在有水和質(zhì)子的純?cè)谙?，極易分解，而且磷酸肌酸二鈉鹽有熱不穩(wěn)定性，長(zhǎng)時(shí)間放置在常溫下也容易分解，而磷酸肌酸二鈉鹽在的酸性溶液和堿性溶液中以及中性溶液中的穩(wěn)定性都不好，容易分解。
[0003]現(xiàn)有關(guān)于聞效液相測(cè)定憐酸肌酸二納的含量和其中有關(guān)物質(zhì)大小主要有:
[0004]I 離子對(duì)色譜法測(cè)定磷酸肌酸二鈉鹽的穩(wěn)定性”(祁廣建、沈國(guó)英；《中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志》，2004，24 (I):11 ；
[0005]2 高效液相色譜法測(cè)定磷酸肌酸二鈉鹽含量及其應(yīng)用”(張曉平、米殺天等；《天津藥學(xué)》，2003，15 (1),18)；
[0006]3 反相離子對(duì)高效液相色譜法測(cè)定磷酸肌酸二鈉鹽的含量”(于忠輝、張寧等；《中國(guó)藥物與臨床》，2005，5 (11),865)；
[0007]現(xiàn)有的高效 液相檢測(cè)方法中磷酸肌酸二鈉鹽溶解于稀釋劑后，磷酸肌酸鈉溶液的穩(wěn)定性非常差，無(wú)法準(zhǔn)確的檢測(cè)磷酸肌酸二鈉鹽其中的真實(shí)的有關(guān)物質(zhì)和磷酸肌酸鈉含量大小，現(xiàn)有的高效液相檢測(cè)方法中一般采用流動(dòng)相作為稀釋劑，而稀釋劑Ph值都為3.20~
4.30之間，磷酸肌酸二鈉鹽在此溶液非常不穩(wěn)定，將分解為肌酸和肌酐兩種雜質(zhì)。
[0008]現(xiàn)有的方法不能準(zhǔn)確檢測(cè)磷酸肌酸二鈉鹽的含量和無(wú)法檢測(cè)生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)肌酐磷酸鈉的大小。
[0009]故此，現(xiàn)有的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的檢測(cè)方法有待于進(jìn)一步完善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，提供一種方法簡(jiǎn)單，靈敏度高、可靠性強(qiáng)，檢測(cè)成本低的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法。
[0011]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下方案:
[0012]一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于包括:
[0013]A、色譜條件:
[0014]al、色譜柱:采用反相十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相的C18色譜柱；
[0015]a2、流動(dòng)相:磷酸二氫鉀29.26g，四丁基硫酸氫銨0.7809g，用純水稀釋到956ml，加入乙腈40ml和lmol/1氫氧化鉀4ml ；
[0016]a3、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；
[0017]B、檢測(cè)方法:
[0018]bl、磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量檢測(cè)[0019]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的磷酸肌酸二鈉鹽作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.lmg/ml的對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lml/ml的供試品溶液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各IO-1OOul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量；
[0020]b2、磷酸肌酸鈉二鈉鹽雜質(zhì)檢測(cè)
[0021]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的肌酸、肌酐作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.25ug/ml的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lmg/ml的樣品溶液，分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各IO-1OOul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。
[0022]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于所述稀釋劑由5%氯化鈉水溶液和四丁基硫酸氫銨0.7809g混合，再用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.00--? 。
[0023]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相流速:0.5-1.5ml/min，柱 溫:15_35°C。
[0024]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
[0025]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于進(jìn)樣體積20ul。
[0026]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于柱溫為25 °C。
[0027]如上所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于流動(dòng)相流速:1.0ml/min。
[0028]綜上所述，本發(fā)明的有益效果:
[0029]一、本發(fā)明檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，靈敏度高、可靠性強(qiáng)，檢測(cè)成本低，適用于磷酸肌酸二鈉鹽生產(chǎn)中任何一步中間體的考察，也適用于磷酸肌酸二鈉鹽本身的質(zhì)量控制檢測(cè)，有利于工業(yè)化大生產(chǎn)。
[0030]二、樣品在四丁基硫酸氫銨離子對(duì)試劑配置的稀釋劑中溶液穩(wěn)定性非常好。
[0031]三、流動(dòng)相中加入磷酸二氫鉀，能夠很好的抑制磷酸肌酸二鈉鹽的降解。
[0032]四、稀釋劑溶液Ph值在中性條件下，磷酸肌酸二鈉鹽基本上不降解。
[0033]五、本發(fā)明檢測(cè)方法能夠快速準(zhǔn)確的測(cè)定磷酸肌酸二鈉鹽的含量以及其中肌酸，肌酐的含量。
[0034]六、現(xiàn)有的HPLC檢測(cè)方法中，磷酸肌酸二鈉鹽在稀釋劑和流動(dòng)相中的穩(wěn)定性都非常差，而本發(fā)明檢測(cè)方法磷酸肌酸二鈉鹽在稀釋劑溶液中能夠24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，不發(fā)生降解情況。
【具體實(shí)施方式】
[0035]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述:
[0036]實(shí)施例1[0037]—種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括:
[0038]A、色譜條件:
[0039]al、色譜柱:采用反相十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相的C18色譜柱；
[0040]a2、流動(dòng)相:磷酸二氫鉀29.26g，四丁基硫酸氫銨0.7809g，用純水稀釋到956ml，加入乙腈40ml和lmol/1氫氧化鉀4ml ；
[0041]a3、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；
[0042]B、檢測(cè)方法:
[0043]bl、磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量檢測(cè)
[0044]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的磷酸肌酸二鈉鹽作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.lmg/ml的對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lml/ml的供試品溶液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各IOul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量；
[0045]b2、磷酸肌酸鈉二鈉鹽雜質(zhì)檢測(cè)
[0046]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的肌酸、肌酐作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.25ug/ml的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lmg/ml的樣品溶液，分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各IOul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。
[0047]其中所述稀釋劑由5%氯化鈉水溶液和四丁基硫酸氫銨0.7809g混合，再用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.00而成。所述流動(dòng)相流速:0.5ml/min,柱溫:15°C,檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
[0048]實(shí)施例2
[0049]一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括:
[0050]A、色譜條件:
[0051]al、色譜柱:采用反相十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相的C18色譜柱；
[0052]a2、流動(dòng)相:磷酸二氫鉀29.26g，四丁基硫酸氫銨0.7809g，用純水稀釋到956ml，加入乙腈40ml和lmol/1氫氧化鉀4ml ；
[0053]a3、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；
[0054]B、檢測(cè)方法:
[0055]bl、磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量檢測(cè)
[0056]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的磷酸肌酸二鈉鹽作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.lmg/ml的對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lml/ml的供試品溶液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量；
[0057]b2、磷酸肌酸鈉二鈉鹽雜質(zhì)檢測(cè)
[0058]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的肌酸、肌酐作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.25ug/ml的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lmg/ml的樣品溶液，分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各20ul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。[0059]其中所述稀釋劑由5%氯化鈉水溶液和四丁基硫酸氫銨0.7809g混合，再用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.00而成。所述流動(dòng)相流速:1.0ml/min,柱溫:25°C,檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
[0060]實(shí)施例3
[0061]一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，包括:
[0062]A、色譜條件:
[0063]al、色譜柱:采用反相十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相的C18色譜柱；
[0064]a2、流動(dòng)相:磷酸二氫鉀29.26g，四丁基硫酸氫銨0.7809g，用純水稀釋到956ml，加入乙腈40ml和lmol/1氫氧化鉀4ml ；
[0065]a3、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；
[0066]B、檢測(cè)方法:
[0067]bl、磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量檢測(cè)
[0068]取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的磷酸肌酸二鈉鹽作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.lmg/ml的對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為
0.lml/ml的供試品溶液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各IOOul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量；
[0069]b2、磷酸肌酸鈉二鈉鹽雜質(zhì)檢測(cè)
[0070]取中國(guó)藥品生物制品檢定`所提供的肌酸、肌酐作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.25ug/ml的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為
0.lmg/ml的樣品溶液，分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各IOOul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。
[0071]其中所述稀釋劑由5%氯化鈉水溶液和四丁基硫酸氫銨0.7809g混合，再用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.0O而成。所述流動(dòng)相流速:1.5ml/min,柱溫:35°C,檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
[0072]為了進(jìn)一步驗(yàn)證本檢測(cè)方法的優(yōu)越性，本發(fā)明進(jìn)行了以下試驗(yàn):1、線性試驗(yàn)
[0073]取磷酸肌酸二鈉鹽的化學(xué)對(duì)照品適量，用稀釋劑分別配置為0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml的供試品溶液。分別取20ul溶液,注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，各濃度的峰面積見(jiàn)表1。
[0074]表1磷酸肌酸鈉線性實(shí)驗(yàn)
[0075]

