Psa2蛋白在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了PSA2蛋白在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品，包含用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)；還包含記載有如下內(nèi)容的載體：若所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量高于對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)或候選處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)；反之，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)后候選不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)；所述對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞為：與所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞分類命名相同，且未經(jīng)缺氧處理的正常的動(dòng)物或細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)證明，缺氧預(yù)適應(yīng)后，PSA2蛋白在腦組織中含量明顯增加；本發(fā)明對(duì)缺氧相關(guān)疾病做出早期診斷和干預(yù)治療有很大幫助。
【專利說(shuō)明】PSA2蛋白在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及PSA2蛋白在作為缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物中的應(yīng)用，特別涉及檢測(cè)PSA2蛋白含量的儀器或/和物質(zhì)在制備鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]缺氧，是指因?yàn)榻M織的氧氣供應(yīng)不足或者用氧障礙，從而導(dǎo)致組織器官的代謝、功能甚至形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生異常變化的病理生理過(guò)程。缺氧雖然不能作為單獨(dú)的疾病存在，但卻是臨床各種疾病中十分常見(jiàn)的一類病理過(guò)程，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)?dǎo)致器官的損傷或者功能的障礙。針對(duì)這一廣泛存在的病理過(guò)程，尋找提升機(jī)體抗缺氧能力的藥物和措施一直是研究的熱點(diǎn)。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物或細(xì)胞經(jīng)過(guò)非致死量的缺氧刺激后，可以對(duì)隨后出現(xiàn)的更嚴(yán)重的缺氧產(chǎn)生耐受性，從而減輕缺氧對(duì)動(dòng)物或者細(xì)胞的損傷，即會(huì)產(chǎn)生缺氧預(yù)適應(yīng)(Hypoxic Preconditioning, HPC)的保護(hù)作用。HPC的機(jī)制可能與抗缺氧活性物質(zhì)的產(chǎn)生或者內(nèi)源性保護(hù)通路的激活等因素有關(guān)，但目前機(jī)制仍然未被闡明。蛋白質(zhì)作為生物體內(nèi)具體功能的執(zhí)行者是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，在機(jī)體受到缺氧刺激之后，會(huì)引起體內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá)與含量的動(dòng)態(tài)改變。因此，通過(guò)對(duì)比經(jīng)過(guò)缺氧預(yù)適應(yīng)刺激后動(dòng)物的重要組織器官與未經(jīng)過(guò)缺氧刺激的動(dòng)物蛋白質(zhì)的系統(tǒng)動(dòng)態(tài)研究，有助于從蛋白質(zhì)層次上揭示缺氧預(yù)適應(yīng)的發(fā)生過(guò)程，可能為我們找到相關(guān)抗缺氧蛋白質(zhì)，對(duì)于預(yù)防缺氧損傷有著重要的意義。生物標(biāo)志物，一般指可以提供客觀測(cè)定和評(píng)價(jià)的一個(gè)普通生理或病理指標(biāo)，通過(guò)對(duì)它的測(cè)定便可以判斷機(jī)體當(dāng)前所處的生物學(xué)過(guò)程中的進(jìn)程。特異性的生物標(biāo)志物對(duì)于疾病的鑒定、早起診斷、預(yù)防、治療以及愈后判定都有著積極的幫助租用，因此，尋找和發(fā)現(xiàn)有價(jià)值的生物標(biāo)志物對(duì)于臨床研究有著重要意義。鑒于缺氧損傷存在的廣泛性與損傷結(jié)果的嚴(yán)重性，針對(duì)缺氧預(yù)適應(yīng)相關(guān)蛋白生物標(biāo)志物的研究便有著深遠(yuǎn)的意義。從蛋白質(zhì)的層次上尋找缺氧預(yù)適應(yīng)相關(guān)蛋白生物標(biāo)志物，從而為后期研發(fā)抗缺氧藥物提供可能的思路與靶點(diǎn)。
