口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。它包括口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽包被的酶聯(lián)反應(yīng)板和酶標(biāo)記抗抗體；所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為序列表中序列1所示的多肽。本試劑盒使用化學(xué)合成非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原肽包被反應(yīng)板，抗原用量少、靈敏性和特異性高，可以高效地檢測是否存在口蹄疫病毒感染。本發(fā)明試劑盒特異性好、敏感、高效，具有良好的市場前景。
【專利說明】口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體地，本發(fā)明涉及一種口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，特別是口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VPl抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease, FMD)是世界范圍內(nèi)廣泛分布，在國際間傳播蔓延的全球性流行性傳染病。國際獸醫(yī)局(OIE)在1984年修訂的動物傳染病分類中將口蹄疫列為A類傳染病之首?？谔阋呤怯煽谔阋卟《靖腥疽鹋继隳縿游锇l(fā)生的烈性傳染病。常在牛群及豬群大范圍流行?？谔阋叩闹滤缆屎艿?，但是感染率很高。發(fā)病的主要癥狀為:口腔粘膜、舌、唇、鼻鏡、蹄叉、乳頭等部位發(fā)生水皰，破潰形成爛斑，病畜蹄痛臥地、嚴(yán)重者蹄殼邊緣潰裂或脫殼。不同動物的癥狀稍有不同，妊娠母牛可能流產(chǎn)，而后導(dǎo)致繁殖力降低；豬則以破蹄為最主要癥狀；山羊和綿羊的癥狀通常比牛溫和。口蹄疫傳染性高，傳播迅速，感染豬、牛、羊等牲畜常導(dǎo)致幼畜死亡，成年動物生產(chǎn)能力急劇下降，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的發(fā)展和畜產(chǎn)品的生產(chǎn)供應(yīng)。同時會引發(fā)流行國家或地區(qū)動物及動物產(chǎn)品的市場流通，并使其國際貿(mào)易受到及大的封鎖和限制，給流行國家和地區(qū)的畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了巨大經(jīng)濟(jì)的損失。因此口蹄疫歷來受到各國政府的高度重視。
[0003]口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus, FMDV)屬于小核糖核酸病毒,該群病毒的其他成員包括普通感冒病毒和天花病毒等?？谔阋卟《?FMDV)具有多型性、易變性等特點(diǎn)。目前，已知全世界有?個血清型:A、O、C、Satl (南非I型)、Sat2 (南非II型)、Sat3(南非III型)和AsiaI (亞洲I型)。每個型又分若干亞型，目前發(fā)現(xiàn)的亞型有70多個。由于不斷發(fā)生抗原漂移，因此并不能嚴(yán)格區(qū)分亞型。FMDV由一條核酸RNA鏈和衣殼蛋白組成，基因組RNA全長約8.5kb，可直接作為信使RNA，F(xiàn)MDV基因組RNA由5’ UTR、3’ UTR和OFR組成。5’^^長約1300社，含有￥?8、二級結(jié)構(gòu)、？10基因、？017((:)區(qū)段和內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)等(IRES)。3，UTR由Poly(A)尾和大0RF3，末端與Poly(A)區(qū)段5，末端之間92個nt殘基組成，長172nt。大ORF由L基因(P20a)、P1結(jié)構(gòu)蛋白基因、P2和P3非結(jié)構(gòu)蛋白基因以及起始密碼子和終止密碼子組成。以L、P1、P2和P3的順序依次排列，長約6.5Kb。其中基因組的3D區(qū)段是編碼FMDV的RNA聚合酶的，是病毒復(fù)制中不可缺少的成分。Pl結(jié)構(gòu)蛋白基因編碼4中主要的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，它們各60個組成了 FMD的外殼蛋白。
[0004]口蹄疫病毒基因所編碼產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白有L、2A、2BC、3AB、3ABC、3D等，其中L蛋白的免疫原性比其他非結(jié)構(gòu)蛋白弱，感染動物不一定能產(chǎn)生抗體，即使產(chǎn)生抗體，維持的時間也比較短。病 毒感染動物可產(chǎn)生抗2B抗體，但這種抗體在ELISA反應(yīng)中重復(fù)性不好，不能作為檢測抗體。2C抗體由于消退的比3ABC快，且免疫牛中可檢測到2C抗體，因此也不能作為檢測指標(biāo)。3D又稱病毒感染相關(guān)抗原，沒有型特異性，檢測其抗體水平是評價動物是否接觸過抗原的重要指標(biāo)，也是國際貿(mào)易必檢項(xiàng)目。目前認(rèn)為僅檢測3D抗體不能區(qū)分感染動物與免疫動物，因?yàn)橐呙缰型泻哿康姆墙Y(jié)構(gòu)抗原，經(jīng)過多次免疫后，在免疫動物體內(nèi)也能檢測到3D抗體。3ABC聚蛋白中，3A免疫原性最強(qiáng)，3C免疫原性較弱。許多資料認(rèn)為3ABC作為感染的標(biāo)志可信度較大。檢測3ABC抗體是確診感染的重要指標(biāo)。
