生血寶制劑特征圖譜及其建立方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制【技術(shù)領(lǐng)域】，所公開(kāi)的生血寶制劑特征圖譜的建立方法，包括：取芍藥苷對(duì)照品溶解于50％-100％(體積)甲醇中以形成芍藥苷對(duì)照品濃度為0.02mg/ml溶液，搖勻后得到參照物溶液；取設(shè)定量的生血寶制劑溶解于0％-100％甲醇、0％-50％乙醇或25-125ml水，稱(chēng)重后通過(guò)回流提取或超聲處理10-60min，冷卻后，再稱(chēng)重量，然后用同種溶劑補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液；吸取參照物溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法檢測(cè)，得到生血寶制劑的特征圖譜。本發(fā)明還公開(kāi)一種生血寶制劑特征圖譜。上述特征圖譜實(shí)現(xiàn)了對(duì)生血寶制劑質(zhì)量的較全面檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】生血寶制劑特征圖譜及其建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物質(zhì)量控制【技術(shù)領(lǐng)域】，更為具體地說(shuō)，涉及生血寶制劑特征圖譜的建立方法。本發(fā)明還涉及由上述建立方法得到的生血寶制劑特征圖譜。
【背景技術(shù)】
[0002]生血寶是由我國(guó)著名中醫(yī)藥學(xué)專(zhuān)家的經(jīng)驗(yàn)方，經(jīng)現(xiàn)代工藝制備而成。生血寶主要由制何首烏、女貞子、桑葚、墨旱蓮、白芍、黃芪和狗脊這七味藥材制成。幾十年的臨床應(yīng)用證明生血寶具有養(yǎng)肝腎，益氣血之功效，用于惡性腫瘤放化療所致白細(xì)胞減少、神疲乏力、腰膝酸軟、頭暈耳鳴、心悸、失眠、咽干、食欲不振、食少等癥狀。
[0003]目前，根據(jù)生血寶中藥方已制得多種劑型的生血寶制劑。市場(chǎng)上的生血寶制劑主要由顆粒劑、合劑等。通常，生血寶制劑的制備工藝為:將原料藥材碎斷后加水提取的水提物，按照現(xiàn)有常規(guī)的方法制成顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊劑、口服液或合劑。生血寶制劑作為中成藥，其藥效是多種活性成分共同作用的結(jié)果。因此，生血寶制劑的多種活性成分含量是否達(dá)標(biāo)是衡量生血寶制劑質(zhì)量的重要因素。但是，目前的生血寶制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法僅測(cè)定單一指標(biāo)成份的含量，未對(duì)其它有效成份進(jìn)行檢測(cè)。這種檢測(cè)方法存在一定的局限性，無(wú)法較全面反映生血寶制劑的質(zhì)量水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種生血寶制劑特征圖譜的建立方法，以解決目前的生血寶制劑檢測(cè)方法無(wú)法較全面反映生血寶制劑質(zhì)量水平的問(wèn)題。
[0005]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0006]生血寶制劑特征圖譜的建立方法，包括以下步驟:
[0007]取芍藥苷對(duì)照品溶解于50% -100% (體積)甲醇中以形成芍藥苷對(duì)照品濃度為0.02mg/ml溶液，搖勻后得到參照物溶液；
[0008]取設(shè)定量的生血寶制劑溶解于O % -100%甲醇、O % -50%乙醇或25_125ml水，稱(chēng)重后通過(guò)回流提取或超聲處理10-60min，冷卻后，再稱(chēng)重量，然后用同種溶劑補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，所述生血寶制劑為口服液或合劑，所述設(shè)定量為
1.0-5.0ml，或者所述生血寶制劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑或生血寶制劑中間體，所述設(shè)定量為0.6-3.0g的粉末；
[0009]吸取所述參照物溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法檢測(cè)，得到生血寶制劑的特征圖譜；其中，色譜柱為C18反相色譜柱；采用梯度洗脫，且梯度洗脫液的流動(dòng)相的流速為0.8ml/min-l.2ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為200_230nm，柱溫為25°C -40°C；梯度洗脫時(shí)間為60min-120min。
[0010]優(yōu)選的，上述建立方法中，梯度洗脫液的流動(dòng)相為乙腈-水、乙腈-(ο.1%-0.2%)磷酸溶液、乙腈-0.1 %甲酸溶液、甲醇-0.1 %磷酸溶液、甲醇-0.1 %甲酸溶液或甲醇-水。
[0011]優(yōu)選的，上述建立方法中，所述梯度洗脫液的流動(dòng)相為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1 % (體積)磷酸溶液。
[0012]優(yōu)選的，上述建立方法中，吸取所述參照物溶液和供試品溶液均為5μ I注入高效液相色譜儀，所述梯度洗脫的時(shí)間為60min，采用如下方式進(jìn)行梯度洗脫:
[0013]0-15min,流動(dòng)相A的體積百分比為2 %，流動(dòng)相B的體積百分比為98 % ;
[0014]15-30min,流動(dòng)相A的體積百分比為2 % -15 %，流動(dòng)相B的體積百分比為98% -85% ；
[0015]30-50min,流動(dòng)相A的體積百分比為15 % -25 %，流動(dòng)相B的體積百分比為85% -75% ；
[0016]50-60min,流動(dòng)相A的體積百分比為25 %，流動(dòng)相B的體積百分比為75 %。
[0017]優(yōu)選的,上述建立方法中，所述流動(dòng)相的流速為1.0ml/min,所述C18反相色譜柱的柱長(zhǎng)為250nm。
[0018]生血寶制劑特征圖譜，采用如上所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取生血寶顆粒劑粉末0.6g溶解于25ml的甲醇溶液得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:
[0019]I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ；
[0020]2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ；
[0021]3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；
[0022]4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ;
[0023]5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0024]6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ;
[0025]7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03%。
[0026]生血寶制劑特征圖譜，采用如上所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取3.0g生血寶制劑中間體溶解于 125ml的水得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:
[0027]I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14% ；
[0028]2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間(λ 672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0029]3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；
[0030]4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0031]5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0032]6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0033]7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00%。
[0034]生血寶制劑特征圖譜，采用如上所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取1.2g生血寶膠囊粉末溶解于50ml的50%甲醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:
[0035]I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.19% ；
[0036]2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43% ；[0037]3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ；
[0038]4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；
[0039]5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0040]6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.28% ；
[0041]7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12%。
[0042]生血寶制劑特征圖譜，采用如上所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取2.4g生血寶片劑溶解于IOOml的25%乙醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:
[0043]I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ；
[0044]2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ；
[0045]3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；
[0046]4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ;
[0047]5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0048]6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ;
[0049]7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03%。
[0050]生血寶制劑特征圖譜，采用如上所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取Iml生血寶口服液溶解于25ml的50%乙醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為:
[0051]I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21% ；
[0052]2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08% ；
[0053]3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ；
[0054]4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；
[0055]5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0056]6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；
[0057]7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.04%
[0058]本發(fā)明的有益效果如下:
[0059]A、本發(fā)明提供的生血寶制劑的特征圖譜建立方法對(duì)供試品的前處理方法簡(jiǎn)單，特征性成分保留完整，且供試品溶液穩(wěn)定性良好。
[0060]B、高效液相色譜方法的精密度較高、重現(xiàn)性良好，分析時(shí)間較短，具有一定的專(zhuān)屬性；所得特征圖譜中各特征峰分離效果較好，且生血寶制劑特征圖譜和中間體特征圖譜具有較好的相關(guān)性。
[0061]C、本發(fā)明所建立的特征圖譜有7個(gè)特征峰，信息量較大，較完整的保留了供試液中的有效成分，明確了 3個(gè)指標(biāo)成份，經(jīng)比較，采用保留時(shí)間適中，分離度較好，峰面積較大的茍藥苷參照物作為參照峰。
[0062]D、生血寶制劑中間體特征圖譜的應(yīng)用可增加生血寶制劑生產(chǎn)過(guò)程的可控性，生血寶制劑特征圖譜的應(yīng)用能較全面的反映工藝是否穩(wěn)定均一，有利于保證生血寶制劑的有效成分質(zhì)量穩(wěn)定和臨床療效，本發(fā)明提供的方法有利地保障了從原料到終端制劑的全過(guò)程質(zhì)量控制。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0063]為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
[0064]圖1參照物疊加色譜圖；
[0065]圖2為生血寶顆粒劑特征圖譜；
[0066]圖3為10批生血寶顆粒劑特征圖譜；
[0067]圖4為生血寶 制劑中間體特征圖譜；
[0068]圖5為10批生血寶制劑中間體特征圖譜；
[0069]圖6為生血寶膠囊特征圖譜；
[0070]圖7為10批生血寶膠囊特征圖譜；
[0071]圖8為生血寶顆粒特征圖譜；
[0072]圖9為10批生血寶顆粒特征圖譜；
[0073]圖10為生血寶口服液特征圖譜；
[0074]圖11為10批生血寶口服液特征圖譜；
[0075]圖12為生血寶制劑特征峰與各藥材特征峰的歸屬圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0076]本發(fā)明實(shí)施例提供了一種生血寶制劑特征圖譜的建立方法，以解決目前的生血寶制劑檢測(cè)無(wú)法較全面反映生血寶制劑質(zhì)量水平的問(wèn)題。
[0077]為了使本【技術(shù)領(lǐng)域】的人員更好地理解本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，并使本發(fā)明實(shí)施例的上述目的、特征和優(yōu)點(diǎn)能夠更加明顯易懂，下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0078]本發(fā)明實(shí)施例中，藥材、藥品來(lái)源及對(duì)照品來(lái)源如下:
