一種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚a分析的前處理方法
【專利摘要】一種用于生物暴露染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法，涉及生物樣品中有機(jī)污染物的檢測分析技術(shù)，可為生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定提供前處理技術(shù)。生物暴露染毒后糞便樣品冷凍干燥后，加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷溶劑，經(jīng)超聲波清洗儀超聲提取三次，取一定量提取液稀釋后經(jīng)Li-SI固相萃取小柱富集凈化。處理后樣品經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，表明方法具有凈化效果好，操作簡單，回收率較高的優(yōu)點，通過稀釋的方法降低基質(zhì)干擾，使得該前處理方法特別適用于生物暴露染毒糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定的前處理過程。
【專利說明】—種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物樣品中有機(jī)污染物的檢測分析技術(shù)，特別是涉及分析一種生物暴露染毒后所得糞便樣品中四溴雙酚A含量的樣品提取、凈化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，四溴雙酚A作為使用量巨大的溴系阻燃劑之一被廣泛應(yīng)用于家用電器和日常用品中，如計算機(jī)、打印機(jī)、手機(jī)、電視機(jī)、洗衣機(jī)等電子產(chǎn)品以及紡織品、泡沫家具、建筑材料等。根據(jù)歐洲溴科學(xué)和環(huán)境論壇(Brominated Science and Environmental Forum,BSEF)報告，除約旦、以色列、美國、日本等，我國也是四溴雙酚A主要生產(chǎn)國。由于相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)規(guī)模的不斷增長、含四溴雙酚A電子廢棄物的不斷增加，以及可釋放到環(huán)境中四溴雙酚A數(shù)量的增加，使得人們開始關(guān)注四溴雙酚A潛在的環(huán)境污染問題和對人體健康的影響。
[0003]調(diào)查顯示，由于四溴雙酚A使用廣泛，世界上很多國家和地區(qū)的土壤、沉積物、水體和大氣等多種環(huán)境介質(zhì)以及生物樣品中均檢測到四溴雙酚A的賦存，且含量較高。由于頻繁在環(huán)境介質(zhì)及生物介質(zhì)中檢測出四溴雙酚A，使得公眾對四溴雙酚A的生物毒性倍加關(guān)注。目前研究發(fā)現(xiàn)四溴雙酚A及其代謝產(chǎn)物在生物體反復(fù)暴露的情況下具有潛在的生物蓄積性，及細(xì)胞、免疫和內(nèi)分泌干擾等生物毒性。近年來，四溴雙酚A被認(rèn)為是一種值得探討和關(guān)注的潛在內(nèi)分泌干擾物，也有研究認(rèn)為四溴雙酚A具有潛在環(huán)境持久性和生物累積性，可能引起持久性有機(jī)污染問題。歐洲保護(hù)東北大西洋海洋環(huán)境公約組織(OSPAR)自2001年將四溴雙酚A納入優(yōu)化控制污染物后至今未將其取消，其報告中認(rèn)為四溴雙酚A具有持久性污染問題?；诖?，通過動物實驗?zāi)M四溴雙酚A進(jìn)入生物體后在糞便中的分布規(guī)律對四溴雙酚A的影響研究具有重要作用。
[0004]糞便樣品作為非創(chuàng)傷性獲取的生物介質(zhì)，可準(zhǔn)確反應(yīng)生物體經(jīng)四溴雙酚A暴露后的內(nèi)暴露劑量，可通過監(jiān)測生物糞便中四溴雙酚A含量評價污染物的健康損害。糞便樣品基質(zhì)復(fù)雜，不適宜的前處理技術(shù)影響檢測結(jié)果，同時生物經(jīng)暴露染毒后會獲得大量樣品，便捷的前處理技術(shù)可大大縮短檢測時間。因此前處理技術(shù)是分析樣品中四溴雙酚A含量技術(shù)的關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是針對生物暴露染毒后糞便樣品的前處理問題，提供一種回收率高、除雜效果好、準(zhǔn)確迅速的凈化技術(shù)，實現(xiàn)對生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A定量分析的技術(shù)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別在于，利用超聲清洗儀采用超聲的方式提取糞便樣品中四溴雙酚A，并用稀釋與固相萃取小柱聯(lián)合的方式避免基質(zhì)雜質(zhì)的干擾，保證了提取效率并避免復(fù)雜的凈化步驟損失樣品中四溴雙酚A含量。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下所述。
