一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及多種具有抑菌效果的添加劑的檢測方法，特別涉及一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法。本發(fā)明采用快速超聲輔助萃取-固相萃取-離子色譜法（UAE-SPE-IC）同時(shí)檢測水產(chǎn)品中的丙酸鹽、檸檬酸和多聚磷酸鹽，通過快速超聲輔助萃取，大大提高了丙酸鹽、檸檬酸和多聚磷酸鹽的回收率，并結(jié)合C18小柱及OnguardΠAg前處理凈化柱，有效去除蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)及其水產(chǎn)品中高濃度氯離子的干擾，提高了實(shí)際檢測的靈敏度，且離子色譜法（IC）對電解系數(shù)較大的物質(zhì)尤其是陰離子具有較強(qiáng)的分離能力、可進(jìn)行不同價(jià)態(tài)分析、檢測限低等優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明適合水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽的定量測定及食品安全監(jiān)測。
【專利說明】—種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及多種抑菌性添加劑的檢測方法，特別涉及一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]丙酸及丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽是水產(chǎn)品保存和加工中常用的添加劑，均具有一定的抑菌作用。丙酸及丙酸鹽是我國近年來發(fā)展起來的一種新型食品防腐劑，具抗菌作用，比山梨酸弱，比乙酸強(qiáng)，可有效抑制食品中霉菌、好氣性芽孢桿菌、革蘭陰性菌等的生長繁殖，也可以抑制黃曲霉毒素的產(chǎn)生。丙酸及丙酸鹽是國家批準(zhǔn)使用的人工合成防腐齊U，但是其添加必須在規(guī)定范圍內(nèi)按規(guī)定限量使用，而且添加之后必須在食品標(biāo)簽上注明。因此對丙酸的快速準(zhǔn)確檢測方法的研究十分必要。目前，測定丙酸的檢測方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法和離子色譜法。我國現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)中采用氣相色譜法、高效液相色譜法，但需用到大量有機(jī)試劑，丙酸不穩(wěn)定，通常采用加入酸后蒸餾提取，前處理繁瑣。離子色譜法可采用直接浸泡體取，且所使用試劑對實(shí)驗(yàn)人員的健康危害小，靈敏度高，但是由于甲酸本身的性質(zhì)，檢測回收率不是很理想。
[0003]磷酸鹽可分為正磷酸鹽和縮聚磷酸鹽，目前，在水產(chǎn)加工中，多聚磷酸鹽主要是指焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽、三偏磷酸鹽。多聚磷酸鹽是一類性能優(yōu)異的保水劑和抗凍劑，被許多水產(chǎn)企業(yè)大量用于海產(chǎn)品特別是冷凍海產(chǎn)品的加工和保存過程中，用來提高海產(chǎn)品的有效持水能力，并有效延長海產(chǎn)品的貨架期，減少解凍后的流滴損失。同時(shí)，有研究證明多聚磷酸鹽對水產(chǎn)品中的微生物生長有抑制作用。近些年來，有一些不法商販利用了多聚磷酸鹽可以加大水產(chǎn)品吸水性、抑制微生物生長等特點(diǎn)，在商品中人為注水，以次充好，以少充多。但是，人體如過多地?cái)z入磷酸鹽，則會降低鈣吸收導(dǎo)致肌體鈣磷失衡，繼而引發(fā)疾病，因此各國對水產(chǎn)品中多聚磷酸鹽含量作了明確的限量要求。針對這種情況，許多不法經(jīng)營者采用各種措施，用不含磷酸鹽成分的添加劑代替多聚磷酸鹽，向水產(chǎn)品中人為注水，在提高利潤的同時(shí)損害消費(fèi)者利益，檸檬酸鹽即是這種無磷添加劑的主要成分，由于其具有較強(qiáng)的廣譜抗菌作用和穩(wěn)定性，與保濕劑等合用，可用于延緩水產(chǎn)品的腐敗，并能保持肉的持水性.但是檸檬酸的使用范圍是受到嚴(yán)格限制的，因此水產(chǎn)品中檸檬酸的定性與定量分析對食品營養(yǎng)的研究意義重大，而且在食品生產(chǎn)過程的質(zhì)量管理中也必不可少。
