一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥制劑質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，該藥物制劑的原料藥組成為：蠶沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份；該檢測方法通過HPLC法測定1-脫氧野尻霉素的含量對所述藥物制劑進行檢測。本發(fā)明的檢測方法快速、全面、針對性強，有利于對該藥物的質(zhì)量進行有效控制，有助于提高該藥物使用的安全性和穩(wěn)定性。
【專利說明】一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥制劑檢測領(lǐng)域，具體涉及一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，全球范圍內(nèi)，消渴病(糖尿病)的患者約為2億多，其中85%的患者為老年糖尿病患者，并且發(fā)病率有日益增加的趨勢；我國是世界上的糖尿病患者人數(shù)最多的國家之一，僅次于美國。糖尿病嚴重威脅著人類的健康甚至生命。
[0003]中國專利CN101496829A公開了一種治療消渴病的藥物組合物，該藥物組合物的原料藥主要由蠶沙和甘草組成，處方中的蠶沙具有祛風除濕，活血定痛的功效，該藥物組合物具有較好的降血糖的作用，對治療消渴癥具有較好的療效。該文獻中還公開了通過TLC法檢測β -谷留醇、HPLC法檢測甘草酸單銨以及HPLC法檢測派可林酸等方法對該藥物組合物進行質(zhì)量控制。
[0004]但是，隨著對該藥物的深入研究,臨床試驗結(jié)果顯示,該藥物組合物治療糖尿病的有效物質(zhì)主要是蠶沙中含有的生物堿，具有顯著抑制a_葡萄糖苷酶活性的功效，并且所述生物堿的主要活性成分為1-脫氧野尻霉素。然而現(xiàn)有的質(zhì)量控制標準及檢測方法均是僅針對其中含有的派可林酸進行測定，不僅檢測的指標較為單一，而且也不利于從整體上對該藥物的質(zhì)量進行有效控制。因此，建立一種可快速、全面、針對性強的上述藥物組合物的質(zhì)量檢測及質(zhì)量控制的方法具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為此，本發(fā)明所要解決的是現(xiàn)有的治療消渴病的藥物組合物的檢測方法存在檢測指標單一、不利于對該藥物的質(zhì)量進行有效控制的問題，從而提出一種可快速、全面、針對性的對所述治療消渴癥的藥物組合物進行檢測的方法。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):
[0007]本發(fā)明的一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，所述藥物制劑的原料藥組成為:蠶沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份；
[0008]該檢測方法包括如下對1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟:
[0009]精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品5-15mg,加水稀釋制成每mL含0.1-0.5mg的對照品儲備液；精密量取ImL所述對照品儲備液，并精密加入質(zhì)量濃度為1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l(fā)-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混勻并于30_60°C進行水浴反應(yīng)20-40min，隨后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作為對照品溶液；
[0010]取待測藥物制劑研細，并精密稱取0.5-2.0g，加入用濃鹽酸調(diào)pH值為3-4的水30-60mL,攪拌均勻，超聲處理20-30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3_4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至10-20mL ;將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至近干，隨后加水IOmL溶解，超聲處理1-5分鐘，并加水定容至20-30mL，得到供試品儲備液；精密量取ImL所述供試品儲備液，依次加入質(zhì)量濃度為1-3 %的NaHCO3溶液lmL、以及l(fā)_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于30°C進行水浴反應(yīng)40min，隨后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作為供試品溶液；
[0011]照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2%的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:0-8min，A:B為25%:75% ；8-40min, A:B 為 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 為 50%:50% ;45_46min，A:B 為50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 為 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱溫 25°C，檢測波長263nm，理論板數(shù)按1-脫氧野尻霉素峰計算應(yīng)不低于6000 ；