[0007]—種適用于分析生物暴露染毒后糞便樣品中四溴雙酚A的前處理方法(圖1)，包括以下步驟:[0008](I)采集生物暴露染毒的糞便樣品，用鑷子挑出雜質(zhì)，經(jīng)冷凍干燥后研磨粉碎；
[0009](2)準(zhǔn)確稱取干燥后糞便樣品；
[0010](3)加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷試劑，超聲提取；
[0011](4)置離心機(jī)內(nèi)低速離心5分鐘，移出上層提取液；
[0012](5)重復(fù)步驟(3)-⑷兩次；
[0013](6)合并三次提取液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，定容至一定體積，并充分混合均勻；
[0014](7)取10~20 μ L混合均勻的提取液，加入C13標(biāo)記的四溴雙酚A以及正己燒，混合均勻后經(jīng)活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脫后定容到一定體積，用0.2 μ m過濾器過濾，過濾后至超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測四溴雙酚A濃度。
[0015]該方法所述暴露染毒方式包括經(jīng)口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮膚暴露、經(jīng)呼吸暴露。
[0016]本方法中提取方式為超聲波清洗儀超聲提取，時間為提取30分鐘，并重復(fù)三次；凈化方式為稀釋與固相萃取小柱結(jié)合的方式，這與四溴雙酚A在生物體中以糞便代謝為主有關(guān)。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是:生物暴露染毒四溴雙酚A后，主要通過糞便代謝出體外，糞便中四溴雙酚A濃度很高，同時糞便基質(zhì)復(fù)雜，凈化要求較高，因此快速方便的對生物暴露染毒后糞便樣品進(jìn)行前處理非常重要。本發(fā)明中樣品經(jīng)甲基叔丁基醚與正己烷混合試劑超聲提取，取一定量提取液稀釋后經(jīng)L1-SI小柱富集凈化。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，檢出限為0.02ng/g干重。通過稀釋與固相萃取小柱結(jié)合的凈化方式降低基質(zhì)干擾，使得該前處理方法具有凈化效果好，操作簡單，回收率較高的優(yōu)點，特別適用于生物暴露染毒糞便樣品中四溴雙酚A含量的測定的前處理過程。
[0018]本前處理方法的加標(biāo)回收率如表1所示。
[0019]表1本前處理方法的加標(biāo)回收率
【權(quán)利要求】
1.一種用于生物染毒后糞便中四溴雙酚A分析的前處理方法，其特征在于: 該方法包括如下步驟， (1)采集生物暴露染毒的糞便樣品，用鑷子挑出雜質(zhì)，經(jīng)冷凍干燥后研磨粉碎； (2)準(zhǔn)確稱取干燥后糞便樣品； (3)加入等體積混合的甲基叔丁基醚與正己烷試劑，超聲提??； (4)置離心機(jī)內(nèi)低速離心5分鐘，移出上層提取液； (5)重復(fù)步驟(3)-(4)兩次； (6)合并三次提取液，經(jīng)無水硫酸鈉干燥，定容至一定體積，并充分混合均勻； (7)取10~20μ L混合均勻的提取液，加入C13標(biāo)記的四溴雙酚A以及正己烷，混合均勻后經(jīng)活化好的L1-SI小柱富集，甲醇洗脫后定容到一定體積，用0.2 μ m過濾器過濾，過濾后至超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測四溴雙酚A濃度。
2.如權(quán)利1要求所述的前處理方法，其特征在于:該方法所述暴露染毒生物包括實驗動物中大鼠、小鼠、豚鼠、兔子；該方法所述暴露染毒方式包括經(jīng)口灌胃暴露、腹腔注射暴露、皮膚暴露、經(jīng)呼吸暴露。
3.如權(quán)利1要求所述的前處理方法，其特征在于:提取方式為超聲波清洗儀超聲提取，時間為提取30分鐘，并重復(fù)三次；凈化方式為稀釋與固相萃取小柱結(jié)合的方式。
【文檔編號】G01N30/06GK103901140SQ201410171594
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】于云江, 王瓊, 孫朋, 向明燈, 付益?zhèn)? 申請人:中國環(huán)境科學(xué)研究院