[0004]我國輸歐水產(chǎn)品曾多次被歐盟通報(bào)多聚磷酸鹽超標(biāo)問題，且其5g/kg的限量要求針對焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽的總和，既不包含正磷酸鹽的含量，因生物體中均含有一定量的正磷酸鹽，傳統(tǒng)方法中通過用雙氧水和硫酸將磷酸鹽的多聚體轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽，測定總磷含量對多聚磷酸鹽的含量進(jìn)行判定已不能滿足實(shí)際需求。目前我國還沒有現(xiàn)行的檢測水產(chǎn)品中多聚磷酸鹽含量的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。有一些科研工作者曾嘗試不同的前處理方法，對海產(chǎn)品進(jìn)行提取后用核磁共振法直接檢測多聚磷酸鹽，但由于設(shè)備昂貴，效果也不甚理想。因此目前還缺少一種適應(yīng)當(dāng)前食品安全控制要求的準(zhǔn)確度較高的檢測方法。
[0005]離子色譜法能較好的分離無機(jī)陰離子，且能對離子的不同形態(tài)進(jìn)行分析。近年來有文獻(xiàn)報(bào)道采用抑制型離子色譜-電導(dǎo)法對水產(chǎn)品中多聚磷酸鹽進(jìn)行分離和測定。另外有研究人員采用離子色譜法分析水產(chǎn)品、醬油中的包含丙酸在內(nèi)的有機(jī)酸。索德成等人采用高效液相色譜法對飼用酸化劑中丙酸和檸檬酸進(jìn)行了同時(shí)測定，但該法不能用于多聚磷酸鹽的測定。目前，關(guān)于丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的方法還未見報(bào)道。本文首次建立了一種堿液快速超聲輔助萃取-串聯(lián)式固相萃取-離子色譜法(UAE-SPE-1C)同時(shí)檢測水產(chǎn)品中的丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽的檢測方法，該法分離效果良好，靈敏度高，不需特殊試劑，在短時(shí)間內(nèi)即可同時(shí)完成水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽的定量分析，避免了樣品的重復(fù)處理和測定，大大提高了檢測效率，有效降低了檢測成本，加快進(jìn)出口水產(chǎn)品的通關(guān)速度。
[0006]國內(nèi)已經(jīng)在申報(bào)的相關(guān)的發(fā)明專利有申請?zhí)?01210014139.2、申請日2012-01-18公開的一種檢測酸腌菜中亞硝酸鹽、硝酸鹽的方法，但是這些方法實(shí)際檢測時(shí)靈敏度不高，對于同時(shí)檢測水產(chǎn)品中的硝酸鹽、亞硝酸鹽和多聚磷酸鹽快速檢測應(yīng)用難度較大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法，該方法定量分析結(jié)果可靠、檢測限低、適用于同時(shí)測定水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽(包括正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽)的快速檢測。
[0008]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:
[0009]一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法，該方法包括如下步驟:
[0010]a、樣品前處理:將待測的水產(chǎn)品樣品充分混勻并攪碎，裝入容器內(nèi)，密封、冷藏備用；
[0011]b、堿溶液快速超聲輔助提取:準(zhǔn)確稱取經(jīng)前處理的水產(chǎn)品樣品放于玻璃容器中，加入適量超純水制成均質(zhì)系統(tǒng)，加入堿溶液封蓋后超聲波提取；
[0012]C、蛋白質(zhì)沉淀:將超聲波提取后的樣品倒入離心管中，離心過濾，取濾液與三氟乙酸溶液混合，濾液與三氟乙酸溶液的體積比為20:3-4，0-4°C保存；
[0013]d、串聯(lián)式固相萃取:將蛋白質(zhì)沉淀后的樣品離心，過濾后對濾液采用C18柱和Onguard IIAg柱進(jìn)行串聯(lián)式固相萃取，將過柱液經(jīng)尼龍濾膜過濾后收集于5mL自動進(jìn)樣器樣品瓶中，供離子色譜儀測定；
[0014]e、三級梯度淋洗離子色譜分析；