[0005]目前，口蹄疫的防治主要依靠疫苗免疫。我國對口蹄疫施行強(qiáng)制性免疫，每年春秋進(jìn)行一次集中免疫，兩次之間對新補(bǔ)欄家畜及時進(jìn)行補(bǔ)免。在實(shí)際生產(chǎn)中如何鑒別診斷易感動物是進(jìn)行了疫苗免疫還是感染了口蹄疫病毒對口蹄疫防疫體系的建立、檢驗(yàn)檢疫都是十分重要的。世界各國也在該領(lǐng)域開展了廣泛的研究。ELISA方法具有特異、敏感、快速、簡便、可靠性好等特點(diǎn)，且能自動化操作，并能迅速的檢測大量樣品，在FMD的診斷中日益受到人們的重視，現(xiàn)已成為國際上檢測易感動物豬、牛等是否疫苗免疫或感染病毒的常規(guī)方法之一。
[0006]意大利的De等(1997)研制出基于3ABC蛋白的間接捕獲ELISA技術(shù)，并可區(qū)分野毒感染和疫苗毒感染。丹麥的Sorensen等(1998)開發(fā)出以桿狀病毒表達(dá)的抗原所構(gòu)建的ELISA方法，可分別檢測非結(jié)構(gòu)蛋白3AB、3ABC、3D，其中3AB、3ABC、3DELISA均可檢測FMDV的7種血清型病毒抗體。德國的Bruderer (2004)也成功建立了 3ABC ELISA方法。謝慶閣等(2003)利用大腸埃希氏菌表達(dá)的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC多肽作為抗原建立了一種可以區(qū)分FMDV感染與疫苗免疫的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。尤永進(jìn)、朱彩珠等(2003)以同樣的原理建立基于非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC的ELISA檢測方法。
[0007]現(xiàn)有的基于非結(jié)構(gòu)蛋白的酶聯(lián)免疫吸附檢測方法使用的反應(yīng)板包被的大多是3ABC、3AB，且大都是通過原核表達(dá)的方法得到非結(jié)構(gòu)蛋白的包被抗原。此類原核表達(dá)的蛋白產(chǎn)物中含有少量的載體蛋白和宿主菌蛋白，完全去除它們是很困難，這些雜蛋白就會與檢測樣品產(chǎn)生非特異性的結(jié)合，從而影響了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0008]口蹄疫是關(guān)系到國 家經(jīng)濟(jì)安全的重大動物疫病，相關(guān)關(guān)鍵技術(shù)應(yīng)該牢牢掌握在自己手里。一旦我們擁有自主知識產(chǎn)權(quán)，將利于保障我國的經(jīng)濟(jì)安全。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明的目的是提供一種新的用于口蹄疫易感動物豬疫苗免疫與病毒感染的鑒別診斷的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
[0010]本發(fā)明的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽包被的酶聯(lián)反應(yīng)板和酶標(biāo)記抗抗體；所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為序列表中序列I所示的多肽。
[0011]所涉及的包被抗原采用固相化學(xué)合成的方法生產(chǎn)，包被抗原含有口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B的主要抗原位點(diǎn)多肽，可與口蹄疫病毒感染后產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗體特異結(jié)
八
口 ο
[0012]所述酶標(biāo)記抗抗體的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；所述酶標(biāo)記抗抗體為酶標(biāo)記兔抗豬IgG ;所述酶標(biāo)記抗抗體優(yōu)選為辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豬IgG多克隆抗體。
[0013]所述酶聯(lián)反應(yīng)板為可拆卸96孔酶標(biāo)板；所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為化學(xué)人工合成得到。