[0012]精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定。
[0013]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，所述對1-脫氧野尻霉素的含量進行測定步驟包括:
[0014]精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品IOmg,加水稀釋制成每mL含0.2mg的對照品儲備液；精密量取ImL所述對照品儲備液，并精密加入質(zhì)量濃度為2%的NaHCO3溶液2mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液2mL，混勻并于50°C進行水浴反應(yīng)40min，隨后以30%的乙腈定容至25mL，作為對照品溶液；
[0015]取待測藥物制劑研細，并精密稱取lg，加入用濃鹽酸調(diào)PH值為3-4的水50mL，攪拌均勻，超聲處理30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3_4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至IOmL ;將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至近干，隨后加水IOmL溶解，超聲處理I分鐘，并加水定容至25mL，得到供試品儲備液；精密量取ImL所述供試品儲備液，依次加入質(zhì)量濃度為2%的NaHCO3溶液lmL、以及l(fā)mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于50°C進行水浴反應(yīng)40min，隨后以30%的乙腈定容至25mL，作為供試品溶液；
[0016]照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2%的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:0-8min，A:B為25%:75% ；8-40min, A:B 為 25%:75%— 50%:50% ；40-45min, A:B 為 50%:50% ;45_46min，A:B 為50%:50%^ 25%:75% ；46-75min, A:B 為 25%:75% ;控制流速 1.0mL/min，柱溫 25°C，檢測波長263nm，理論板數(shù)按1-脫氧野尻霉素峰計算應(yīng)不低于6000 ；
[0017]精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定。
[0018]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，上述1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟中，上述陽離子交換樹脂柱為DOOl-CC型陽離子交換樹脂柱，樹脂體積為50mL，徑高比為1:8。
[0019]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，還包括將上述陽離子交換樹脂進行前處理的步驟，前處理具體包括如下步驟:用等體積的2M鹽酸浸泡DOOl-CC型離子交換樹脂4小時以上；再用4倍樹脂體積的2M鹽酸沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用3倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性，即可。
[0020] 本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，上述1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟中，上述超聲處理的條件為:功率300W，頻率50KHz。
[0021]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，該方法還包括如下鑒別和/或含量測定的步驟中的至少一種:
[0022]A、TLC 鑒別
[0023]取所述待測藥物制劑0.4-0.8g，加無水乙醇3_8mL，于60_90°C水浴回流20_40分鐘，靜置取上清液，置水浴上蒸至0.5-2.0mL，作為供試品溶液；
[0024]另取β -谷甾醇對照品，加無水乙醇制成每ImL中含0.5-2.0mg的對照品溶液；
[0025]照薄層色譜法試驗，精密吸取上述兩種供試品溶液和對照品溶液各1-3 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-19.8:0.2-2.0的三氯甲烷:丙酮為展開劑，展開、取出、晾干，噴以5-15%磷鑰酸溶液，于100-110°C顯色進行鑒別；
[0026]B、HPLC法測定甘草酸單銨鹽的含量
[0027]精密稱定甘草酸單銨鹽對照品5_15mg，以體積比為50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液溶解并稀釋至50mL，作為對照品溶液；
[0028]取待測藥物制劑1-3克，加入體積比為50-70:30_50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液，超聲處理30分鐘，放冷后繼續(xù)加入所述混合溶液定容至25mL，離心取上清液，作為供試品溶液；
[0029]照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸為流動相，檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于2000 ；
[0030]分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各5-15 μ L，注入液相色譜儀，測定；