[0015]f、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，取丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽配制成系列濃度，求出回歸方程與相關(guān)系數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線以確定被檢測樣品中丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽的含量。
[0016]本發(fā)明采用堿液快速超聲輔助萃取-串聯(lián)式固相萃取-離子色譜法(UAE-SPE-1C)同時(shí)檢測水產(chǎn)品中的丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽,通過堿液快速超聲輔助萃取，大大提高了丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽穩(wěn)定性和回收率，結(jié)合C18小柱及OnguardIIAg串聯(lián)式前處理凈化柱,有效去除蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)及其水產(chǎn)品中高濃度氯離子的干擾，利用離子色譜法(IC)對電解系數(shù)較大的物質(zhì)尤其是陰離子具有較強(qiáng)的分離能力、可進(jìn)行不同價(jià)態(tài)分析、檢測限低等優(yōu)點(diǎn)，對水產(chǎn)品中多種抑菌性添加劑進(jìn)行分離和測定，本發(fā)明適合水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽的定量檢測及食品安全監(jiān)測。
[0017]作為優(yōu)選，前處理中所用到的實(shí)驗(yàn)用水均為超純水，電阻率18.2ΜΩ.cm。離子色譜法對實(shí)驗(yàn)用水的要求較高，如超純水電阻率低，說明水中含有較多的離子，導(dǎo)致電導(dǎo)背景過高，并對檢測過程中待測物質(zhì)產(chǎn)生干擾，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0018]作為優(yōu)選，快速超聲輔助萃取的條件為:樣品經(jīng)均質(zhì)后，超聲波振蕩提取30min，每5min振搖一次，以保持固相完全分散。超聲波振蕩會加速待測離子溶解進(jìn)入提取液，因水產(chǎn)品為固體樣品且粘稠，長時(shí)間靜置會逐漸凝結(jié)成塊，影響提取效率，因此需每5min振搖一次，以保持固相完全分散。
[0019]作為優(yōu)選，加入的堿溶液是濃度為0.2mol/L NaOH溶液0.5mL，封蓋后超聲波提取。加入堿液使提取液偏堿液，增加丙酸的穩(wěn)定性，因丙酸在酸性條件下易揮發(fā)，多聚磷酸鹽在堿性條件下不易發(fā)生水解和轉(zhuǎn)換。
[0020]作為優(yōu)選，三氟乙酸溶液的體積濃度為20%。步驟c中沉淀劑采用三氟乙酸，通常采用20%的濃度，沉淀效果較好，若待測樣品蛋白質(zhì)含量較少，可適當(dāng)降低三氟乙酸濃度。三氟乙酸沉淀蛋白質(zhì)的效果較好，且氟離子對待測離子不產(chǎn)生干擾，氯離子與丙酸出峰較為接近，高濃度的氯離子會遮蓋丙酸根。因水產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量較高，因此，三氟乙酸濃度為20%,濃度過低，蛋白質(zhì)未完全沉淀,對色譜柱會造成污染。
[0021]作為優(yōu)選，SPE固相萃取C18柱上樣前，用5mL甲醇進(jìn)行活化后15mL高純水進(jìn)行清洗，流速小于3ml / min,樣品過柱時(shí)前處理柱保持垂直。C18柱使用前需進(jìn)行活化,流速過快，雜質(zhì)不易被填料吸附。
[0022]作為優(yōu)選，固相萃取OnguardnAg前處理凈化柱上樣前，用IOmL去離子水活化后，流速小于3ml / min,棄去前3ml,取中間液2?3ml,定容后上機(jī)檢測。OnguardnAg前處理凈化柱可有效去除氯離子，因氯離子與丙酸根出峰時(shí)間較為接近，而海水和海產(chǎn)品中氯離子含量較高，未避免過高的氯離子含量對待測物質(zhì)產(chǎn)生干擾，因此采用OnguardnAg前處理凈化柱，并需經(jīng)過活化，且流速不易過快。
