一種同時測定16種人參皂苷單體hplc方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種同時測定Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F2、Rg3、protopanaxatriol、Compound?K、Rh2、protopanaxadiol16種人參皂苷單體HPLC方法，測定范圍包括含有上述1種以上皂苷單體的人參、西洋參等藥用植物及其制劑；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明同時測定的人參皂苷單體種類多達16種，提高了效率；本發(fā)明只用乙腈和水作流動相，解決了磷酸鹽對色譜柱損耗大,系統(tǒng)清洗麻煩等問題；本發(fā)明建立的HPLC方法線性范圍廣、方法準確、重現(xiàn)性好、快捷簡便、穩(wěn)定可靠。本發(fā)明為人參、西洋參等藥用植物及其制劑的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。
【專利說明】一種同時測定16種人參皂苷單體HPLC方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及人參、西洋參等藥用植物及其制劑中人參皂苷單體含量的測定方法，屬于對中藥材及其制劑進行質(zhì)量控制的【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]人參是我國地道藥材中應用最廣泛的代表，人參皂苷是人參的主要藥效成分，人參皂苷具有增強記憶力，提高免疫力，改善心血管，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，延緩衰老和抗腫瘤等功能，人參皂苷的含量測定已經(jīng)成為國內(nèi)外研究的熱點。
[0003]隨著社會的發(fā)展，對于藥品質(zhì)量控制的要求也越來越高，但由于人參化學成分復雜，人參皂苷種類多樣，現(xiàn)已確定并分離的人參皂苷化合物單體有50余種，根據(jù)苷元的不同，人參皂苷被分為原人參二醇類皂苷、原人參三醇類皂苷及齊墩果酸類皂苷。因此建立同時、多種、快捷、方便、可靠的人參皂苷檢測方法對人參及其制劑的質(zhì)量控制具有重要意義。
[0004]雖然大量研究報道了人參皂苷單體含量的HPLC測定方法，但大多為同時測定12種以下人參皂苷單體含量方法，尚未見同時測定16種人參皂苷單體含量的報道。
[0005]本發(fā)明提供一種同時測定16種人參皂苷單體HPLC方法，所測定的16種人參皂苷單體為 Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、Rd> F2、Rg3、protopanaxatriol> CompoundK、Rh2、protopanaxadiol,測定范圍包括含有上述I種以上阜苷單體的人參、西洋參等藥用植物及其制劑；由以下步驟完成:對照品溶液的制備，樣品溶液的制備，16種人參阜昔含量測定標準曲線的建立，樣品中人參皂苷含量的測定；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利同時測定的人參皂苷單體種類多達16種，提高了效率；本專利方法只用乙腈和水作流動相，解決了磷酸鹽對色譜柱損耗大，系統(tǒng)清洗麻煩等問題，流動相配制方便，簡便了操作；本專利方法色譜柱為普通色譜柱，便于購買，降低成本；本專利方法16種人參皂苷單體在0.5?40 μ g范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系、線性范圍廣，方法準確、重現(xiàn)性好、快捷簡便、穩(wěn)定可靠。本專利方法能夠更好地分析人參皂苷單體的含量，為人參、西洋參等藥用植物及其制劑的質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006]1、一種同時測定16種人參阜苷單體HPLC方法,所測定的16種人參阜苷單體分別為 Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、RcU F2、Rg3> protopanaxatriol> Compound K、Rh2、protopanaxadiol,測定樣品范圍包括含有上述阜苷中I種以上的人參、西洋參等藥用植物及其制劑；由以下步驟完成:
[0007]( I)對照品溶液的制備
[0008]分別精密稱取16種人參皂苷單體對照品Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、RcU F2、Rg3、protopanaxatriol、CK> Rh2、protopanaxadiol5mg,至于 5ml 容量瓶，用甲醇溶解并定容，制得Img.ml-Ι的溶液；
[0009]( 2 )樣品溶液的制備[0010]分為固體樣品和液體樣品兩種:精S稱取固體樣品人參及其制劑粉末lg，用濾紙包好，放置索氏提取器中，加適量石油醚，80°C回流提取8h，棄去石油醚液，加適量甲醇，80°C回流提取10h，收集提取液，加色譜純甲醇定容，用0.45μπι濾膜過濾入樣品瓶備用；液體樣品直接用0.45 μ m濾膜過濾入樣品瓶備用。