[0014]本發(fā)明通過以下方式實(shí)現(xiàn):采用口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B的人工化學(xué)合成多肽包被的可拆96孔聚苯乙烯酶聯(lián)反應(yīng)板。同時，試劑盒中含有以辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豬的IgG多克隆抗體酶結(jié)合物，陰性對照血清，陽性對照血清，樣品稀釋液，TMB底物溶液，20X濃縮洗滌液和終止液等組分。以間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測樣品中的3B蛋白抗體。
[0015]所涉及的酶聯(lián)反應(yīng)板的最佳制備條件是:包被時將多肽抗原溶于PH9.4的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯(lián)反應(yīng)板，每孔50ng抗原，在37°C放置2_4h，再4_8°C下放置過夜(8-12小時)使多肽抗原與酶聯(lián)反應(yīng)板充分結(jié)合。然后按照300ul/孔加入含l%(g/ml)牛血清白蛋白(BSA)的PBS緩沖液(PH=7.4)，37°C封閉處理l_2h，洗滌后甩干，待酶聯(lián)反應(yīng)板干燥后密封4°C保存。
[0016]所述試劑盒中含有顯色液和終止液；當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時顯色液由顯色液A液和顯色液B液組成,所述顯色液A液為含0.2%(g/ml)過氧化氫尿素的檸檬酸磷酸鹽緩沖液，所述顯色液B液為0.2mg/ml的四甲基聯(lián)苯胺溶液；使用時兩者以1:1的比例混合。當(dāng)標(biāo)記酶為堿性磷酸酶時，顯色液為4-硝基酚磷酸鹽緩沖液。所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。
[0017]所述試劑盒還包括陰性對照血清、陽性對照血清；所述陰性對照血清為用無口蹄疫抗體的正常豬血清；所述陽性對照血清為以所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為免疫原免疫豬得到的血清；
[0018]所涉及的陽性對照血清具體是以人工化學(xué)合成的非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽作為免疫原，免疫25-35日齡無特定病源體(SPF)豬，制備高免血清，加入1000U/ml鏈霉素和青霉素，過濾徑為0.2 μ m的濾膜除菌，作為試劑盒的陽性對`照血清。
[0019]所涉及的陰性對照血清具體是用無口蹄疫抗體的正常豬血清，加入1000U/ml鏈霉素和1000U/ml青霉素，過濾徑為0.2 μ m的濾膜除菌，作為試劑盒陰性血清。
[0020]所述試劑盒還包括樣品稀釋液和濃縮洗漆液；樣品稀釋液為含有3%(g/ml)BSA的0.15M、pH為7.4的PBS緩沖液(過濾徑為0.45 μ m濾膜);所述濃縮洗滌液為0.15Μ，ρΗ7.4，含有0.5% (ml/ml) Tween-20的磷酸鹽緩沖液(經(jīng)過濾徑為0.2 μ m的濾膜除菌)。
[0021]本發(fā)明試劑盒的檢測程序?yàn)?
[0022]1.平衡:將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置室溫平衡30分鐘后使用，液體試劑用前混勻。
[0023]2.配液:將濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋備用。
[0024]3.設(shè)定:留I個空白孔，3個陰性對照孔，和2個陽性對照孔，其余為待測樣本孔。
[0025]4.待測標(biāo)本預(yù)稀釋:往稀釋板孔內(nèi)每孔加100 μ I樣本稀釋液，分別加入5 μ I待測樣本。
[0026]5.加樣:空白孔不加樣；3個陰性對照孔各加100μ I陰性對照，2個陽性對照孔各加100 μ I陽性對照；其余孔分別按預(yù)先設(shè)定加100 μ I稀釋的待測樣本。加樣過程時間跨
度應(yīng)盡量短。
[0027]6.溫育:震蕩混勻，置37°C溫箱或水浴鍋中，反應(yīng)30分鐘。
[0028]7.洗板:棄去反應(yīng)液，每孔加入稀釋后的洗滌液300μ 1，浸泡15秒，甩棄洗液。連續(xù)洗板4次后拍干。
[0029]8.加酶:空白孔不加酶；其余各孔加100 μ I辣根過氧化物酶標(biāo)記兔抗豬IgG抗體(艷紅色)。[0030]9.溫育:置37°C溫箱或水浴鍋中，反應(yīng)30分鐘。
[0031]10.洗板:棄去反應(yīng)液，每孔加入稀釋后的洗滌液300μ 1，浸泡15秒，甩棄洗滌液。連續(xù)洗板5次后拍干。
[0032]11.顯色:每孔(包括空白對照孔)依次加入顯色底物液Α、顯色底物液B各50 μ 1，震蕩混勻，置37°C溫箱或水浴鍋中，顯色15分鐘。
[0033]12.終止:每孔(包括空白對照孔)加入顯色終止液各50 μ I，振蕩混勻終止反應(yīng)。
[0034]13.測定:用空白對照孔調(diào)零后測定各孔450nm的OD值。也可用雙波長450nm/630nm測定各孔OD值。
[0035]本發(fā)明試劑盒的檢測結(jié)果的判定:
[0036]1.陰性對照OD平均值應(yīng)該< 0.2，否則無效。