[0023]作為優(yōu)選，步驟e中色譜條件為:色譜柱:分離柱=1nPac ASll 一 HC ;保護(hù)柱1nPacAGll — HC ;淋洗液:Κ0Η 溶液，流速 1.0mL/min ；AMMS-1CE300 (4mm)抑制器自動抑制模式，抑制電流200mA，抑制型電導(dǎo)檢測器檢測；柱溫:30.(TC ;進(jìn)樣量:30.0y L ;外接水模式；以保留時(shí)間定性，峰面積定量。1nPac ASll — HC主要用于分析常規(guī)陰離子及有機(jī)酸，并且其對多聚磷酸鹽的分離效果在常規(guī)離子色譜柱中最佳。采用KOH溶液作為淋洗液，有效降低背景電導(dǎo)，不易產(chǎn)生基線漂移；因三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽需在較高淋洗液濃度下才能分離，因此抑制電流設(shè)為200mA，有效降低背景電導(dǎo)。
[0024]作為優(yōu)選，步驟e中的淋洗液梯度程序具體為:0-10min內(nèi)，濃度為2.5mM/L,之后在0.5min內(nèi)將濃度升高至25mM/L保持4.5min, 15_25min之間將濃度從25mM/L升至55mM/L，保持7min，再在Imin內(nèi)將濃度調(diào)整并穩(wěn)定在25mM/L，保持2min，對色譜柱進(jìn)行沖洗，在35min時(shí)，結(jié)束整個(gè)檢測流程。丙酸與氯離子分離需采用較低濃度的淋洗液，當(dāng)淋洗液濃度過高，氯離子與丙酸同時(shí)出峰，且丙酸峰形不佳，而多聚磷酸鹽尤其是三聚和三偏磷酸鹽需在較高淋洗液濃度下才能分離，最后為減少整個(gè)檢測時(shí)間，采用中等濃度的淋洗液，對色譜柱進(jìn)行快速沖洗。因此需采用三級梯度淋洗可將丙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽及三種多聚磷酸鹽有效分離，且去除水產(chǎn)品中常見陰離子的干擾。
[0025]作為優(yōu)選，所述的步驟還包括回收率實(shí)驗(yàn)。
[0026]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0027]1、應(yīng)用范圍廣。本發(fā)明可加強(qiáng)水產(chǎn)品中抑菌性添加劑丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽的監(jiān)控，有利于水產(chǎn)品流通環(huán)節(jié)中產(chǎn)品質(zhì)量的監(jiān)控，減少水產(chǎn)品中添加劑過量使用對人體健康造成的危害，并為水產(chǎn)品中微生物的檢測提供參考，保障食品安全。
[0028]2、本發(fā)明采用了快速超聲輔助萃取(UAE)進(jìn)行提取，利用其空化效應(yīng)、強(qiáng)化擴(kuò)散等理化特性對目標(biāo)產(chǎn)物進(jìn)行提取，與傳統(tǒng)提取方法相比，具有快速、常溫、能耗低、提取率高等優(yōu)點(diǎn)。提高了提取效率，且經(jīng)濟(jì)環(huán)保。
[0029]3、本發(fā)明采用了堿液提取，增加了待測物質(zhì)丙酸的穩(wěn)定性、有效抑制了多聚磷酸鹽的水解，提高了待測物質(zhì)的提取效率。
[0030]4、本發(fā)明采用了 OnguardIIAg前處理凈化柱與C18柱串聯(lián)使用，不僅可有效去除Cl-，由于水產(chǎn)品中常含有較高濃度的Cl-，且出峰時(shí)間與丙酸根較為接近，該凈化柱可避免水產(chǎn)品中高濃度的Cl-對丙酸根出峰的影響，而且可除去水產(chǎn)品中較高含量的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。
[0031]5、本發(fā)明采用了離子色譜法對丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽進(jìn)行測定，該法是目前有效分離多種多聚磷酸鹽以及有機(jī)酸的首選方法，且能對不同價(jià)態(tài)的離子進(jìn)行分離。本方法中以水作為流動相，無需特殊試劑，對環(huán)境和人員健康不產(chǎn)生有害影響。
[0032]6、本發(fā)明采用了 KOH自動發(fā)生淋洗液裝置，采用三級梯度淋洗，可在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生準(zhǔn)確濃度的淋洗液，適合于進(jìn)行梯度淋洗，采用較低濃度的淋洗液可將丙酸與氯離子分離，多聚磷酸鹽尤其是三聚和三偏磷酸鹽需在較高淋洗液濃度下才能分離，因此梯度淋洗可將丙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽及三種多聚磷酸鹽有效分離，且去除水產(chǎn)品中常見陰離子的干擾。