[0031]C、HPLC法測定派可林酸的含量
[0032]精密稱定派可林酸對照品3-8mg，加水稀釋定容至50mL ;精密量取0.5-2.0mL溶液，依次加水0.5-2.0mL、加質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL以及0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液l_3mL，于60_90°C水浴反應(yīng)0.5-2.0小時，放冷后用pH7.0、0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為對照品溶液；
[0033]精密稱定待測藥物制劑0.3-0.8g，加水振搖后，于60_90°C水浴中加熱20_40分鐘，放冷后加水定容至10mL，搖勻并離心后，精密量取上清液l_3mL，并依次加入質(zhì)量濃度為0.8%的2，4-二硝基氟苯乙腈溶液l-3mL和0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液l_3mL，于60_90°C水浴反應(yīng)0.5-2.0小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為供試品溶液；
[0034]照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為15-25:0.1-1:75-85的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸鈉溶液為流動相，檢測波長為390nm ;理論板數(shù)按派可林酸峰計算應(yīng)不低于2500 ；
[0035]分別精密吸取對照品溶液4-6 μ L與供試品溶液5-15 μ L，注入液相色譜儀，測定。
[0036]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，該方法還包括如下鑒別和/或含量測定的步驟中的至少一種:
[0037]A、TLC 鑒別
[0038]取所述待測藥物制劑0.5g，加無水乙醇5mL，于60°C水浴回流30分鐘，靜置取上清液，置水浴上蒸至lmL，作為供試品溶液；[0039]另取β -谷甾醇對照品，加無水乙醇制成每ImL中含Img的對照品溶液；
[0040]照薄層色譜法試驗，精密吸取上述兩種供試品溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為19.5:0.5的三氯甲烷:丙酮為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%磷鑰酸溶液，于105°C顯色進行鑒別；
[0041]B、HPLC法測定甘草酸單銨鹽的含量
[0042]精密稱定甘草酸單銨鹽對照品10mg，以體積比為60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液溶解并稀釋至50mL，作為對照品溶液；
[0043]取待測藥物制劑2.0克，加入體積比為60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液，超聲處理30分鐘，放冷后繼續(xù)加入所述混合溶液定容至25mL，離心取上清液，作為供試品溶液；
[0044]照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為60:40:I的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸為流動相，檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于2000 ；
[0045]分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定；
[0046]C、HPLC法測定派可林酸的含量
[0047]精密稱定派可林酸對照品5mg，加水稀釋定容至50mL ;精密量取ImL溶液，依次加水lmL、加質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL以及0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液2mL，于60°C水浴反應(yīng)I小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為對照品溶液；
[0048]精密稱定待測藥物制劑0.4g，加水振搖后，于60°C水浴中加熱30分鐘，放冷后加水定容至10mL，搖勻并離心后，精密量取上清液2mL，并依次加入質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL和0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液2mL，于60°C水浴反應(yīng)I小時，放冷后用PH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為供試品溶液；
[0049]照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為21:0.5:79的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸鈉溶液為流動相，檢測波長為390nm ;理論板數(shù)按派可林酸峰計算應(yīng)不低于2500 ；
[0050]分別精密吸取對照品溶液5 μ L與供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定。
[0051]本發(fā)明所述治療消渴病的藥物制劑的相關(guān)處方及制備方法以及已經(jīng)公開的檢測方法詳見中國專利CN101496829A所公開的內(nèi)容。