[0003]蛋白質(zhì)組學(xué)，是指一種基因、細(xì)胞乃至一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)組學(xué)是一種在整體、大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括表達(dá)水平，翻譯后的修飾等等，從而獲得在機(jī)體受到外源性刺激前后，蛋白質(zhì)整體水平上的變化情況。目前，蛋白質(zhì)組學(xué)中最常用且較為先進(jìn)的方法為雙向突光差異凝膠電泳(Two dimensional difference in gelelectrophoresis, 2D-DIGE)。它是在傳統(tǒng)的雙向電泳的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型蛋白質(zhì)組學(xué)定量分離計(jì)數(shù)。DIGE實(shí)驗(yàn)使用三種熒光染料(Cy2Cy3和Cy5)標(biāo)記蛋白質(zhì)，并且在同一張凝膠上對(duì)標(biāo)記好的三組蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行電泳分離，是一種多通道的蛋白分離技術(shù)，消除了因?yàn)槟z差異而造成的誤差。于此同時(shí)，用Cy2標(biāo)記所有蛋白質(zhì)的混合物作為內(nèi)參，在凝膠掃描后，使用專門的軟件將蛋白質(zhì)的變化與內(nèi)標(biāo)含量進(jìn)行比對(duì)分析，采用特殊的算法，給出準(zhǔn)確可靠的定量信息，提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性，減少了假陽(yáng)性結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品。
[0005]本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品，包含用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)。
[0006]在本發(fā)明中，所述缺氧預(yù)適應(yīng)是指動(dòng)物或細(xì)胞經(jīng)過(guò)非致死性缺氧后，對(duì)再次遭遇的缺氧產(chǎn)生耐受，從而減輕缺氧對(duì)動(dòng)物或細(xì)胞的損傷；所述耐受具體可體現(xiàn)為對(duì)相同的缺氧狀態(tài)的耐受時(shí)間延長(zhǎng)。
[0007]所述產(chǎn)品還可包含記載有如下內(nèi)容的載體:
[0008]若所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量高于(在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著高于)對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)或候選處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)；反之，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)或候選不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)；
[0009]所述對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞為:與所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞分類命名相同，且未經(jīng)缺氧處理的正常的動(dòng)物或細(xì)胞。
[0010]進(jìn)一步，所述PSA2蛋白的含量高于對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量，具體可為所述PSA2蛋白的含量為所述對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量的1.2倍以上，再如2倍以上。
[0011]所述載體可為紙張，也可為電子信息載體，如U盤、軟盤、⑶等。
[0012]在本發(fā)明中，所述PSA2蛋白的氨基酸序列具體為序列表中序列I。
[0013]進(jìn)一步，在本發(fā)明中，所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為用于進(jìn)行雙向熒光差異凝膠電泳(2D-DIGE)的試劑和儀器，具體為如下:
[0014](al)三種熒光染料Cy2、Cy3和Cy5 ；
[0015](a2)等電聚焦電泳儀(如GE公司生產(chǎn)的IEF等電聚焦電泳儀);
[0016](a3)垂直電泳儀(如GE公司生產(chǎn)的垂直電泳儀)；
[0017](a4)突光掃描儀(如GE公司生產(chǎn)的臺(tái)風(fēng)Trio掃描儀)；
[0018](a5) 2D圖像分析軟件(如GE公司生產(chǎn)的DeCyder2D圖像分析軟件)；