[0033]7、本發(fā)明采用了快速超聲輔助萃取-固相萃取-離子色譜法(UAE-SPE-1C)檢測水產(chǎn)品中的丙酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽及三偏磷酸鹽，通過堿液提取，大大提高了回收率，并結(jié)合C18柱和OnguardnAg柱串聯(lián)式凈化，有效去除了其他物質(zhì)的干擾，提高了實(shí)際檢測的靈敏度，且通過梯度淋洗具有較強(qiáng)的分離能力、檢測限低等優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)的檢測方法相比，具有更好的利用價(jià)值。
[0034]8、儀器自動進(jìn)樣，適合大批量生物樣品的檢測。
[0035]9、本發(fā)明的方法實(shí)現(xiàn)了水產(chǎn)品中多種添加劑的同時(shí)檢測，有效降低了測試成本。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0036]圖1為丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖，其中1-丙酸鹽、2-正磷酸鹽、3-檸檬酸鹽、4-焦磷酸鹽、5-三聚磷酸鹽、6-三偏磷酸鹽；
[0037]圖2為丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽與常見陰離子色譜圖，其中l(wèi)-cr，2-丙酸根離子，3-Br_，4_F_，5_N03_，6_S042_，7_P043_，8-檸檬酸根尚子，9_P2074 , IO-P3O105 , Il-P3O93 ；
[0038]圖3為實(shí)施例1中空白樣品離子色譜圖，其中1-正磷酸根；
[0039]圖4為實(shí)施例1中樣品加標(biāo)離子色譜圖，其中1-丙酸鹽、2-正磷酸鹽、3-檸檬酸鹽、4-焦磷酸鹽、5-三聚磷酸鹽、6-三偏磷酸鹽；
[0040]圖5為實(shí)施例3中實(shí)際樣品測定離子色譜圖，其中1-正磷酸鹽、2-檸檬酸鹽、3-焦磷酸鹽、4-三聚磷酸鹽。
【具體實(shí)施方式】
[0041]下面通過具體實(shí)施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。
[0042]在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均可從市場購得或是本行業(yè)常用的。
[0043]實(shí)施例1離子色譜法同時(shí)測定蟹肉中丙酸鹽、檸檬酸和多聚磷酸鹽
[0044]1、樣品前處理:
[0045]將待測的蟹肉樣品充分混勻并攪碎，裝入容器內(nèi)，密封、冷藏(_18°C)備用；
[0046]2、快速超聲輔助萃取(UAE):
[0047]稱取經(jīng)組織搗碎后的樣品5g(精確到0.1g)于150mL錐形瓶中，加50mL去離子水，均質(zhì)后加入0.2mol/LNa0H溶液0.5mL,混勻置超聲波震蕩器中超聲30min,每5min振搖一次，以保持固相完全分散。然后以7000r/min離心10min，過濾，取濾液20mL，加3mL20%三氟乙酸溶液混合,放入0-4°C冰箱中保存30分鐘，再在8000rpm的離心機(jī)中離心10分鐘。
[0048]3、固相萃取(SPE):
[0049]取SPE固相萃取C18柱和OnguardIIAg柱,將兩者串聯(lián),先用5mL甲醇進(jìn)行活化后用15mL高純水進(jìn)行清洗,流速小于3mL / min。取步驟2中離心后的樣品,過濾后,將濾液以小于3mL / min的流速過垂直放置的SPE-Cli^P OnguardnAg串聯(lián)柱，棄去前3mL流出液，取流出液過OnguardIIAg柱,取0.5mL用去離子水定容至5mL,于自動進(jìn)樣器進(jìn)樣瓶中上機(jī)待測。
[0050]4、離子色譜分析:
[0051]離子色譜條件:分離柱:1nPac ASl 1-HC ;保護(hù)柱1nPac AG11-HC ;淋洗液:KOH溶液梯度淋洗，流速1.0mL/min ;抑制器:AMMS-1CE300 (4_)抑制器，自動抑制模式自動抑制模式，抑制電流200mA ;檢測器:抑制型電導(dǎo)檢測器；進(jìn)樣量:30μ L ;柱溫:
[0052]300C (樣品為步驟3得到的水溶液)；以保留時(shí)間定性，峰面積定量。
[0053]步驟e中的淋洗液梯度程序具體為:0-10min內(nèi)，濃度為2.5mM/L,之后在0.5min內(nèi)將濃度升高至25mM/L保持4.5min, 15_25min之間將濃度從25mM/L升至55mM/L，保持7min，再在Imin內(nèi)將濃度調(diào)整并穩(wěn)定在25mM/L，保持2min，對色譜柱進(jìn)行沖洗， [0054]在35min時(shí)，結(jié)束整個(gè)檢測流程。淋洗液梯度程序具體見表1。[0055]表1梯度洗脫程序
