小兒碳酸鈣d3顆粒維生素d3含量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種適用于小兒碳酸鈣D3顆粒中維生素D3的檢測方法。包括：包括如下步驟：(1)精密稱取小兒碳酸鈣D3顆粒，置離心管中，用二甲基亞砜-水（10﹕2）混合溶液制成每1ml中含2,6-二叔丁基對甲酚0.2mg的溶液；(2)將步驟(1)所得溶液超聲，加入2,6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液，振搖，離心，分取上層溶液，作為供試品；(3)另取維生素D3對照品適量，精密稱定，用異辛烷溶液溶解并制成每1ml中約含1μg的溶液，同法測定；(4)按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量?？刹僮餍愿鼜?、準確度更高。
【專利說明】小兒碳酸鈣D3顆粒維生素D3含量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥品名為小兒碳酸鈣D3顆粒中維生素D3的檢測方法，屬于藥物分析【技術領域】。
【背景技術】
[0002]小兒碳酸鈣D3顆粒是一種兒童補鈣藥品，每袋含碳酸鈣0.75克(相當于鈣0.3克)，維生素D3100國際單位(2.5微克)；最早由美國安士制藥有限公司研發(fā)，于2009年生產上市，并于同年進口至國內分裝銷售，商品名“迪巧”，執(zhí)行標準為進口標準(標準號為JX20070088)。
[0003]進口標準中維生素D3含量測定項下的檢測方法如下:
[0004]色譜條件與系統適用性試驗:用氨基鍵合硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇(99:O為流動相，流速為每分鐘1.5ml，檢測波長為265nm。取維生素D3對照品溶液在60°C
水浴中加熱I小時(使產生前維生素D3),放冷,量取20 μ I,注入液相色譜儀,記錄色譜圖，維生素D3峰和前維生素D3峰的分離度均應大于5，理論板數按維生素D3峰計算應不低于5000，拖尾因子應不大于2.0。
[0005]測定法:取小兒碳酸鈣D3顆粒25袋內容物，精密稱定，計算每袋平均裝量，研細，精密稱取細粉適量(約相當于維生素D325 μ g)，置IOOml棕色量瓶中，加溶液[用二甲基亞砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6-二叔丁基對甲酹0.2mg的溶液]50ml,超聲15分鐘，保持超聲水浴溫度不超過30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的正己烷溶液25ml，振搖15分鐘后，離心5分鐘(4000rpm)，分取上層溶液，避光靜置I小時后得澄清溶液作為供試品溶液，精密量取100 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取維生素D3對照品適量，精密稱定，用0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的正己烷溶液溶解并制成每Iml中約含I μ g的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。
[0006]采用上述檢測方法的測定法處理樣品溶液時遇到如下問題:
[0007]1.離心機配套的離心管容積不足；
[0008]2.樣品溶液從棕色量瓶轉移至離心管時不能完全轉移，殘渣較多；
[0009]3.正己烷沸點僅為68.7°C，在室溫較高時容易揮發(fā)，存在較大的環(huán)境污染和安全問題；
[0010]4.離心后不能立即進樣還需要靜置I小時。

【發(fā)明內容】

[0011]本發(fā)明的目的是提供一種可操作性更強、準確度更高的測定法，用于檢測小兒碳酸鈣D3顆粒中的維生素D3含量。
[0012]發(fā)明人對現有測定法進行如下改進:1.根據實際條件進行調整樣品取樣量和溶劑用量；2.棕色量瓶改為離心管(離心管材質為聚四氟乙烯或其他惰性材質)；3.正己烷改為異辛烷(沸點高達99.3°C) ；4.延長離心時間，離心后無需靜置。[0013]本發(fā)明對小兒碳酸鈣D3顆粒中維生素D3含量的測定法如下:(I)精密稱取小兒碳酸鈣D3顆粒，置離心管中，用二甲基亞砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6-二叔丁基對甲酚0.2mg的溶液；(2)將步驟(I)所得溶液超聲15min，加入0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液，振搖，離心，分取上層溶液，作為供試品；(3)另取維生素D3對照品適量，精密稱定，用0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶解并制成每Iml中約含I μ g的溶液，同法測定；(4)按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。
[0014]具體實施步驟:取小兒碳酸鈣D3顆粒20袋內容物，精密稱定，計算每袋平均裝量，研細，精密稱取細粉適量(約相當于維生素D310yg)，置50ml離心管(離心管材質為聚四氟乙烯或其他惰性材質)中，加溶液[用二甲基亞砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基對甲酚0.2mg的溶液]20ml，超聲15分鐘，保持超聲水浴溫度不超過30°C，精密加入0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液10ml，振搖15分鐘后，離心10分鐘(4000rpm)，無需靜置直接分取上層溶液，作為供試品溶液，精密量取100 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取維生素D3對照品適量，精密稱定，用0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶解并制成每Iml中約含I μ g的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。