[0019](a6)質(zhì)譜儀(如布魯克公司生產(chǎn)的型號(hào)為Ultraflex treme T0F/T0F的質(zhì)譜儀)。
[0020]所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)也可為抗所述PSA2蛋白的抗體。
[0021]更進(jìn)一步，所述鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品，具體可由以上任一所述的用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)，以及以上所述的載體組成。
[0022]另外，所述產(chǎn)品在鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)中的非疾病診斷應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0023]用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)在制備用于鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0024]在所述應(yīng)用中，所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為用于進(jìn)行雙向熒光差異凝膠電泳(2D-DIGE)的試劑和儀器，具體為如下:
[0025](al)三種熒光染料Cy2、Cy3和Cy5 ；
[0026](a2)等電聚焦電泳儀(如GE公司生產(chǎn)的IEF等電聚焦電泳儀);
[0027](a3)垂直電泳儀(如GE公司生產(chǎn)的垂直電泳儀)；[0028](a4)熒光掃描儀(如GE公司生產(chǎn)的臺(tái)風(fēng)Trio掃描儀)；
[0029](a5) 2D圖像分析軟件(如GE公司生產(chǎn)的DeCyder2D圖像分析軟件)；
[0030](a6)質(zhì)譜儀(如布魯克公司生產(chǎn)的型號(hào)為Ultraflex treme T0F/T0F的質(zhì)譜儀)。
[0031]所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)也可為抗所述PSA2蛋白的抗體。
[0032]進(jìn)一步，所述PSA2蛋白的氨基酸序列具體為序列表中序列I。
[0033]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，具體選擇小鼠(如ICR小鼠)作為所述動(dòng)物，用于檢測(cè)所述PSA2蛋白的含量，檢測(cè)部位具體為所述動(dòng)物(如小鼠)的腦組織。
[0034]本發(fā)明結(jié)合雙向熒光差異凝膠電泳(2D-DIGE)和質(zhì)譜對(duì)提取液進(jìn)行全面分析，最終發(fā)現(xiàn)PSA2蛋白可作為缺氧預(yù)適應(yīng)的標(biāo)記物。具體表現(xiàn)為，缺氧預(yù)適應(yīng)后，PSA2蛋白在腦組織中含量明顯增加。缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)志物的揭示將對(duì)更加深入的了解缺氧預(yù)適應(yīng)的機(jī)制在臨床上對(duì)缺氧相關(guān)疾病做出早期診斷和干預(yù)治療有很大幫助。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為2D-DIGE電泳圖。
[0036]圖2為PSA2蛋白的一級(jí)質(zhì)譜圖與二級(jí)質(zhì)譜圖。其中，A為PSA2蛋白一級(jí)質(zhì)譜圖。B為m/z2362.1123 二級(jí)質(zhì)譜圖。
[0037]圖3為PSA2蛋白在對(duì)照組與缺氧組中含量變化圖?？v軸為PSA2蛋白相對(duì)含量的對(duì)數(shù)值。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。
[0039]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0040]實(shí)施例1、小鼠缺氧預(yù)適應(yīng)動(dòng)物模型的獲得
[0041]將ICR小鼠(雄性，體重18_22g，由首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物號(hào):SCXK(京)2012-0001)飼養(yǎng)于清潔室內(nèi)，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)不禁水。將9只小鼠隨機(jī)分成3組，分別為對(duì)照組、缺氧3次組和缺氧6次組，每組3只。
[0042]稱重后將缺氧3次組和缺氧6次組的小鼠置于125ml的廣口瓶中，將瓶口用涂有凡士林的橡膠塞塞緊密封，開(kāi)始計(jì)時(shí)(缺氧耐受時(shí)間的起點(diǎn))并觀察小鼠的反應(yīng)。當(dāng)小鼠出現(xiàn)喘呼吸現(xiàn)象時(shí)，記錄時(shí)間(缺氧耐受時(shí)間的終點(diǎn))。立即將小鼠從瓶中取出，并迅速放入另一個(gè)充滿新鮮空氣的125ml廣口瓶中后，立即將瓶口用涂有凡士林的橡膠塞塞緊密封，重新開(kāi)始下一輪計(jì)時(shí)，記錄該次缺氧處理的缺氧耐受時(shí)間。共重復(fù)缺氧處理3次或6次。