[0037]2.陽性對照每個檢測值應(yīng)該在0.6到1.8之間，否則無效。
[0038]3.臨界值的計(jì)算:臨界值=0.17X陽性對照平均OD值。
[0039]4.結(jié)果判定:樣本測定OD值>臨界值者判為陽性；樣本測定OD值〈臨界
[0040]值者判為陰性(建議對OD值〈臨界值，^ 0.5倍臨界值的樣本跟蹤觀察)。本發(fā)明的積極效果在于:本發(fā)明采用生物信息學(xué)方法對非結(jié)構(gòu)蛋白的抗原表位進(jìn)行精確分析，從3B蛋白上的主要抗原表位上篩選出適合ELISA檢測用的肽段。同時，采用先進(jìn)的固相合成肽技術(shù)合成多肽抗原用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板以及制備試劑盒中的陽性對照血清。
[0041]由于試劑盒中使用的包被抗原是化學(xué)合成多肽，不含雜蛋白，純度高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，因此可以有效地檢測口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，以判斷被檢動物是否感染口蹄疫病毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，試劑盒重復(fù)性好，特異性強(qiáng)，靈敏度高?？梢杂行У貦z測口蹄疫病毒感染后產(chǎn)生的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體，以判斷被檢動物是否感染口蹄疫病毒。能滿足不同層次人員的需要，具有廣闊的市場前景和良好的經(jīng)濟(jì)、社會效益。
[0042]本試劑盒采用化學(xué)合成3B抗原肽包被反應(yīng)板，抗原用量少、靈敏性和特異性高，可以高效地鑒別口蹄疫易感動物豬是感染了病毒還是接受了疫苗免疫。同時可以根據(jù)結(jié)果進(jìn)行免疫效果的評價。本發(fā)明試劑盒特異性好、敏感、高效，具有良好的市場前景。
[0043]本發(fā)明所涉及的口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)診斷試劑盒用于口蹄疫易感動物豬疫苗免疫與病毒感染的鑒別診斷，有利于減少我國口蹄疫爆發(fā)所帶來的損失，也有利于我國口蹄疫防控體系的建立。
【具體實(shí)施方式】
[0044]下述實(shí)施例中的方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。
[0045]實(shí)施例1、口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒包被抗原制備
[0046]本發(fā)明采用生物信息學(xué)方法對非結(jié)構(gòu)蛋白的抗原表位進(jìn)行精確分析，從3B蛋白上的主要抗原表位上篩選出適合ELISA檢測用的肽段，即口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽，其序列如序列表中序列I所示。將該多肽作為本發(fā)明試劑盒的包被原制備口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。
[0047]本發(fā)明的包被抗原可使用Applied Biosystem全自動多肽合成儀(型號433A)制備。運(yùn)用 Merrifield 固相合成法，米用的是Fmoc (9_fIuorenylmethyloxycarbonyl, 9_荷甲氧羰基)修飾的氨基酸，使用Rink Amide MBHA樹脂做為固相載體。生產(chǎn)過程包括多肽抗原固相合成、多肽裂解和鑒定、抗原純化、冷凍干燥以及保存五部分。以下分別進(jìn)行說明:
[0048]一、包被抗原固相合成
[0049]1、合成試劑的準(zhǔn)備
[0050]合成包被抗原氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0051]依據(jù)包被抗原序列以及合成規(guī)模準(zhǔn)備合適的Fmoc修飾的氨基酸(購自NOVA公司)，加入至相應(yīng)的Cartridge中。同樣按要求合成規(guī)模稱取樹脂5g，放入反應(yīng)腔，將上下蓋子擰緊，貼標(biāo)簽，記錄所合成肽的名稱，批號，反應(yīng)腔的TARE及所稱樹脂的重量。將反應(yīng)腔裝入合成儀。配制適量的合成試劑包括100%的NMP、3%的AM (已酰咪唑)、35%的PIP(哌啶)、100%的MeOH (甲醇)等放置到相對應(yīng)的試劑瓶中。
[0052]2、合成儀狀態(tài)的檢測
[0053]檢查433A多肽合成儀器是否正常運(yùn)行，開機(jī)后，運(yùn)行Run Self Test程序，儀器自檢各項(xiàng)指標(biāo)是否正常。另外檢查氮?dú)馐欠癯渥?，系統(tǒng)表壓是否正常(433A正常表壓
10.2psi)。合成前應(yīng)對儀器的性能有所了解，所以要對每種合成試劑的流速進(jìn)行測定。433A合成儀:發(fā)送 Flow Ratel-18 到合成儀,選擇 Main Menu一Module Test一按 Prer 或 next找 Module A、ModuleD、Module1、Module1、Module A) 一按 Start—按 more 進(jìn)行測量或觀察，若流量不合適，則調(diào)節(jié)下閥門壓力，直至達(dá)到要求(具體檢測要求見下表1 )。