[0052]本發(fā)明所述藥物制劑的原料藥組成為:蠶沙7150重量份以及甘草137.5重量份；或蠶沙6150重量份以及甘草187.5重量份；或蠶沙7850重量份以及甘草117.5重量份。
[0053]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，上述藥物制劑由如下方法制備:取選定重量份的蠶沙加入2-6倍量50-70%乙醇，浸潰過夜，緩慢加熱至沸，回流1-3次，每次0.5-1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至相對密度為0.95-1.10，加入I倍量水繼續(xù)加熱至沸，冷卻，放置過夜，取上清液，濃縮至相對密度為1.00-1.15的稠膏Α，備用；另取選定重量份的甘草加8-15倍量水煎煮1-3次，每次1-3小時，合并濾液，放置過夜使沉淀，取上清液濃縮至相對密度為1.00-1.15的稠膏B，備用；合并上述稠膏A和B，加入常規(guī)輔料、按照常規(guī)工藝制成臨床可接受的劑型。
[0054]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，上述藥物制劑由如下方法制備:取選定重量份的蠶沙加入4倍量60%乙醇，浸潰過夜，緩慢加熱至沸，回流兩次，每次I小時,濾過,合并濾液，回收乙醇,濃縮至相對密度為1.01-1.06，加入I倍量水繼續(xù)加熱至沸，冷卻，放置過夜，取上清液，濃縮至相對密度為1.06-1.15的稠膏，備用；另取選定重量份的甘草加10倍量水煎煮2次，每次2小時，合并濾液，放置過夜使沉淀,取上清液濃縮至相對密度為1.04-1.15稠膏，備用；合并上述兩稠膏，加入常規(guī)輔料、按照常規(guī)工藝制成臨床可接受的劑型。
[0055]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，上述治療消渴病的藥物制劑為片齊?、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。
[0056]本發(fā)明上述治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，通過HPLC法測定1-脫氧野尻霉素的含量。該檢測方法快速、全面、針對性強，有利于對該藥物的質(zhì)量進行有效控制，有助于提高該藥物使用的安全性和穩(wěn)定性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0057]為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細的說明，其中
[0058]圖1是本發(fā)明實施例2中的1-脫氧野尻霉對照品色譜圖；
[0059]圖2是本發(fā)明實施例2中的缺蠶沙陰性色譜圖；
[0060]圖3是本發(fā)明實施例2中的實施例1制備所得的膠囊樣品色譜圖；
[0061]圖4是本發(fā)明實施例2中的試劑空白色譜圖；
[0062]圖5是本發(fā)明實施例2中的1-脫氧野尻霉素標準曲線圖。
【具體實施方式】
[0063]實施例1膠囊劑的制備
[0064]【處方】香沙7.15kg和甘草137.5g。
[0065]【制法】以上2味，取蠶沙加入4倍量60%乙醇，浸潰過夜，緩慢加熱至沸，回流兩次，每次I小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.01 - 1.06(55°C )，加入I倍量水繼續(xù)加熱至沸，冷卻，放置過夜，取上清液，濃縮至相對密度為1.06-1.15(55°C測)的稠膏，備用。另取甘草用10倍量水煎煮2次，每次2小時，合并濾液，放置過夜使沉淀，取上清液濃縮至相對密度為1.04-1.15 (55°C測)稠膏，備用。合并兩稠膏，按常規(guī)方法加入常規(guī)輔料制成1000粒，即得。
[0066]實施例2HPLC法測定1-脫氧野尻霉素的含量
[0067]I儀器與試藥
[0068]Agilent-1200高效液相色譜儀包括:真空脫氣機，四元梯度泵，自動進樣器，二級管陣列檢測器(DAD), Agilent-Chemistation數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(Agilent公司)；超純水器(MilliQ-Gradient型);超聲波發(fā)生器(昆山KQ-300E型)。
[0069]1-脫氧野尻霉素對照品(購于SIGMA公司)，芴甲氧羰酰氯(購于SIGMA公司)，乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。
[0070]2方法與結(jié)果[0071]2.1對照品溶液、供試品溶液與1-脫氧野尻霉素陰性樣品溶液的制備
[0072]2.1.1對照品溶液的制備
[0073]取1-脫氧野尻霉素對照品約10mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每HiL含0.2mg的對照品溶液。精密量取lmL，至25mL量瓶中，加入2% NaHCO3溶液2mL,振搖10秒,精密加入2mg/mL的荷甲氧羰酰氯乙腈溶液(FMOC-Cl) 2mL,振搖10秒，50°C水浴反應(yīng)40min，用30%乙腈定容至25mL，即得。
[0074]2.1.2供試品溶液的制備
[0075]DOOl-CC型陽離子交換樹脂的前處理:順次用等體積的2M鹽酸浸泡DOOl-CC型離子交換樹脂4小時以上，再用4倍樹脂體積的2M鹽酸沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；再用3倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性，備用。
