一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法。包括以下步驟：（1）枸杞提取液的預(yù)處理；（2）還原糖和總糖供試液的制備；（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備；（4）還原糖和總糖供試液參比溶液的制備；（5）測定還原糖和總糖供試品溶液的吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算多糖含量。本發(fā)明采用醋酸鉛對枸杞提取液進行預(yù)處理，脫蛋白后的溶液透明澄清，適合光度法測定；同時，參比溶液的制備方法既扣除了顯色劑的吸收，也消除了枸杞色素的影響。本發(fā)明的測定方法不需要脫除還原糖，也無需制備成固體粗多糖再測定，解決了苯酚-硫酸法易受還原糖影響的問題，提高了操作的安全性。本發(fā)明的方法快速、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性良好，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
【專利說明】一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥及其提取物的化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]枸杞中的主要生物活性物質(zhì)之一是枸杞多糖。枸杞多糖含量的測定對于枸杞多糖的提取工藝具有十分重要的指導(dǎo)意義。目前，常用的多糖測定方法主要有色譜法和比色法。色譜法的成本較高。而且由于糖類本身沒有足夠的揮發(fā)性，一般需將其轉(zhuǎn)化為揮發(fā)性衍生物才能進行，使得操作步驟繁雜。比色法的成本相對較低、比較實用，適合作為提取工藝過程的質(zhì)量控制方法。因此，國標(biāo)法測定枸杞中多糖含量采用的是苯酚-硫酸法(中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB/T18672-2002枸杞(枸杞子).北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002.)，其原理為:多糖在濃硫酸水合產(chǎn)生的高溫下迅速水解，產(chǎn)生的單糖在強酸條件下與苯酚反應(yīng)生成有色的衍生物。查閱文獻可知，該方法的應(yīng)用對象主要有兩大類:第一類是脫除還原糖后的水提液(高洪霞，劉軍海，李廣錄.枸杞多糖提取工藝的研究.食品與機械，2008，24(5):60-62, 72.)，缺點是脫除還原糖的步驟耗時較長，而還原糖如果脫除不徹底會導(dǎo)致測定結(jié)果偏高；第二類是固體粗多糖(黃文書，楊海燕，李煥榮等.枸杞多糖的脫色工藝.食品研究與開發(fā)，2008, 29(3):95-98)，缺點是粗多糖的制備需要更長的測定周期，而且測定時需要重新溶解粗多糖，可能會因為粗多糖純度不夠產(chǎn)生渾濁，從而影響光度測定。同時，苯酚-硫酸法還存在一些問題，如苯酚需要重蒸、濃硫酸腐蝕性強，對操作者和設(shè)備有潛在的危險，而且操作方式的不同常導(dǎo)致測定結(jié)果的重現(xiàn)性較差，甚至?xí)斐啥嗵翘蓟痊F(xiàn)象。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是針對目前枸杞多糖含量測定方法所存在的不足，提供一種準(zhǔn)確、快速地測定枸杞提取液中的多糖含量的方法。本發(fā)明的測定方法特別適合直接測定以水為溶媒的各種提取工藝得到的枸杞提取液中的多糖，也適合測定枸杞粗多糖固體溶解后的水溶液。
[0004]本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0005]一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法，包括以下步驟:
[0006]( I)枸杞提取液的預(yù)處理:
[0007]準(zhǔn)確吸取V mL的枸杞多糖提取液，加入Pb(Ac)2溶液除蛋白，至沉淀完全為止，力口入Na2SO4溶液除鉛,定容至50mL ;過濾后定容至100mL。
[0008](2)供試液的制備:
[0009]a.準(zhǔn)確吸取步驟(I)獲得的溶液20mL，定容至50mL，得還原糖供試液；
[0010]b.準(zhǔn)確吸取步驟(I)獲得的溶液20mL，加入IOmL (1+1)的鹽酸，水解充分后滴加酚酞指示劑，用NaOH溶液調(diào)至中性，定容，得總糖供試液。[0011](3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:
[0012]a.配制lmg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和4mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0013]b.以3，5- 二硝基水楊酸、氫氧化鈉和丙三醇為原料制備DNS顯色劑；
[0014]c.分別取 lmg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、
2.0mL,再分別取4mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL,依次加入不同體積的水，保持水和葡萄糖的總體積為2.0mL,再依次分別加入3.0mL DNS顯色劑，沸水浴5min后取出，冷卻，定容至25mL，用光程為Icm的比色皿，以試劑空白溶液為參比在540nm處測定各標(biāo)準(zhǔn)待測液的吸光度值，以葡萄糖的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0015](4)枸杞提取液中多糖含量的測定和計算
[0016]a.還原糖供試液的參比液的制備:取一只25mL比色管，分別加1.0mL水和3.0mLDNS顯色劑，沸水浴中加熱5min后，流水冷卻，再加入按照(2)中步驟制備的還原糖供試液
1.0mL，定容至25mL，即可得到還原糖供試液的參比液；
[0017]b.總糖供試液的參比液的制備:取一只25mL比色管，分別加1.0mL水和3.0mLDNS顯色劑，沸水浴中加熱5min后，流水冷卻，再加入按照(2)中步驟制備的總糖供試液