[0079]制何首烏藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):JY100202);女貞子藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):ZY1402002);桑椹藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):ΖΥ1401022);墨旱蓮藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):ΖΥ1402007);白芍藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):JY140101);黃芪藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):ZY1401021);狗脊藥材(廠家:安徽芍花堂藥業(yè)有限公司、批號(hào):ΖΥ1401020);芍藥苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院、110738-201337)。
[0080]生血寶顆粒(湖南康壽制藥有限公司，批號(hào)為20120501、20121105、20121207、20121211、20130701、20130704、20130801、130701、130803、130805);生血寶膠囊、片劑、口服液、丸劑(實(shí)驗(yàn)室自制)；生血寶中間體(實(shí)驗(yàn)室自制)。
[0081]實(shí)施例一
[0082]本實(shí)施例一以生血寶顆粒劑為實(shí)驗(yàn)材料建立生血寶制劑特征圖譜。
[0083]本發(fā)明實(shí)施例一提供的生血寶制劑特征圖譜的建立方法，包括如下步驟。
[0084]S101、參照物溶液的制備。[0085]稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品，置于容量瓶中，加50%-100% (體積)甲醇溶解并稀釋成0.02mg/ml的溶液，搖勻，即得到參照物溶液，參照物疊加色譜圖如圖1所示。本實(shí)施例中50% -100% (體積)甲醇指的是甲醇的體積比為50% -100%的甲醇水溶液。
[0086]S102、供試品溶液的制備。
[0087]取生血寶顆粒劑粉末0.6g，精密稱(chēng)定后置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱(chēng)定重量。超聲處理IOmin后放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減掉的重量，搖勻后過(guò)濾。取續(xù)濾液作為供試品溶液。
[0088]S103、吸取參照物溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法檢測(cè)，得到生血寶顆粒劑特征圖譜。
[0089](I)步驟S103可以選用安捷倫1260高效液相色譜儀，含在線真空脫氣機(jī)器(G-1311C)、二元泵(G-1311C)、標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器(G-1329B)、智能化柱溫箱(G-1316A)、DAD檢測(cè)器(G-1314B)、Agilentl260Infinity色譜工作站(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；SB-5200D超聲波清洗儀(寧波新芝生物科技股份有限公司)；FAZ004B分析天平(上海佑科)；BT125D電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司)。
[0090](2)步驟S103檢測(cè)的色譜條件如下:
[0091]a、流動(dòng)相的選擇。
[0092]流動(dòng)相由流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成。具體的，可以選擇乙腈-水、乙腈-(0.1^-0.2%)磷酸溶液、乙腈-0.1 %甲酸溶液、甲醇-0.1 %磷酸溶液、甲醇-0.1%甲酸溶液、甲醇-水等為流動(dòng)相(前面為流動(dòng)相A，后面為流動(dòng)相B)進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表面，乙腈-0.1 %磷酸溶液、乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相時(shí)，色譜峰的峰形好，各峰分離較完全，其中乙腈-0.1 %磷酸溶液為流動(dòng)相時(shí)效果最好，優(yōu)選選用乙腈-0.1 %磷酸溶液作為最佳流動(dòng)相，即流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1 % (體積)磷酸溶液。a中％均代表體積百分比。
[0093]由于生血寶顆粒劑中成分復(fù)雜，在恒流條件下，供試品溶液中的各個(gè)成分分離度較差，較難體現(xiàn)特征圖譜的整體特性；流動(dòng)相以如下表1所示的梯度洗脫，樣品中各組分均有較好的分離，基線平穩(wěn)，故選用為流動(dòng)相。
[0094]表1
【權(quán)利要求】
1.生血寶制劑特征圖譜的建立方法，其特征在于，包括以下步驟: 取芍藥苷對(duì)照品溶解于50%-100% (體積)甲醇中以形成芍藥苷對(duì)照品濃度為0.02mg/ml溶液，搖勻后得到參照物溶液； 取設(shè)定量的生血寶制劑溶解于O % -100%甲醇、O % -50%乙醇或25-125ml水，稱(chēng)重后通過(guò)回流提取或超聲處理10-60min，冷卻后，再稱(chēng)重量，然后用同種溶劑補(bǔ)重，搖勻，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，所述生血寶制劑為口服液或合劑，所述設(shè)定量為1.0-5.0ml，或者所述生血寶制劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑或生血寶制劑中間體，所述設(shè)定量為0.6-3.0g的粉末； 吸取所述參照物溶液和供試品溶液注入高效液相色譜儀，按照高效液相色譜法檢測(cè)，得到生血寶制劑的特征圖譜；其中，色譜柱為C18反相色譜柱；采用梯度洗脫，且梯度洗脫液的流動(dòng)相的流速為0.8ml/min-l.2ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)為200_230nm，柱溫為25°C _40°C;梯度洗脫時(shí)間為60min-120min。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立方法，其特征在于，梯度洗脫液的流動(dòng)相為乙腈-水、乙腈-(0.1^-0.2%)磷酸溶液、乙腈-0.1 %甲酸溶液、甲醇-0.1 %磷酸溶液、甲醇-0.1%甲酸溶液或甲醇-水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脫液的流動(dòng)相為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為0.1 % (體積)磷酸溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的建立方法，其特征在于，吸取所述參照物溶液和供試品溶液均為5μ I注入高效 液相色譜儀，所述梯度洗脫的時(shí)間為60min，采用如下方式進(jìn)行梯度洗脫: 0-15min，流動(dòng)相A的體積百分比為2%，流動(dòng)相B的體積百分比為98% ； 15-30min，流動(dòng)相A的體積百分比為2% -15%，流動(dòng)相B的體積百分比為98% -85%； 30-50min,流動(dòng)相A的體積百分比為15 % -25 %，流動(dòng)相B的體積百分比為85 % -75 % ； 50-60min,流動(dòng)相A的體積百分比為25 %，流動(dòng)相B的體積百分比為75 %。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的建立方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的流速為l.0ml/min，所述C18反相色譜柱的柱長(zhǎng)為250nm。
