一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法，其中，包括：試劑一，按質(zhì)量體積比，其為包含1.5%~2%聚乙二醇的磷酸鹽緩沖液，試劑一的pH值為7.38~7.42；試劑二，按質(zhì)量體積比，其為濃度為0.02%~0.04%的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒；無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品；按體積比，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.5：1~3：1。本發(fā)明的試劑盒以及檢測(cè)方法建立在抗原抗體結(jié)合的基礎(chǔ)上，通過(guò)無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體與乳膠偶聯(lián)，并調(diào)節(jié)試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中的添加比例，實(shí)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌快速、高靈敏度的檢測(cè)，本發(fā)明操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果易于判斷，無(wú)人為誤差因素的影響。
【專利說(shuō)明】一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物檢測(cè)試劑領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]無(wú)乳鏈球菌，又被稱為B群鏈球菌，通常定殖在健康成人的腸道和尿道以及健康女性的生殖道。無(wú)乳鏈球菌是引起新生兒敗血癥和腦膜炎，以及引起產(chǎn)后感染的主要病原菌。非孕期成年人在免疫力低下或應(yīng)用抗生素時(shí)，易引起生殖道微生態(tài)失調(diào)，導(dǎo)致感染的發(fā)生，更可通過(guò)垂直傳播或上行感染引起新生兒敗血癥和腦膜炎。
[0003]新生兒的無(wú)乳鏈球菌感染臨床進(jìn)展迅速，具有發(fā)病迅速、病死率高的特點(diǎn)，是新生兒的主要死亡原因，已引起世界范圍內(nèi)廣大學(xué)者的深切關(guān)注。細(xì)菌培養(yǎng)是檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的標(biāo)準(zhǔn)方法，但無(wú)乳鏈球菌營(yíng)養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)鑒定耗時(shí)較長(zhǎng)(至少3天)且陽(yáng)性率較低。如何在感染早期快速、準(zhǔn)確、靈敏地檢測(cè)B群鏈球菌成為研究的熱點(diǎn)。
[0004]無(wú)乳鏈球菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)、血清學(xué)方法檢測(cè)和分子生物學(xué)方法檢測(cè)。細(xì)菌培養(yǎng)耗時(shí)長(zhǎng)，陽(yáng)性率低，對(duì)無(wú)乳鏈球菌感染早期快速篩查有一定的局限性；血清學(xué)檢測(cè)方法方便、快捷，但不能完全排除假陰性結(jié)果；分子生物學(xué)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)條件要求高，容易受到種種檢測(cè)條件的影響，難以普及推廣。
[0005]因此，現(xiàn)有技術(shù)還有待于改進(jìn)和發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法，旨在解決現(xiàn)有的檢測(cè)方法耗時(shí)長(zhǎng)、陽(yáng)性率低、條件高、易受人為誤差因素影響的問題。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其中，包括:
試劑一，按質(zhì)量體積比，其為包含1.5%~2%聚乙二醇的磷酸鹽緩沖液，試劑一的pH值為7.38^7.42 ；
試劑二，按質(zhì)量體積比，其為濃度為0.02%~0.04%的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒；
無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品；
按體積比，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.5:1-3:1。
[0008]所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其中，按質(zhì)量體積比，所述的磷酸鹽緩沖液含2%聚乙二醇。
[0009]所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其中，所述的試劑一，其pH值為7.42。
[0010]所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其中，還包括一對(duì)照用無(wú)乳鏈球菌異常血清。
[0011]所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其中，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比率為3: 1。
[0012]一種應(yīng)用如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒的檢測(cè)方法，其中，包括步驟:
A、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于36.5 V~37.5°C孵育3~5min,然后加入試劑二，置于36.5°C ^37.5°C孵育，使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 5~15秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度AO，3飛分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al,得出Δ A試驗(yàn)品=Al-AO ；
B、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度Sia計(jì)算無(wú)乳鏈球囷試驗(yàn)品濃度S驗(yàn)；計(jì)算公式為:Stl^= S標(biāo)準(zhǔn)X ΔΑ試驗(yàn)品/ Δ A標(biāo)準(zhǔn)。
[0013]所述的檢測(cè)方法,其中，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在10ng/ml至300ng/ml。
[0014]有益效果:本發(fā)明的試劑盒以及檢測(cè)方法建立在抗原抗體結(jié)合的基礎(chǔ)上，通過(guò)無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體與乳膠偶聯(lián)，并調(diào)節(jié)試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中的添加比例，實(shí)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌快速、高靈敏度的檢測(cè)，本發(fā)明操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果易于判斷，無(wú)人為誤差因素的影響。
具體實(shí)施 方式
[0015]本發(fā)明提供一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒及其檢測(cè)方法，為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及效果更加清楚、明確，以下對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0016]本發(fā)明所提供的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其包括:
試劑一，按質(zhì)量體積比，其為包含1.5%~2%聚乙二醇的磷酸鹽緩沖液，試劑一的pH值為
7.38^7.42 ；
試劑二，按質(zhì)量體積比，其為濃度為0.02%~0.04%的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒；
無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品；
試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.5:1~3:1。
[0017]其中，上述質(zhì)量體積比為w/v，即指100mL中含有多少g，例如試劑一中，100mL磷酸緩沖液中含有1.5~2g聚乙二醇。較佳的是，所述的磷酸鹽緩沖液含2%聚乙二醇。
[0018]其中的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品是指已知570nm處吸光度以及濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。
[0019]優(yōu)選的，所述的磷酸鹽緩沖液，其pH值為7.42。
[0020]試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比率優(yōu)選為3: 1，通過(guò)優(yōu)化其加入比例，實(shí)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌快速、高靈敏度檢測(cè)。
[0021]進(jìn)一步，所述試劑盒還包括一對(duì)照用無(wú)乳鏈球菌異常血清，此對(duì)照用無(wú)乳鏈球菌異常血清可用于檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度的準(zhǔn)確性，以對(duì)試驗(yàn)品進(jìn)行質(zhì)量控制。
[0022]基于上述試劑盒，本發(fā)明還提供一種應(yīng)用如上所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒的檢測(cè)方法，其包括步驟: 51、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品(即需檢測(cè)濃度的樣本)，置于36.50C?37.5°C孵育3?5min,然后加入試劑二,置于36.5V "37.5°C孵育,使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 5?15秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度A0，3飛分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al，得出Λ A試驗(yàn)品=Al-AO ；
52、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度ΛA和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度S計(jì)算無(wú)乳鏈球囷試驗(yàn)品濃度S驗(yàn)；計(jì)算公式為:Sti9s= S標(biāo)準(zhǔn)X Δ Ati9AB / Δ A標(biāo)準(zhǔn)。
[0023]較佳的，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在10ng/ml至300ng/ml。
[0024]本發(fā)明通過(guò)乳膠偶聯(lián)鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體，制成鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒，可提高免疫比濁反應(yīng)的靈敏度，對(duì)試劑一的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行優(yōu)化，從而提供合適的抗原抗體反應(yīng)PH環(huán)境，促進(jìn)抗原抗體結(jié)合速率，并在試劑一中加入合適濃度的增濁劑聚乙二醇，提高了抗原抗體的反應(yīng)濁度。通過(guò)對(duì)上述反應(yīng)條件的建立及優(yōu)化，使本發(fā)明能夠高靈敏、快速檢測(cè)樣本中的無(wú)乳鏈球菌。
[0025]下面提供具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體說(shuō)明。
[0026]實(shí)施例一
S1、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于37°C孵育3分鐘,然后加入試劑二,置于37°C孵育，使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 10秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度AO’ 3分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al，得出Λ A試驗(yàn)品=Al-AO ；
例如在300微升試劑一(含2%聚乙二醇的pH值為7.42的磷酸鹽緩沖液)中加入10微升的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于37°C孵育3min，加入100微升試劑二(鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒)，10秒后讀取吸光度A0，3分鐘后，讀取吸光度Al，Λ A試驗(yàn)品=Al-AO(下述實(shí)施例方法相同)。
[0027]S2、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度Λ Aigm和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度計(jì)算無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度;公式為:無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度Sa9i= SimX AkimpJAk
標(biāo)準(zhǔn)；
其中，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在10ng/ml ;按體積比,試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為3:1 ;所述的試劑一，其pH值為7.42 ;按質(zhì)量體積比，磷酸鹽緩沖液中含有2%聚乙二醇；按質(zhì)量體積比，鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒濃度為0.02%。
[0028]實(shí)施例二
51、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于36.5°C孵育5分鐘,然后加入試劑二,置于37.5°C孵育，使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 5秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度AO’ 5分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al，得出Λ A試驗(yàn)品=Al-AO ；
52、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度ΛA和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度S計(jì)算無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度S試驗(yàn)；公式為:無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度Sm= S標(biāo)準(zhǔn)X Δ Aii驗(yàn)品/ Λ A標(biāo)