[0015]1.色譜條件與系統適用性試驗:用氨基鍵合硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇(99: I)為流動相，流速為每分鐘1.5ml，檢測波長為265nm。取維生素D3對照品溶液在60°C水浴中加熱I小時(使產生前維生素D3)，放冷，量取20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，維生素D3峰和前維生素D3峰的分離度均應大于5，理論板數按維生素D3峰計算應不低于5000，拖尾因子應不大于2.0。
[0016]2.供試品溶液的制備:取小兒碳酸鈣D3顆粒20袋內容物，精密稱定，計算每袋平均裝量，研細，精密稱取細粉適量(約相當于維生素D310yg)，置50ml離心管(離心管材質為聚四氟乙烯或其他惰性材質)中，加溶液[用二甲基亞砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基對甲酚0.2mg的溶液]20ml，超聲15分鐘，保持超聲水浴溫度不超過30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液10ml，振搖15分鐘后，離心10分鐘(4000rpm),無需靜置直接分取上層溶液。
[0017]3.對照品溶液:取維生素D3對照品適量，精密稱定，用0.02%2，6_ 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶解并制成每Iml中約含I μ g的溶液。
[0018]4.測定:用氨基鍵合硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇(99:1)為流動相，流速為每分鐘1.5ml，檢測波長為265nm。分別精密量取上述對照品溶液和供試品溶液各100 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。
【具體實施方式】
[0019]下面通過一個具體的實例來進一步具體說明本發(fā)明。
[0020]樣品制備及檢測操作具體步驟如下:
[0021]1.流動相的制備:取色譜純的正己烷1000ml、異丙醇500ml分別用微孔濾膜濾過。
[0022]2.溶劑的制備:
[0023]二甲基亞砜-水混合溶液:取色譜純的二甲基亞砜500ml，純化水100ml，置同燒杯中混勻，加入分析純的2，6- 二叔丁基對甲酚120mg使溶解。
[0024]0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶:取色譜純的異辛烷100ml，加入分析純的2，6- 二叔丁基對甲酚20mg使溶解。
[0025]3.對照品溶液的制備:取維生素D3對照品10mg，精密稱定，置100mL量瓶中，用0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶解；再精密量取1ml，置100mL量瓶中，用
0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液稀釋至刻度，制成每1ml中約含I μ g的溶液。
[0026]4.系統適用性試驗溶液的制備:取少量對照品溶液在60°C水浴中加熱I小時(使產生前維生素D3)，放冷。
[0027]5.供試品溶液的制備:取小兒碳酸鈣D3顆粒20袋內容物，精密稱定，計算每袋平均裝量，研細，精密稱取細粉4g (約相當于維生素D310y g)，置50ml離心管中，加二甲基亞砜-水混合溶液20ml，超聲15分鐘，保持超聲水浴溫度不超過30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液10ml，振搖15分鐘后，離心10分鐘(4000rpm)，無需靜置直接分取上層溶液。
[0028]6.系統適用性試驗:用氨基鍵合硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇(99: I)為流動相，流速為每分鐘1.5ml，檢測波長為265nm。量取系統適用性試驗溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，維生素D3峰和前維生素D3峰的分離度均應大于5，理論板數按維生素D3峰計算應不低于5000，拖尾因子應不大于2.0。
[0029]7.供試品中維生素D3含量的測定:分別精密量取上述對照品溶液和供試品溶液各?οομ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。計算公式如下:`[0030]
【權利要求】
1.小兒碳酸鈣D3顆粒中維生素D3的檢測方法，其特征在于包括如下步驟: (1)精密稱取小兒碳酸鈣D3顆粒，置離心管中，用二甲基亞砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基對甲酹0.2mg的溶液； (2)將步驟(I)所得溶液超聲15min，加入0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液，振搖，離心，分取上層溶液，作為供試品； (3)另取維生素D3對照品適量，精密稱定，用0.02%2，6-二叔丁基對甲酚的異辛烷溶液溶解并制成每Iml中約含Iyg的溶液，同法測定； (4)按外標法以峰面積計算，計算結果乘以1.09即得維生素D3含量。
【文檔編號】G01N30/02GK103869024SQ201410135528
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年4月4日 優(yōu)先權日:2014年4月4日
【發(fā)明者】王超志, 涂濤 申請人:貴州聯盛藥業(yè)有限公司