濃度(mg/ml)峰面積

0.0495724945

0.0495723224

0.0991431097

0.0991429524

0.1982873297
【權(quán)利要求】
1.一種磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于包括: A、色譜條件: al、色譜柱:采用反相十八烷基硅烷鍵合硅膠作為固定相的C18色譜柱； a2、流動(dòng)相:磷酸二氫鉀29.26g，四丁基硫酸氫銨0.7809g，用純水稀釋到956ml，加入乙腈40ml和lmol/1氫氧化鉀4ml ； a3、檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器； B、檢測(cè)方法: bl、磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量檢測(cè) 取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的磷酸肌酸二鈉鹽作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.lmg/ml的對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lml/ml的供試品溶液，分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各IO-1OOul進(jìn)樣記錄色譜圖中磷酸肌酸二鈉鹽的峰面積，按照外標(biāo)法，以無(wú)水磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)計(jì)算磷酸肌酸鈉二鈉鹽的高效液相色譜含量； b2、磷酸肌酸鈉二鈉鹽雜質(zhì)檢測(cè) 取中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的肌酸、肌酐作為已知對(duì)照品，用稀釋劑溶解成濃度為0.25ug/ml的雜質(zhì)對(duì)照品溶液，取磷酸肌酸二鈉鹽樣品用稀釋劑溶解為濃度為0.lmg/ml的樣品溶液，分別取雜質(zhì)對(duì)照品溶液和樣品溶液各IO-1OOul進(jìn)樣記錄色譜圖中肌酸和肌酐的峰面積，再按照外標(biāo)法計(jì)算磷酸肌酸二鈉鹽樣品中肌酸和肌酐的大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于所述稀釋劑由5%氯化鈉水溶液和四丁基硫酸氫銨0.7809g混合，再用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.00而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于所述流動(dòng)相流速:0.5-1.5ml/min,柱溫:15_35°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于進(jìn)樣體積20ul。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于柱溫為25°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的磷酸肌酸鈉二鈉鹽含量及雜質(zhì)的高效液相色譜檢測(cè)方法，其特征在于流動(dòng)相流速:1.0ml/min。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103760267SQ201410020139
【公開(kāi)日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月16日
【發(fā)明者】婁良 申請(qǐng)人:中山百靈生物技術(shù)有限公司