準(zhǔn)； 其中，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在150ng/ml ;按體積比,試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.5:1 ;所述的試劑一，其pH值為7.38 ;按質(zhì)量體積比，磷酸鹽緩沖液中含有1.8%聚乙二醇；按質(zhì)量體積比，鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒濃度為0.03%。
[0029]實(shí)施例三
51、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于37.5°C孵育4分鐘,然后加入試劑二,置于36.5°C孵育,使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 15秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度A0，4分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al，得出Λ A試驗(yàn)品=Al-AO ；
52、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度ΛA和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度S計(jì)算無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度S試驗(yàn)；公式為:無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度Sm= S標(biāo)準(zhǔn)X Δ Aii驗(yàn)品/ Λ A標(biāo)
準(zhǔn)；
其中，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在300ng/ml ;按體積比，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.8:1 ;所述的試劑一，其pH值為7.40 ;按質(zhì)量體積比，磷酸鹽緩沖液中含有1.5%聚乙二醇；按質(zhì)量體積比，鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒濃度為0.04%。
[0030]通過(guò)對(duì)上述實(shí)施例分析可知，本發(fā)明的無(wú)乳鏈球菌檢測(cè)方法，具有快速、高靈敏度的特點(diǎn)，并且操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果易于判斷，無(wú)人為誤差因素的影響。
[0031]制作規(guī)格可以按照如下方式，每個(gè)檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒包括:
1、試劑I一瓶30ml (即試劑一)
2、試劑2—瓶IOml (即試劑二)
3、無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品五瓶0.5ml/瓶
4、無(wú)乳鏈球菌質(zhì)控一瓶0.2ml (對(duì)照用無(wú)乳鏈球菌異常血清)
5、一份使用說(shuō)明書。
[0032]綜上所述，本發(fā)明的試劑盒以及檢測(cè)方法建立在抗原抗體結(jié)合的基礎(chǔ)上，通過(guò)無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體與乳膠偶聯(lián)，并調(diào)整試劑一與試劑二的反應(yīng)體系比例，實(shí)現(xiàn)無(wú)乳鏈球菌快速、高靈敏度的檢測(cè)，本發(fā)明操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果易于判斷，無(wú)人為誤差因素的影響。
[0033]應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的應(yīng)用不限于上述的舉例，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，可以根據(jù)上述說(shuō)明加以改進(jìn)或變換，所有這些改進(jìn)和變換都應(yīng)屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其特征在于，包括: 試劑一，按質(zhì)量體積比，其為包含1.5%~2%聚乙二醇的磷酸鹽緩沖液，試劑一的pH值為7.38^7.42 ； 試劑二，按質(zhì)量體積比，其為濃度為0.02%~0.04%的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒； 無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品； 按體積比，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比例為2.5:1~3:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其特征在于，按質(zhì)量體積比，所述的磷酸鹽緩沖液含2%聚乙二醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其特征在于，所述的試劑一，其PH值為7.42。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其特征在于，還包括一對(duì)照用無(wú)乳鏈球菌異常血清。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒，其特征在于，試劑一與試劑二在反應(yīng)體系中加入比率為3:1。
6.一種應(yīng)用如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)無(wú)乳鏈球菌的免疫比濁法試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于，包括步驟: A、在試劑一中加入無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品，置于36.5 V~37.5°C孵育3~5min,然后加入試劑二，置于36.5°C ^37.5°C孵育，使無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品中的無(wú)乳鏈球菌抗原與試劑二中的鼠抗人無(wú)乳鏈球菌單克隆抗體膠乳顆粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，加入試劑二 5~15秒后，通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度AO，3飛分鐘后，再次通過(guò)分光光度計(jì)在570nm處讀取吸光度Al,得出Δ A試驗(yàn)品=Al-AO ； B、通過(guò)已知的無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品吸光度和無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)品濃度Sia計(jì)算無(wú)乳鏈球囷試驗(yàn)品濃度S驗(yàn)；計(jì)算公式為:Stl^= S標(biāo)準(zhǔn)X ΔΑ試驗(yàn)品/ Δ A標(biāo)準(zhǔn)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的無(wú)乳鏈球菌試驗(yàn)品濃度在10ng/ml 至 300ng/ml。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK103901204SQ201410145157
【公開日】2014年7月2日 申請(qǐng)日期:2014年4月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月11日
【發(fā)明者】馬東禮, 張會(huì)生 申請(qǐng)人:深圳市兒童醫(yī)院