1.0mL，定容至25mL，即可得總糖供試液的參比液；
[0018]c.測定供試液中的還原糖濃度:取一只25mL比色管，分別加入1.0mL水和3.0mLDNS顯色劑，再加入1.0mL還原糖供試液，沸水浴5min后流水冷卻，定容至25mL ;用光程為Icm的比色皿，以還原糖供試液的參比液做參比在540nm處進行測定,測得Aagft,查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到還原糖濃度；
[0019]d.測定供試液中的總糖濃度:取一只25mL比色管，分別加入1.0mL水和3.0mLDNS顯色劑，再加入1.0mL總糖供試液，沸水浴5min后流水冷卻，定容至25mL ;用光程為Icm的比色皿，以總糖供試液的參比液做參比在540nm處進行測定，測得，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到總糖濃度(c,_)；
[0020]e.枸杞提取液中多糖含量的計算:供試液中總糖濃度和還原糖濃度相減可得到多糖濃度，枸杞提取液中的多糖含量計算公式如下:
[0021]
【權(quán)利要求】
1.一種測定枸杞提取液中多糖含量的方法，其特征在于包括以下步驟:(1).枸杞提取液的預(yù)處理: 準(zhǔn)確吸取V mL的枸杞多糖提取液，加入Pb(Ac)2溶液除蛋白，至沉淀完全為止，加入Na2SO4溶液除鉛，定容至50mL ;過濾后定容至1OOmL ；(2).供試液的制備: a.吸取步驟(1).獲得的溶液20mL，定容至50mL，得還原糖供試液；b.吸取步驟(1).獲得的溶液20mL，加入1OmL(1+1)的鹽酸，水解充分后滴加酚酞指示劑，用NaOH溶液調(diào)至中性，定容至50mL，得總糖供試液；(3).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:a.配制lmg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和4mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；b.以3，5-二硝基水楊酸、氫氧化鈉和丙三醇為原料制備DNS顯色劑； c.分別取lmg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1,0.2,0.4,0.6,0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、.2.0mL,再分別取4mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL,依次加入不同體積的水，保持水和葡萄糖的總體積為2.0mL,再依次分別加入3.0mL DNS顯色劑，沸水浴5min后取出，冷卻，定容至25mL，用光程為Icm的比色皿，以試劑空白溶液為參比在540nm處測定各標(biāo)準(zhǔn)待測液的吸光度值，以葡萄糖的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4).枸杞提取液中多糖含量的測定和計算a.還原糖供試液的參比液的制備:取一只25mL比色管，分別加1.0mL水和3.0mL DNS顯色劑，沸水浴中加熱5min后，流水冷卻，再加入按照(2)中步驟制備的還原糖供試液.1.0mL，定容至25mL，即可得到還原糖供試液的參比液；b.總糖供試液的參比液的制備:取一只25mL比色管，分別加1.0mL水和3.0mL DNS顯色劑，沸水浴中加熱5min后，流水冷卻，再加入按照(2)中步驟制備的總糖供試液1.0mL,定容至25mL，即可得總糖供試液的參比液；c.測定供試液中的還原糖濃度:取一只25mL比色管，分別加入1.0mL水和3.0mL DNS顯色劑，再加入1.0mL還原糖供試液,沸水浴5min后流水冷卻，定容至25mL ;用光程為Icm的比色皿，以還原糖供試液的參比液做參比在540nm處進行測定，測得查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到還原糖濃度(C還原糖） ; d.測定供試液中的總糖濃度:取一只25mL比色管，分別加入1.0mL水和3.0mL DNS顯色劑，再加入1.0mL總糖供試液,沸水浴5min后流水冷卻，定容至25mL ;用光程為1cm的比色皿，以總糖供試液的參比液做參比在540nm處進行測定，測得A總糖，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得到總糖濃度(c總糖)； e.枸杞提取液中多糖含量的計算:供試液中總糖濃度和還原糖濃度相減可得到多糖濃度，枸杞提取液中的多糖含量計算公式如下:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定枸杞提取液中多糖含量的方法，其特征在于:步驟(1)中所述的Pb (Ac) 2溶液為20%Pb (Ac) 2溶液，所述的Na2SO4溶液為10%Na2S04溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定枸杞提取液中多糖含量的方法，其特征在于:步驟(2)中所述的水解的條件為80°C水浴里水解15min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定枸杞提取液中多糖含量的方法，其特征在于:步驟(2)中所述的NaOH溶液為30%Na0H溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定枸杞提取液中多糖含量的方法，其特征在于:步驟(3)中所述的DNS顯色劑的制備具體為:稱取6.5g的3，5- 二硝基水楊酸溶于少量熱去離子水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液325mL，再加入45g丙三醇，搖勻，冷卻后定容至1000mL,貯于棕色瓶中，得到DNS顯色劑。
【文檔編號】G01N21/31GK103884667SQ201410158074
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月18日
【發(fā)明者】趙春玲, 樊曉輝, 王曉曉, 劉騰子, 萬端極 申請人:湖北工業(yè)大學(xué)