[0011](3) 16種人參皂苷含量測定標準曲線的建立
[0012]色譜條件:C18色譜柱為150X4.6mm，5 μ m;流動相為乙腈和水，流動相梯度洗脫條件:0min為18%乙臆，40min為21%乙臆，42min為26%乙臆，46min為32%乙臆，66min為33.5%乙臆,7Imin為38%乙臆，86min為65%乙臆,9Imin為65%乙臆，96min為85%乙臆，103min為85%乙腈，105min為18%乙腈，106min為18%乙腈；流速1.0mL.min-l ;檢測波長203nm，柱溫 35°C ;將 1.0mg.ml_l 的對照品溶液進樣 2uL，4uL，6uL，IOuL, 16uL, 20uL,建立標準曲線，計算每個皂苷單體線性回歸方程；
[0013](4)樣品中人參皂苷含量的測定
[0014]按上述標準曲線色譜條件對制備的樣品溶液進行測定，制備的樣品溶液進樣量為20uL,利用線性回歸方程，計算樣品中16種人參皂苷含量。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是人參皂苷單體對照品混標與人參及人參制劑樣品色譜圖。
【具體實施方式】
[0016]本發(fā)明提供了一種同時測定16種人參皂苷單體HPLC方法，本發(fā)明領(lǐng)域技術(shù)人員可借鑒本
【發(fā)明內(nèi)容】
，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，都視為本發(fā)明。本發(fā)明所述一種同時測定16種人參皂苷單體HPLC方法已通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。
[0017]下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。
[0018]實施例1 一種同時測定16種人參阜苷單體HPLC方法
[0019]1、材料
[0020]日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，配有LC-2010A型液相色譜泵，LC-2010A型自動進樣器，CLASS-vP色譜工作站；日本島津AUY220電子分析天平，昆山舒美KQ-250DV超
聲波清洗器。
[0021]人參藥材購自于吉林省撫松縣，經(jīng)張連學教授鑒定為人參；人參莖葉采自吉林農(nóng)業(yè)大學藥植園，生脈散為實驗室自制；生脈飲(吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司，批號Z22024479)。
[0022]人參皂苷對照品Rgl (201022)，Re (201035)，Rf (201007), Rbl (201058)、Rg2 (201023), Re(201069) , Rb2(201078) , Rb3(201029) , Fl(201225)，Rd(201018)，F(xiàn)2 (201255), Rg3 (201237) , protopanaxatriol(201206) , Compound K (201243),Rh2 (2012009)，protopanaxadiol (201235)購自于吉林大學天然藥物化學實驗室，含量均在98%以上，乙腈、甲醇(均為色譜純);水為娃哈哈超純水；其余試劑為分析純。
[0023]2、方法[0024]2.1對照品溶液的制備
[0025]分別精密稱取16 種人參皂苷對照品 Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、RcUF2、Rg3、protopanaxatriol、 Compound K、Rh2、protopanaxadiol 各 5mg,加甲醇制成上述16 種人參皂苷的質(zhì)量濃度分別為 1.0,0.94，1.12,1.0,0.98，0.94，0.96，0.96，1.12，0.88，
0.86，1.0, 1.06,0.96，1.04,0.94mg.ml-1 的對照品溶液，(λ 45 μ m 濾膜過濾，備用。
[0026]2.2樣品溶液的制備
[0027]分為固體樣品和液體樣品兩種:精密稱取固體樣品人參及其制劑粉末lg，用濾紙包好，放置索氏提取器中，加適量石油醚，80°C回流提取4h，棄去石油醚液，加適量甲醇，80°C回流提取10h，收集提取液，加色譜純甲醇定容，用0.45μm濾膜過濾入樣品瓶備用；液體樣品直接用0.45 μ m濾膜過濾入樣品瓶備用。
[0028]2.316種人參皂苷含量測定標準曲線的建立