[0076]取實施例1制備所得的膠囊劑的內(nèi)容物研細，取約lg，精密稱定，置IOOmL燒杯中，加用濃鹽酸調(diào)PH值為3-4的水50mL，攪拌均勻，超聲處理(功率300W，頻率50KHz) 30min,離心10min (4000轉(zhuǎn)/min)，分取上清液，殘渣加pH值為3_4的水適量洗滌，離心10min (4000轉(zhuǎn)/min)，合并上清液，濃縮至約10mL。置已處理過的DOOl-CC型陽離子交換樹脂柱(樹脂體積50mL,徑(2.5cm)高比:1:8，H+)，先用60mL水洗脫，棄去洗脫液，再用0.5M氨水600mL洗脫(洗脫速度為2.5mL/min)，收集氨水洗脫液，濃縮至近干，加水10mL，超聲處理(功率300W，頻率50KHz)l分鐘，轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取lmL，至25mL量瓶中，加入2% NaHCO3溶液lmL，振搖10秒，精密加入lmL/min的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液(FMOC-Cl) 4mL，振搖10秒，50°C水浴反應(yīng)40min，用30%乙腈定容至25mL，即得。
[0077]2.1.3陰性樣品溶液的制備
[0078]按實施例1的處方取甘草藥材，按2.1所列供試品溶液的制備方法制備不含蠶沙的陰性樣品溶液。
[0079]2.1.4空白樣品溶液制備
[0080]按照2.1所列供試品溶液的制備方法，制備不含所述供試品的空白樣品溶液。
[0081]2.1.5空白試驗
[0082]用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；選用Agilent Hypersil 0DS-C18色譜柱(4.0mmX 250mm，5 μ m)，二級管陣列檢測器(檢測波長263nm);流動相:乙睛-0.2%磷酸溶液；流速:1.0mL/min，進樣量20 μ L，理論板數(shù)(按1_脫氧野尻霉素峰計算)應(yīng)不低于6000。梯度洗脫如下:
[0083]
【權(quán)利要求】
1.一種治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述藥物制劑的原料藥組成為:蠶沙6000-8000重量份以及甘草100-200重量份； 該檢測方法包括如下對1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟: 精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品5-15mg,加水稀釋制成每mL含.0.1-0.5mg的對照品儲備液；精密量取ImL所述對照品儲備液，并精密加入質(zhì)量濃度為.1-3%的NaHCO3溶液l-4mL以及l(fā)-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液l_4mL，混勻并于.30_60°C進行水浴反應(yīng).20-40min，隨后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作為對照品溶液； 取待測藥物制劑研細，并精密稱取0.5-2.0g，加入用濃鹽酸調(diào)pH值為3-4的水.30-60mL,攪拌均勻，超聲處理20-30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3_4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至10-20mL ;將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至.近干，隨后加水IOmL溶解，超聲處理1-5分鐘，并加水定容至20-30mL，得到供試品儲備液；精密量取ImL所述供試品儲備液，依次加入質(zhì)量濃度為1-3%的NaHCO3溶液lmL、以及.l_3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于30°C進行水浴反應(yīng)40min，隨后以30-60%的乙腈定容至20_30mL，作為供試品溶液； 照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2%的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:0-8min，A:B為.25%:75% ；8-40min,A:B 為 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 為 50 %:50 % ;45_46min，A:B 為 50 %:.50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 為 25%:75% ;控制流速 .1.0mL/min，柱溫 25°C，檢測波長263nm，理論板數(shù)按1-脫氧野尻霉素峰計算應(yīng)不低于6000 ； 精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述對.1-脫氧野尻霉素的含量進行測定的步驟包括: 精密稱定1-脫氧野尻霉素對照品IOmg,加水稀釋制成每mL含0.2mg的對照品儲備液；精密量取ImL所述對照品儲備液，并精密加入質(zhì)量濃度為2%的NaHCO3溶液2mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液2mL，混勻并于50°C進行水浴反應(yīng).40min，隨后以30%的乙腈定容至25mL，作為對照品溶液； 取待測藥物制劑研細，并精密稱取lg，加入用濃鹽酸調(diào)PH值為3-4的水50mL，攪拌均勻，超聲處理30min，并離心取上清液；殘渣加pH值為3_4的水適量洗滌，離心合并上清液，并濃縮至IOmL ;將濃縮液置于陽離子交換樹脂柱，先用水洗脫，收集并棄去水洗脫液，再用.0.5M氨水洗脫，并收集氨水洗脫液，濃縮至近干，隨后加水IOmL溶解，超聲處理I分鐘，并加水定容至25mL，得到供試品儲備液；精密量取ImL所述供試品儲備液，依次加入質(zhì)量濃度為.2%的NaHCO3溶液lmL、以及l(fā)mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混勻并于50°C進行水浴反應(yīng)40min，隨后以30%的乙腈定容至25mL，作為供試品溶液； 照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙睛為流動相A、以0.2%的磷酸溶液為流動相B按照如下程序進行梯度洗脫:0-8min，A:B為.25%:75% ；8-40min,A:B 為 25 %:75 % — 50 %:50 % ；40-45min, A:B 為 50 %:50 % ;45_46min，A:B 為 50 %:.50%- 25%:75% ；46-75min, A:B 為 25%:75% ;控制流速 .1.0mL/min，柱溫 25°C，檢測波長263nm，理論板數(shù)按1-脫氧野尻霉素峰計算應(yīng)不低于6000 ；精密吸取所述對照品溶液和供試品溶液各20 μ L，注入液相色譜儀，測定。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述1-脫氧野尻霉素的含量測定步驟中，所述陽離子交換樹脂柱為D001-CC型陽離子交換樹脂柱，樹脂體積為50mL，徑高比為1:8。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，還包括將所述陽離子交換樹脂進行前處理的步驟，所述前處理具體包括如下步驟:用等體積的2M鹽酸浸泡D001-CC型離子交換樹脂4小時以上；再用4倍樹脂體積的2M鹽酸沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用5倍樹脂體積的2M NaOH溶液沖洗樹脂，水洗至中性；用3倍樹脂體積的2M鹽酸溶液沖洗樹脂，水洗至中性，即可。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，該方法還包括如下鑒別和/或含量測定的步驟中的至少一種: A、TLC鑒別 取所述待測藥物制劑0.4-0.8g，加無水乙醇3-8mL，于60_90°C水浴回流20-40分鐘，靜置取上清液，置水浴上蒸至0.5-2.0mL,作為供試品溶液； 另取β -谷甾醇對照品，加無水乙醇制成每ImL中含0.5-2.0mg的對照品溶液； 照薄層色譜法試驗，精密吸取上述兩種供試品溶液和對照品溶液各1_3μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-19.8:0.2-2.0的三氯甲烷:丙酮為展開劑，展開、取出、晾干，噴以5-15%磷鑰酸溶液，于100-110°C顯色進行鑒別； B、HPLC法測定甘草酸單銨鹽的含量 精密稱定甘草酸單銨鹽對照品5-15mg，以體積比為50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液溶解并稀釋至50mL，作為對照品溶液； 取待測藥物制劑1-3克，加入體積比為50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液，超聲處理30分鐘，放冷后繼續(xù)加入所述混合溶液定容至25mL，離心取上清液，作為供試品溶液； 照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為50-70:30-50:0.5-1.5的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸為流動相，檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于2000 ； 分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各5-15 μ L，注入液相色譜儀，測定； C、HPLC法測定派可林酸的含量 精密稱定派可林酸對照品3-8mg，加水稀釋定容至50mL ;精密量取0.5-2.0mL溶液，依次加水0.5-2.0mL、加質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL以及0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液l_3mL，于60-90°C水浴反應(yīng)0.5-2.0小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為對照品溶液； 精密稱定待測藥物制劑0.3-0.8g，加水振搖后，于60-90°C水浴中加熱20-40分鐘，放冷后加水定容至10mL，搖勻并離心后，精密量取上清液l_3mL，并依次加入質(zhì)量濃度為.0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液l_3mL和0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液l_3mL，于60_90°C水浴反應(yīng)0.5-2.0小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為供試品溶液；照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為15-25:.0.1-1 =75-85的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸鈉溶液為流動相，檢測波長為.390nm ;理論板數(shù)按派可林酸峰計算應(yīng)不低于2500 ； 分別精密吸取對照品溶液4-6 μ L與供試品溶液5-15 μ L，注入液相色譜儀，測定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，該方法還包括如下鑒別和/或含量測定的步驟中的至少一種: A、TLC鑒別 取所述待測藥物制劑0.5g，加無水乙醇5mL，于60°C水浴回流30分鐘，靜置取上清液，置水浴上蒸至lmL，作為供試品溶液； 另取β -谷甾醇對照品，加無水乙醇制成每ImL中含Img的對照品溶液； 照薄層色譜法試驗，精密吸取上述兩種供試品溶液和對照品溶液各2 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為19.5:0.5的三氯甲烷:丙酮為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%磷鑰酸溶液，于105°C顯色進行鑒別； B、HPLC法 測定甘草酸單銨鹽的含量 精密稱定甘草酸單銨鹽對照品10mg，以體積比為60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液溶解并稀釋至50mL，作為對照品溶液； 取待測藥物制劑2.0克，加入體積比為60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸混合溶液，超聲處理30分鐘，放冷后繼續(xù)加入所述混合溶液定容至25mL，離心取上清液，作為供試品溶液； 照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為60:40:1的甲醇-0.2mol/L醋酸銨-冰醋酸為流動相，檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸銨峰計算應(yīng)不低于2000 ； 分別精密吸取所述對照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定； C、HPLC法測定派可林酸的含量 精密稱定派可林酸對照品5mg，加水稀釋定容至50mL ;精密量取ImL溶液，依次加水.lmL、加質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL以及0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液.2mL,于60°C水浴反應(yīng)I小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為對照品溶液； 精S稱定待測藥物制劑0.4g,加水振搖后，于60 C水浴中加熱30分鐘，放冷后加水定容至10mL，搖勻并離心后，精密量取上清液2mL，并依次加入質(zhì)量濃度為0.8%的2，4- 二硝基氟苯乙腈溶液2mL和0.5mol/L的碳酸氫鈉溶液2mL，于60°C水浴反應(yīng)I小時，放冷后用pH7.0,0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液定容至10mL，作為供試品溶液； 照高效液相色譜法試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比為21:0.5:79的乙腈-二甲基甲酰胺-0.025mol/L醋酸鈉溶液為流動相，檢測波長為390nm ;理論板數(shù)按派可林酸峰計算應(yīng)不低于2500 ； 分別精密吸取對照品溶液5 μ L與供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述藥物制劑的原料藥組成為:蠶沙7150重量份以及甘草137.5重量份；或蠶沙6150重量份以及甘草187.5重量份；或蠶沙7850重量份以及甘草117.5重量份。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述藥物制劑由如下方法制備:取選定重量份的蠶沙加入2-6倍量50-70%乙醇，浸潰過夜，緩慢加熱至沸，回流1-3次，每次0.5-1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇,濃縮至相對密度為0.95-1.10，加入I倍量水繼續(xù)加熱至沸，冷卻，放置過夜，取上清液，濃縮至相對密度為1.00-1.15的稠膏A，備用；另取選定重量份的甘草加8-15倍量水煎煮1_3次，每次1_3小時，合并濾液，放置過夜使沉淀，取上清液濃縮至相對密度為1.00-1.15的稠膏B，備用；合并上述稠膏A和B，加入常規(guī)輔料、按照常規(guī)工藝制成臨床可接受的劑型。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述藥物制劑由如下方法制備:取 選定重量份的蠶沙加入4倍量60%乙醇，浸潰過夜，緩慢加熱至沸，回流兩次，每次I小時，濾過，合并濾液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.01-1.06，加入I倍量水繼續(xù)加熱至沸，冷卻，放置過夜，取上清液，濃縮至相對密度為1.06-1.15的稠膏，備用；另取選定重量份的甘草加10倍量水煎煮2次，每次2小時，合并濾液，放置過夜使沉淀，取上清液濃縮至相對密度為1.04-1.15稠膏，備用；合并上述兩稠膏，加入常規(guī)輔料、按照常規(guī)工藝制成臨床可接受的劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一所述的治療消渴病的藥物制劑的檢測方法，其特征在于，所述治療消渴病的藥物制劑為片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、蜜煉丸劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。
【文檔編號】G01N30/90GK104007205SQ201410264670
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月13日
【發(fā)明者】潘杰, 于娟, 吳麗璇, 陳啟蘭 申請人:漳州片仔癀藥業(yè)股份有限公司