一種3-氨基哌啶的hplc分析方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】，具體為3-氨基哌啶的一種定性、定量方法及其手性純度的檢測(cè)方法。本發(fā)明采用過量苯甲酰氯為衍生化試劑與3-氨基哌啶進(jìn)行快速雙衍生化反應(yīng)，生成二苯甲酰3-氨基哌啶，然后使用普通反相HPLC-UV對(duì)二苯甲酰3-氨基哌啶進(jìn)行定性和定量分析，采用糖蛋白為填料的手性色譜柱對(duì)二苯甲酰3-氨基哌啶進(jìn)行對(duì)映體過量率測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好、靈敏度高、易于標(biāo)準(zhǔn)化操作。
【專利說明】—種3-氨基哌啶的HPLC分析方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物分析【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及3-氨基哌啶定性、定量方法及其手性純度的高效液相色譜分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]3-氨基哌啶雖然分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)氮原子，但由于氮原子的孤對(duì)電子能量較低，所以3-氨基哌啶在紫外區(qū)幾乎無吸收，因此采用傳統(tǒng)的HPLC-UV方法準(zhǔn)確可靠的對(duì)3-氨基哌啶的定性和定量方法就變得無力。Meek等(W02011160037)采用Crownpak?CR+(150X4.6 mm)手性柱，示差折光檢測(cè)器直接對(duì)3-氨基哌啶進(jìn)行檢測(cè)，其流動(dòng)相為95:5 (V:V)的 HClO4 (pH=l): MeOH，柱溫(TC，流速 0.6 mL/min，(S)-3-氨基哌啶 3.0min出峰，(R)-3-氨基哌啶3.7min出峰。但實(shí)際上示差折光檢測(cè)器對(duì)分析的樣品量要求很大。Watanabe 等人(Tetsuya Assignee Sumitomo Chemical C0., Ltd., Japan 2009)米用氯甲酸丙酯為衍生化試劑對(duì)3-氨基哌啶進(jìn)行衍生，采用CHIRALCEL AS-RH (150X4.6mm)手性柱在254nm下對(duì)衍生物進(jìn)行分析，其流動(dòng)相組成為70:30 (V:V)的水:乙腈，流速 1.0 mL/min, (S)-衍生物 19.1min 出峰，(R)-衍生物 31.5min 出峰。Sakarai 等(Tetrahedron:Asymmetry )米用二對(duì)甲基苯甲酰L-酒石酸為衍生化試劑對(duì)3_氨基哌啶進(jìn)行衍生化使其在紫外254nm下可見，采用GL Science Inertsil 0DS-2(150X4.6 mm)色譜柱，254nm下對(duì)衍生物進(jìn)行分析，其流動(dòng)相為50:50 (V:V)的0.03%氨水溶液(醋酸調(diào) pH=4.9): MeOH,柱溫 40 °C，流速 1.0 mL/min, (S)-衍生物 39.4min 出峰，(R)-衍生物42.5min出峰,能達(dá)到較好的分離效果。
[0003]3-氨基哌啶是利拉利汀的重要中間體，建立并確定3-氨基哌啶的定性、定量方法以及手性μ值測(cè)定方法對(duì)3-氨基哌啶的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)具有重要意義。HPLC檢測(cè)法具有檢測(cè)靈敏度高、精確度高，檢測(cè)所需時(shí)間少，檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性高等優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)前分析化學(xué)中常用檢測(cè)手段。
[0004]相比示差折光檢測(cè)器，紫外檢測(cè)器具有更高的靈敏度和穩(wěn)定性。但由于3-氨基哌啶及其手性異構(gòu)體紫外吸收很弱，使用常規(guī)的紫外檢測(cè)存在末端吸收干擾等問題，通常采用衍生化方法使之紫外吸收增強(qiáng)從而提高檢測(cè)靈敏度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種3-氨基哌啶進(jìn)行定性、定量和對(duì)映體過量率分析的方法。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為:
一種3-氨基哌啶的HPLC定性、定量分析和對(duì)映體過量率分析方法，具體包括如下步
驟:
步驟一、衍生化
將3-氨基哌啶溶于有機(jī)溶劑中，在一定的溫度條件下，以苯甲酰氯為衍生化試劑，調(diào)節(jié)3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩爾比，進(jìn)行衍生化反應(yīng)生成二苯甲酰-3-氨基哌啶，反應(yīng)式見式I ;
步驟二、HPLC分析
采用反相高效液相色譜-紫外光譜檢測(cè)器對(duì)二苯甲酰-3-氨基哌啶進(jìn)行定性、定量分析和對(duì)映體過量率分析，進(jìn)而得到對(duì)3-氨基哌啶進(jìn)行定性、定量分析和對(duì)映體過量率分析；
【權(quán)利要求】
1.一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:具體包括如下步驟: 步驟一、衍生化 將3-氨基哌啶溶于有機(jī)溶劑中，在一定的溫度條件下，以苯甲酰氯為衍生化試劑，調(diào)節(jié)3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩爾比，進(jìn)行衍生化反應(yīng)生成二苯甲酰-3-氨基哌啶，反應(yīng)式見式I; 步驟二、HPLC分析 采用反相高效液相色譜-紫外光譜檢測(cè)器對(duì)二苯甲酰-3-氨基哌啶進(jìn)行定性、定量分析和對(duì)映體過量率分析，進(jìn)而得到對(duì)3-氨基哌啶進(jìn)行定性、定量分析和對(duì)映體過量率分析；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:有機(jī)溶劑選自甲苯、二甲苯、石油醚、四氫呋喃、二氯甲烷和己烷中的一種或兩種以上的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述有機(jī)溶劑的體積與3-氨基哌啶的體積比為0.5~300:1，優(yōu)選的為2~20:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述一定溫度是指從10°C到回流溫度。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述3-氨基哌啶和苯甲酰氯的摩爾比為1:2~1:20。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于所述紫外光譜檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為220~300 nm，優(yōu)選230_260nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:高效液相色譜定性、定量分析所使用的色譜柱是普通反相C18柱分析，流動(dòng)相由水和有機(jī)溶劑組成，有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈中的一種或兩種；有機(jī)溶劑占流動(dòng)相總體積的百分比大于50%并小于100%，優(yōu)選范圍為60%-80%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:高效液相色譜對(duì)映體過量率分析所使用的色譜柱是以糖蛋白為填料的手性柱進(jìn)行分析，糖蛋白可選自牛血清蛋白或卵粘蛋白；流動(dòng)相由磷酸鹽水溶液和有機(jī)溶劑組成溶液，有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇和乙腈中的一種或兩種，有機(jī)溶劑占流動(dòng)相總體積的百分比大于5%并小于15%，優(yōu)選大于6%并小于10%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種3-氨基哌啶的HPLC分析方法，其特征在于:所述有機(jī)溶劑為乙腈。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104007202SQ201410254294
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年6月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月10日
【發(fā)明者】孫鳳霞, 王美玲, 孔琳, 張鳳嬌, 孔飛飛, 賈琳茹 申請(qǐng)人:河北科技大學(xué)