[0056]
【權(quán)利要求】
1.一種水產(chǎn)品中丙酸鹽、檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽同時(shí)測定的檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟: a、樣品前處理:將待測的水產(chǎn)品樣品充分混勻并攪碎，裝入容器內(nèi)，密封、冷藏備用； b、堿溶液快速超聲輔助提取:準(zhǔn)確稱取經(jīng)前處理的水產(chǎn)品樣品放于玻璃容器中，加入適量超純水制成均質(zhì)系統(tǒng)，加入堿溶液封蓋后超聲波提??； C、蛋白質(zhì)沉淀:將超聲波提取后的樣品倒入離心管中，離心過濾，取濾液與三氟乙酸溶液混合，濾液與三氟乙酸溶液的體積比為20:3-4，0-4°C保存； d、串聯(lián)式固相萃取:將蛋白質(zhì)沉淀后的樣品離心，過濾后對濾液采用C18柱和OnguardΠ Ag柱進(jìn)行串聯(lián)式固相萃取，將過柱液經(jīng)尼龍濾膜過濾后收集于5mL自動進(jìn)樣器樣品瓶中，供離子色譜儀測定； e、三級梯度淋洗離子色譜分析； f、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，取丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽配制成系列濃度，求出回歸方程與相關(guān)系數(shù)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線以確定被檢測樣品中丙酸鹽、檸檬酸鹽、正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于:步驟b中快速超聲輔助提取的條件為:樣品經(jīng)均質(zhì)后，超聲波振蕩提取30min,每5min振搖一次。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于:步驟b中加入的堿溶液是濃度為.0.2mol/L NaOH 溶液 0.5mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于:三氟乙酸溶液的體積濃度為.20%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測方法，其特征在于:固相萃取C18柱上樣前，用5mL甲醇進(jìn)行活化后15mL高純水進(jìn)行清洗，流速小于3mL / min，樣品過柱時(shí)前處理柱保持垂直；固相萃取Onguard Π Ag前處理凈化柱上樣前,用IOmL去離子水活化后,流速小于3ml /min,棄去前3 ml,取中間液2~3 ml,定容后上機(jī)檢測。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于:步驟e中色譜條件為:色譜柱:分離柱:1nPac ASll 一 HC ;保護(hù)柱 1nPac AGll 一 HC ;淋洗液:KOH 溶液，流速 1.0 mL/min ；AMMS-1CE 300 (4mm)抑制器自動抑制模式，抑制電流200 mA，抑制型電導(dǎo)檢測器檢測；柱溫:30.(TC ;進(jìn)樣量:30.0--L ;外接水模式；以保留時(shí)間定性，峰面積定量。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的檢測方法，其特征在于:步驟e中的淋洗液梯度程序具體為:O-1Omin內(nèi)，濃度為2.5mM/L，之后在0.5min內(nèi)將濃度升高至25mM/L保持4.5min,.15-25min之間將濃度從25mM/L升至55mM/L，保持7min，再在Imin內(nèi)將濃度調(diào)整并穩(wěn)定在.25mM/L，保持2min，對色譜柱進(jìn)行沖洗，在35min時(shí)，結(jié)束整個(gè)檢測流程。
【文檔編號】G01N30/02GK104007190SQ201410106935
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年3月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月21日
【發(fā)明者】邵宏宏, 周秀錦, 王 琦 申請人:舟山出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心