一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法，采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，流動(dòng)相：甲醇，流速0.8-1.2ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：204nm；柱溫：25-35℃；檢測(cè)時(shí)間：30min；進(jìn)樣量：10μl。本發(fā)明的從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法中，進(jìn)樣量與其峰面積積分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，樣品穩(wěn)定性、儀器精密度、方法重現(xiàn)性以及方法專(zhuān)屬性均符合要求，為以后角鯊烯快速、準(zhǔn)確定量奠定了基礎(chǔ)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化學(xué)分析【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯 含量的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 香露兜葉系露兜樹(shù)科露兜屬香露兜（Pandanus amaryllifolius Roxb)的新鮮葉 片（別名：香蘭葉、板蘭香、斑蘭葉等）。香露兜為常綠草本，葉長(zhǎng)約30cm，寬約1· 5cm，葉緣 偶見(jiàn)微刺，葉尖刺稍密，葉背面先端有微刺，葉鞘有窄白膜，花果未見(jiàn)。原產(chǎn)地為印尼馬古魯 群島。研究發(fā)現(xiàn)，香露兜適應(yīng)我國(guó)南部酸性赤紅壤，但因受溫度限制,僅適合在我國(guó)亞熱帶 南緣至熱帶區(qū)域生長(zhǎng)。
[0003]角鱉烯是天然的鏈狀三萜化合物，是重要的天然活性物質(zhì)，主要的來(lái)源依然是深 海魚(yú)類(lèi)，在植物中的分布也十分廣泛，但含量不高。如在橄欖果實(shí)、棕櫚果實(shí)的植物油中含 量相對(duì)較高，而在其它植物油亦可檢測(cè)到，但含量一般都很低。
[0004] 任竹君等采用水蒸氣蒸餾（SD)法、尹桂豪等分簡(jiǎn)單地采用超臨界C02萃取 (SFE-C02)法進(jìn)行提取，通過(guò)氣相色譜質(zhì)譜（GC-MS)聯(lián)用分析法對(duì)香露兜葉揮發(fā)油化學(xué)成分 研究，結(jié)果均鑒定出相對(duì)含量較高的角鯊烯，分別為21. 03%、4. 229%。
[0005] Tan Μ· A.等在同科屬植物露兜樹(shù)（Pandanus tectorius Soland. var. laevis)葉 中提取分離得到了角鯊烯化合物，并通過(guò)MABA試驗(yàn)表明其具有抗結(jié)核作用的生物活性。 [0006] 至今為止，對(duì)香露兜揮發(fā)性成分系統(tǒng)地分析報(bào)道也甚少。因此非常有必要對(duì)香露 兜揮發(fā)性成分進(jìn)行深入地提取分離、系統(tǒng)地定性定量分析，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)香露兜葉更廣的 應(yīng)用價(jià)值提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明提供了一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法。
[0008]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0009]本發(fā)明的從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法采用高效液相色譜法進(jìn) 行測(cè)定，流動(dòng)相：甲醇，流速0· 8-1. 2ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：204nm ;柱溫：25-35°C ;檢測(cè)時(shí)間： 30min ;進(jìn)樣量：1〇 μ 1。
[0010] 流動(dòng)相的流速優(yōu)選為1. 〇ml/min。
[0011] 柱溫優(yōu)選：30°C。
[0012] 本發(fā)明的積極效果如下：
[0013]本發(fā)明的從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鳘稀含量的方法中,進(jìn)樣量與其峰面積積 分值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，樣品穩(wěn)定性、儀器精密度、方法重現(xiàn)性以及方法專(zhuān)屬性均符合要 求，為以后角鯊烯快速、準(zhǔn)確定量奠定了基礎(chǔ)。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1是角鯊烯對(duì)照品溶液光譜圖。
[0015] 圖2是角鯊烯供試品溶液光譜圖。
[0016]圖3是香露兜超臨界提取物供試品色譜圖。
[0017] 圖4是角鯊烯對(duì)照品色譜圖。
[0018] 圖5是空白對(duì)照色譜圖。
[0019] 圖6是角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。

【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面的實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] 1儀器與材料