[0029]色譜條件:C18色譜柱為150X4.6mm，5 μ m;流動相為乙腈和水，流動相梯度洗脫條件:0min為18%乙臆，40min為21%乙臆，42min為26%乙臆，46min為32%乙臆，66min為33.5%乙臆,71min為38%乙臆，86min為65%乙臆,91min為65%乙臆，96min為85%乙臆，103min為85%乙腈，105min為18%乙腈，106min為18%乙腈；流速1.0mL.min-1;檢測波長203nm，柱溫 35°C ;將 1.0mg.ml-1的對照品溶液進樣 2uL，4uL，6uL，1OuL, 16uL, 20uL,建立標準曲線，以進樣中人參皂苷質(zhì)量(Y)對峰面積(X)作圖，計算每個皂苷單體線性回歸方程。精密度試驗、穩(wěn)定性試驗、重復性試驗、回收率試驗按常規(guī)方法進行。
[0030]2.4樣品含量測定取人參、人參莖葉、生脈散、生脈飲按供試品溶液制備方法制成樣品溶液，按2.3色譜條件進樣分析，根據(jù)線性回歸方程計算16種人參皂苷的含量。
[0031]3、結(jié)果
[0032]3.1色譜峰的歸屬
[0033]圖1中，A是人參阜昔對照品,B是生曬參,C是人參莖葉,0是生脈散,E是生脈飲；圖1中人參皂苷對照品從左到右I~16號峰分別代表Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、Fl、RcU F2、Rg3、protopanaxatriol、Compound K、Rh2、protopanaxadiol。由圖1 可見，根據(jù)單標對照品保留時間，保留時間分別為Rgl:35.744min、Re:37.706min、Rf:51.174min、Rbl:54.133min、Rg2:55.108min、Re:56.263min、Rb2:59.083min2、Rb3:60.089min、Fl:61.493min、Rd:66.602min、F2:78.779min、Rg3:81.297min、Protopanaxatriol:83.391min、Compound K:87.040min、Rh2:88.351min、Protopanaxadiol: 101.596min，確定人參單體皂苷單體在混標中位置。從對照品溶液中可以檢出16個單體人參皂苷單體，樣品溶液中待檢的單體人參皂苷單體也能和其他的雜峰分開，各組分的分離度良好。
[0034]3.2線性關(guān)系考察
[0035]分別精密稱取對照品溶液2，4，6，10，16，20 μ L進樣，以進樣中人參皂苷質(zhì)量(Y)對峰面積(X)作圖，得到線性回歸方程，見表1。本方法測定16種人參皂苷在0.38~22.40 μ g范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系Cr值均>0.9990 (n=6))。
[0036]表1人參皂苷單體的回歸方程
[0037]
【權(quán)利要求】
1.一種同時測定16種人參皂苷單體HPLC方法，所測定的16種人參皂苷單體分別為Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、Rd> F2、Rg3、protopanaxatriol> Compound K、Rh2、protopanaxadiol,測定樣品范圍包括含有上述阜苷中I種以上的人參、西洋參等藥用植物及其制劑；由以下步驟完成: (1)對照品溶液的制備分別精密稱取16種人參皂苷單體對照品Rgl、Re、Rf、Rbl、Rg2、Re、Rb2、Rb3、F1、Rd> F2、Rg3、protopanaxatriol、CK> Rh2、protopanaxadiol 5mg,至于 5ml容量瓶，用甲醇溶解并定容，制得Img.ml—1的溶液； (2)樣品溶液的制備分為固體樣品和液體樣品兩種:精密稱取固體樣品人參及其制劑粉末lg，用濾紙包好，放置索氏提取器中，加適量石油醚，80°C回流提取4h，棄去石油醚液，加適量甲醇，80°C回流提取10h，收集提取液，加色譜純甲醇定容，用0.45 μ m濾膜過濾入樣品瓶備用；液體樣品直接用0.45 μ m濾膜過濾入樣品瓶備用。 (3)16種人參皂苷單體含量測定標準曲線的建立色譜條件:C18色譜柱為150X4.6.ι，5μπι;流動相為乙腈和水，流動相梯度洗脫條件:0min為18%乙腈，40min為21%乙腈，42min為26%乙腈，46min為32%乙腈，66min為33.5%乙腈，71min為38%乙腈，86min 為 65% 乙腈，91min 為 65% 乙腈，96min 為 85% 乙腈，103min 為 85% 乙腈，105min 為18%乙腈，106min為18%乙腈;流速1.0 mL.mirT1 ;檢測波長203 nm,柱溫35°C ;將1.0mg? πι-1的對照品溶液進樣2uL,4uL,6uL, IOuL, 16uL, 20uL,建立標準曲線，計算每個阜苷單體線性回歸方程； (4)樣品中人參皂苷含量的測定按上述標準曲線色譜條件對制備的樣品溶液進行測定，制備的樣品溶液進樣量為20uL，利用線性回歸方程，計算樣品中16種人參皂苷含量。
【文檔編號】G01N30/02GK103884786SQ201410022314
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】郜玉鋼, 郭沖, 張連學, 臧埔, 何忠梅, 趙巖, 祝洪燕, 王立巖, 楊鶴, 劉雙利 申請人:吉林農(nóng)業(yè)大學