6.生血寶制劑特征圖譜，其特征在于，采用如權(quán)利要求1所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取生血寶顆粒劑粉末0.6g溶解于25ml的甲醇溶液得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為: I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ； 2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ； 3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ; 4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ； 5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ; 7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03%。
7.生血寶制劑特征圖譜，其特征在于，采用如權(quán)利要求1所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取3.0g生血寶制劑中間體溶解于125ml的水得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為: I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.14% ； 2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ； 4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00%。
8.生血寶制劑特征圖譜，其特征在于，采用如權(quán)利要求1所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取1.2g生血寶膠囊粉末溶解于50ml的50%甲醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為: I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.19% ； 2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43% ； 3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ； 4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ； 5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.28% ； 7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.12%。
9.生血寶制劑特征圖譜，其特征在于，采用如權(quán)利要求1所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取2.4g生血寶片劑溶解于100mL的25%乙醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為: I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.19% ； 2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ； 3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ； 4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ； 5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ； 6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.01% ; 7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03%。
10.生血寶制劑特征圖譜，其特征在于，采用如權(quán)利要求1所述的建立方法獲得，所述特征圖譜通過(guò)取Iml生血寶口服液溶解于25ml的50%乙醇得到的供試品溶液檢測(cè)得到，所述特征圖譜具有7個(gè)特征峰，其中，5號(hào)峰以芍藥苷為參照的參照峰，各個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為: I號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.383±0.019，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21% ; 2號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.672±0.034，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.08% ； 3號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.801 ±0.040，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07% ； 4號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間0.956±0.048，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05% ；.5號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.000±0.000，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；.6號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.143±0.057，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.00% ；.7號(hào)峰:相對(duì)保留時(shí)間1.188±0.059，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.04%。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104020225SQ201410187475
【公開(kāi)日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年5月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月6日
【發(fā)明者】談發(fā)金, 鄭桂林, 柳卓 申請(qǐng)人:湖南康壽制藥有限公司