[0043]小鼠在缺氧3次或6次后立即斷頭處死，然后在冰上迅速取出小鼠的腦組織，用濾紙將血跡吸干，放到液氮中保存待用。而對(duì)照組小鼠不進(jìn)行缺氧處理，直接斷頭處死，在冰上迅速取出小鼠的腦組織，用濾紙將血跡吸干，放到液氮中保存待用。
[0044]對(duì)缺氧6次組小鼠的缺氧耐受時(shí)間與缺氧處理次數(shù)之間的關(guān)系進(jìn)行分析，可見(jiàn)小鼠缺氧耐受時(shí)間隨著缺氧預(yù)適應(yīng)次數(shù)的增多而大幅延長(zhǎng)，從缺氧第I次的大約15min到缺氧第6次能夠延長(zhǎng)到約80-90分鐘，可見(jiàn)，小鼠對(duì)缺氧產(chǎn)生了一定的適應(yīng)性，即處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)。
[0045]實(shí)施例2、缺氧預(yù)適應(yīng)生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)[0046]一、腦組織樣品的處理
[0047]將實(shí)施例1獲得的各組小鼠的腦組織從液氮中取出置于冰上，稱重，按照每克腦組織2.5ml的用量，分別加入組織裂解液【配方:溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下:8M尿素，2M硫脲(GE公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄為:RPN6301)，2% (w/v) CHAPS (GE公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄為:17-1314-01)】，并加入終濃度為0.005g/ml的蛋白酶抑制劑混合物片(羅氏公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄號(hào)04693159001)，用手持勻漿機(jī)于冰上勻漿。超聲破碎儀進(jìn)行細(xì)胞粉碎。在冰上靜置15分鐘。150000rpm，4°C離心60分鐘。收集上清。加入三倍體積的冰冷的含有10%(w/v)三氯醋酸的丙酮溶液。置于_20°C過(guò)夜沉淀。沉淀結(jié)束后，取出樣品。15000rpm，4°C離心30分鐘。棄上清，加入冰冷的丙酮溶液，15000rpm，4°C離心10分鐘。棄上清，再次加入冰冷的丙酮溶液，15000rpm，4°C離心10分鐘。將沉淀凍干，得蛋白質(zhì)干粉，置于_20°C備用。
[0048]二、對(duì)步驟一樣品進(jìn)行雙向凝膠熒光差異凝膠電泳分析
[0049]1、待測(cè)樣品溶液的配制
[0050]用含有30mM Tris的水化液【水化液:溶劑為水，溶質(zhì)及其濃度如下:8M尿素，2M硫脲(GE公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄為:RPN6301)，2% (w/v) CHAPS (GE公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄為:17-1314-01),0.002% (w/v)溴酚藍(lán)】。將蛋白質(zhì)干粉充分溶解，并且用IM HCl或IM NaOH精確調(diào)pH至8.0-8.5。
[0051]2、蛋白定量
[0052]采用GE公司生產(chǎn)的2-Quant蛋白定量試劑盒(產(chǎn)品目錄號(hào)為80_6483_56)，對(duì)步驟I配制的待測(cè)樣品溶液進(jìn)行蛋白定量。具體操作如下:
[0053]在定量實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前，先按要求配好preliminary color reagent溶液25ml,將試劑盒中的A液與B液按照100:1 (體積比)的比例混合均勻備用。向EP管中加入I μ 1、5 μ 1、10 μ 1、15 μ I和20 μ I濃度為2 μ g/μ I的BSA標(biāo)準(zhǔn)液，每個(gè)濃度重復(fù)3次，作為制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品。將溶解好的小鼠腦蛋白樣品(即步驟I配制的待測(cè)樣品溶液)取2-3 μ 1，加入空白EP管中。向每個(gè)EP管中加入500 μ I precipitant溶液。顛倒混勻后室溫下靜置2-3分鐘,然后加入co-precipitant溶液500 μ I。顛倒混勻后1000Og離心5分鐘。從沒(méi)有白色沉淀的一側(cè)吸凈上清，洗凈上清并確保沒(méi)有液體殘留。上清棄掉之后，每管中加入100 μ I copper solution和400 μ I純水，顛倒混勻。加入1ml事先配制好的preliminarycolor reagent溶液,顛倒混勻。于室溫下孵育15-20分鐘。用分光光度測(cè)定波長(zhǎng)為480nm處的戲光值。根據(jù)測(cè)得的數(shù)值，做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。并根據(jù)樣品的吸光值以及體積，用公式算出樣品的蛋白質(zhì)含量。