[0054]表1.多肽合成儀流速檢測標(biāo)準(zhǔn)表
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種多肽，為序列表中序列I所示。
2.—種口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，包括口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽包被的酶聯(lián)反應(yīng)板和酶標(biāo)記抗抗體；所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為序列表中序列I所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于:所述酶標(biāo)記抗抗體的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶；所述酶標(biāo)記抗抗體為酶標(biāo)記兔抗豬IgG，所述酶標(biāo)記抗抗體優(yōu)選為辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豬IgG多克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于:所述酶聯(lián)反應(yīng)板為可拆卸96孔酶標(biāo)板；所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽為化學(xué)人工合成得到。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于:所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽包被的酶聯(lián)反應(yīng)板的獲得方法是將所述口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3B抗原表位多肽溶于100 μ I的ρΗ9.4的碳酸鹽溶液，然后加到96孔聚苯乙烯酶聯(lián)反應(yīng)板，每孔50ng抗原，在37°C放置2-4小時，再4-8°C下放置8_12小時使多肽抗原與酶聯(lián)反應(yīng)板充分結(jié)合，然后按照300 μ I/孔加入含有l(wèi)g/100ml牛血清白蛋白pH7.4的PBS緩沖液，37°C封閉處理1-2小時，洗滌后甩干，待酶聯(lián)反應(yīng)板干燥后4°C密封保存。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒中還含有顯色液和終止液；當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時顯色液由顯色液A液和顯色液B液組成，所述顯色液A液為含0.2g/100ml過氧化氫尿素的檸檬酸磷酸鹽緩沖液,所述顯色液B液為0.2mg/ml的四甲基聯(lián)苯胺溶液；當(dāng)標(biāo)記酶為堿性磷酸酶時，顯色液為4-硝基酚磷酸鹽緩沖液；所述終止液為2mol/L的硫酸溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所`述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括陰性對照血清、陽性對照血清；所述陰性對照血清為無口蹄疫抗體的正常豬血清；所述陽性對照血清為以所述口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VPl抗原表位多肽為免疫原免疫豬得到的血清。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于:所述試劑盒還包括樣品稀釋液和濃縮洗滌液；樣品稀釋液為含有3g/100mlBSA的0.15M、PH為7.4的PBS緩沖液；所述濃縮洗滌液為0.15M，pH7.4，含有體積百分含量為0.5%的Tween-20的磷酸鹽緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于:所述口蹄疫病毒為豬O型口蹄疫病毒；具體可為豬口蹄疫0R/80病毒。
10.權(quán)利要求1所述的多肽或者權(quán)利要求2-9的試劑盒在制備檢測是否感染動物口蹄疫病毒病的試劑盒中的應(yīng)用；其中，動物口蹄疫病毒病為豬口蹄疫病毒病；具體為豬O型口蹄疫病毒引起的豬口蹄疫病毒病；更具體為豬口蹄疫0R/80病毒引起的豬口蹄疫病毒病。
【文檔編號】G01N33/68GK103864906SQ201410092728
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月13日
【發(fā)明者】肖進(jìn), 齊鵬, 董春娜, 王楠, 趙洪濤, 張蕾, 張欣, 張艷賓, 張君, 李鳳鳴, 鄭應(yīng)華 申請人:中牧實(shí)業(yè)股份有限公司