[0023] 1. 1 儀器
[0024] DIONEX3〇00型高效液相色譜（HPLC)儀，DAD檢測(cè)器、Chromeleon色譜工作站（美 國(guó)戴安公司）；
[0025] AL104型電子天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）；
[0026] XS205DualRange型電子天平（梅特勒-托利多上海儀器有限公司）；
[0027] HN-1006型超聲波清洗機(jī)（廣州市華南超聲設(shè)備有限公司）；
[0028] HK-08B型流水式中藥粉碎機(jī)（廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司）；
[0029]國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩（浙江飛達(dá)金屬砂篩廠）
[0030] 1. 2 材料
[0031] 甲醇（HPLC級(jí)，Merck有限公司）；
[0032] 角鯊烯對(duì)照品（14〇721-200601，中國(guó)食品藥品檢定研究院供鑒別與含量測(cè)定，含 量 99· 5% );
[0033] C02 (食品級(jí)，純度>99. 95 %，購(gòu)自佛山市順德區(qū)佛倫氣體有限公司）；香露兜 葉（批號(hào)：20130114B，2〇13年1月購(gòu)于海南省萬(wàn)寧市興隆華僑農(nóng)場(chǎng)，經(jīng)鑒定為香露兜 (Pandanus amaryllfoliu Roxb)的新鮮葉。
[0034] 2方法與結(jié)果
[0035] 2.1對(duì)照品溶液制備
[0036] 取角鯊烯對(duì)照品約0. Olg，精密稱(chēng)定，加甲醇溶解，并定容至5ml棕色量瓶中，作為 角鯊烯對(duì)照品貯備液。
[0037] 精密移取角鯊烯對(duì)照品貯備液3ml，置25ml棕色量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，用 微孔濾膜（0.45 μ m)濾過(guò)，作為角鯊烯對(duì)照品溶液。
[0038] 2. 2供試品溶液制備
[0039] 取香露兜超臨界C02萃取物約0· 0故，精密稱(chēng)定，加甲醇超聲使溶解，并定容至 25ml棕色量瓶中，用微孔濾膜（0.45 μ m)濾過(guò)，作為供試品溶液。
[0040] 2. 3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
[0041]角鳘烯對(duì)照品的紫外波長(zhǎng)圖譜顯示角鯊烯最大吸收波長(zhǎng)為203. 9nm，香露兜揮發(fā) 性成分中角鯊烯的紫外波長(zhǎng)圖譜與對(duì)照品基本相符，最大吸收波長(zhǎng)為204. 6nm。認(rèn)為在該色 譜條件下角鯊烯的最大吸收波長(zhǎng)為204nm。如圖1、2所示。
[0042] 2. 4流動(dòng)相的選擇
[0043] 角鯊烯為不飽和的烯烴化合物，采用反相色譜檢測(cè)超臨界C02萃取的香露兜性成 分中角鯊烯含量，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，角鯊烯成分分離采用甲醇：乙腈（60:40)、
[0044] 甲醇：乙腈（40:60)、甲醇：水（99:1)等流動(dòng)相；調(diào)整流動(dòng)相比例，得出在甲醇時(shí) 有較好的分離效果，對(duì)照品保留時(shí)間為18. 040min，樣品保留時(shí)間為18. 047min，兩者保留 時(shí)間基本一致。色譜圖如圖3所示。
[0045] 2. 5柱溫選擇
[0046] 實(shí)驗(yàn)就柱溫進(jìn)行考察，以選擇合適的柱子溫度?？疾斓臏囟扔?5°C，30°C， 35°C。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，隨著柱溫升高，保留時(shí)間縮短，保留時(shí)間分別為20.07min、18. 12min、 16. 47min。在25--35°C范圍內(nèi)，色譜峰的分離度良好，柱溫對(duì)角鯊烯的分析并無(wú)顯著影 響，如表1。綜合考慮，選擇30°C為適宜溫度。
[0047] 表1柱溫對(duì)角鯊烯峰面積的影響
[0048]

【權(quán)利要求】
1. 一種從香露兜揮發(fā)性成分中測(cè)定角鯊烯含量的方法，其特征在于：采用高效液相色 譜法進(jìn)行測(cè)定，流動(dòng)相：甲醇，流速0. 8-1. 2ml/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)：204nm ;柱溫：25-35°C ;檢測(cè) 時(shí)間：30min ;進(jìn)樣量：10μ 1。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：流動(dòng)相的流速為1. Oml/min。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：柱溫：30°C。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104297358SQ201410336062
【公開(kāi)日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】馬晉芳, 陳小凱, 葛發(fā)歡, 史慶龍, 張湘東 申請(qǐng)人:廣州中大南沙科技創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)園有限公司, 中山大學(xué)