[0054]3、2D_DIGE 檢測(cè)
[0055](I)標(biāo)記蛋白樣品
[0056]采用最小標(biāo)記法標(biāo)記蛋白。具體操作如下:
[0057]用Iml的注射器吸取二甲基甲酰胺(DMF)，沖洗針管及600 μ I Ep管。再取出一定量DMF放入沖洗好的EP管中備用。
[0058]從熒光染料試劑盒(GE公司產(chǎn)品，其產(chǎn)品目錄號(hào)為25-8010-65)中取出三種染料:Cy2、Cy3 和 Cy5。
[0059]配制染料母液(濃度為1mmol/ μ I):每管染料(5mmol)加入5 μ I DMF,渦輪混勻，1000Og 離心 30s。
[0060]配制染料工作液:0.6μ I DMF加入0.4μ I染料母液配制1μ I工作液，可用來(lái)標(biāo)記50 μ g蛋白質(zhì)。
[0061]對(duì)蛋白樣品進(jìn)行標(biāo)記:按照表1對(duì)各蛋白樣品進(jìn)行標(biāo)記，將各個(gè)待標(biāo)記的蛋白樣品與染料混合，進(jìn)行渦旋混勻，4°C離心，避光，在冰上孵育30min。向IS管內(nèi)加入3 μ IlOmM賴氨酸，其余各管中分別加入I μ I賴氨酸,于冰上孵育lOmin，終止標(biāo)記。
[0062]表12D-DIGE中對(duì)蛋白樣品的標(biāo)記
【權(quán)利要求】
1.鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品，包含用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述產(chǎn)品還包含記載有如下內(nèi)容的載體: 若所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量高于對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞中PSA2蛋白的含量，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)或候選處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)；反之，則所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)后候選不處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)； 所述對(duì)照動(dòng)物或細(xì)胞為:與所述待測(cè)動(dòng)物或細(xì)胞分類命名相同，且未經(jīng)缺氧處理的正常的動(dòng)物或細(xì)胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述PSA2蛋白的氨基酸序列為序列表中序列I。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為如下: (al)三種熒光染料Cy2、Cy3和Cy5 ； (a2)等電聚焦電泳儀； (a3)垂直電泳儀； (a4)突光掃描儀； (a5)2D圖像分析軟件； (a6)質(zhì)譜儀。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的產(chǎn)品，其特征在于:所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為抗所述PSA2蛋白的抗體。
6.權(quán)利要求1-5中任一所述的產(chǎn)品在鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)中的非疾病診斷應(yīng)用。
7.用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)在制備用于鑒定或輔助鑒定動(dòng)物或細(xì)胞是否處于缺氧預(yù)適應(yīng)狀態(tài)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為如下: (al)三種熒光染料Cy2、Cy3和Cy5 ； (a2)等電聚焦電泳儀； (a3)垂直電泳儀； (a4)突光掃描儀； (a5)2D圖像分析軟件； (a6)質(zhì)譜儀。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于:所述用于檢測(cè)PSA2蛋白的物質(zhì)為抗所述PSA2蛋白的抗體。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一所述的應(yīng)用，其特征在于:所述PSA2蛋白的氨基酸序列為序列表中序列I。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK103954597SQ201410179074
【公開(kāi)日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2014年4月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月28日
【發(fā)明者】薛明, 崔燦, 徐平湘, 白露 申請(qǐng)人:首都醫(yī)科大學(xué)