預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的模型及方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的數(shù)學模型及方法。所述數(shù)學模型為：P＝1/(1+Y)，P為巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率，且P為6個月內(nèi)的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時：Y＝exp(4.092+2.073*X12-2.719*X14-2.58*X17+3.039*X19)；P為6～12個月的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時，Y＝e?xp(2.528+1.633*X8+0.971*X12-1.517*X17)。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：從多因素、多蛋白綜合分析巨大肝癌近期復發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)的多個指標，并通過預測模型達到預測術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移的效果，對臨床實踐及治療方案個體化選擇具有重大意義。
【專利說明】預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的模型及方法
(—)

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的數(shù)學模型及方法。
(二)

【背景技術(shù)】
[0002]肝細胞癌位居全球惡性腫瘤發(fā)病率第5位，死亡率居全球惡性腫瘤死因的第3位(Jemal A, Siegel R, Ward E, et al.Cancer statistics,2008.Cancer J Clin,2008 ；58:71-96)，我國是肝癌大國，每年大約有45萬的肝癌新發(fā)病例，并已成為癌癥導致患者死亡的第2位殺手(張偉東，苗國軍；我國惡性腫瘤死亡率流行病學特征分析；中國健康教育，2009，25:246-248)，尤其是巨大肝癌。
[0003]巨大肝癌指的是直徑大于1cm的肝癌亞型。目前手術(shù)切除治療是巨大肝癌患者的首選方案，但術(shù)后易轉(zhuǎn)移復發(fā)、預后差是巨大肝癌治療效果差且致死率高的主要原因。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，巨大肝癌術(shù)后5年之內(nèi)復發(fā)的概率達到70%。研究表明，巨大肝癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移最早可在術(shù)后2個月以內(nèi)；術(shù)后I?2年為復發(fā)轉(zhuǎn)移的高發(fā)期。Shimul等報道56例巨大肝癌根治術(shù)后復發(fā)病人，I年內(nèi)復發(fā)21例(38% )，1年后復發(fā)31例(55%);并發(fā)現(xiàn)復發(fā)后生存率與復發(fā)時間密切相關(guān):術(shù)后I年內(nèi)復發(fā)者3年生存率顯著低于I年后復發(fā)者(參考文獻:Shimul A Shah, Paul D Greig, Steven Gallinger, et al.Factors associatedwith early recurrence after resect1n for hepatocellular carcinoa and outcomes.J Am Coll Surg, 2005，10(5):275-283.)。Hayashi等觀察了肝癌術(shù)后復發(fā)時間與預后間的關(guān)系，I年內(nèi)復發(fā)患者1、3、5年生存率分別為75.7%、36.6%和28.3%，遠低于2年后復發(fā)的生存率(1、3、5年生存率分別為100%、92.2%和68.6% )(參考文獻=Hayashi M，Shimizu T,Hirokawa F,et al.Clinicopathological risk factors for recurrence withone year after initial hepatectomy for hepatocellular carcinoma.J Am Surg,2011,77(5):572-578.)?？梢姼伟┬g(shù)后I年內(nèi)復發(fā)的比例較高，且對生存率有明顯影響。但復發(fā)轉(zhuǎn)移的機制還沒有被明確闡明使臨床缺少巨大肝癌預后判斷指標和相應的治療手段。
[0004]目前，有關(guān)巨大肝癌術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素分析比較多，但多數(shù)以單因素進行，這雖然在一定程度上給出了相對準確的判定，但仍屬局限、片面；而肝癌術(shù)后復發(fā)是一個多因素的復雜的病理過程，在此過程中，蛋白分子特征決定了肝癌的生物學行為，迄今為止，尚未有相關(guān)文獻報道巨塊型肝癌術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移的多因素、多蛋白的數(shù)學預測模型，若能從多因素、多蛋白綜合分析肝癌復發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)的多個指標，建立巨大肝癌復發(fā)轉(zhuǎn)移的數(shù)學預測模型，為臨床個體化治療、預測術(shù)后療效提供理論和實驗依據(jù)。
(三)


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明目的是提供一種預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的數(shù)學模型及方法。
[0006]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0007]—種用于預測巨大肝癌患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的數(shù)學模型P = 1/(1+Y)，P為巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率，且P為6個月內(nèi)的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時:Y = exp (4.092+2.073*Χ12-2.719*Χ14-2.58*Χ17+3.039*Χ19) ;Ρ 為 6 ~12 個月的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時，Y = e xp (2? 528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17);其中Χ8為術(shù)中癌栓，若有術(shù)中癌栓則Χ8 = 1、若無則X8 = O ；X12為腫瘤分級，腫瘤分級為I級時X12 = UI1-1II級時X12 = 2、IV級時X12=3 ；X14為IQGAP-2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X14 = 2、低表達時X14 = I ；X17為S100A12蛋白免疫組化表達情況，高表達時X17 = 2、低表達時X17 = I ；X19為AP0A2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X19 = 2、低表達時X19 = I。
[0008]本發(fā)明人通過收集巨塊型肝癌根治性切除術(shù)的標本，采用病例對照研究方法，所有病例手術(shù)切除前未經(jīng)任何放療和化療，并通過病理證實為肝細胞肝癌。根據(jù)6個月內(nèi)復發(fā)組(A組)及6~12個月復發(fā)組(B組)為實驗組，12個月內(nèi)未復發(fā)組作為對照組，對其臨床病理因素進行單因素、多因素分析(各因素統(tǒng)計變量賦值見下表)，篩選出影響巨塊型肝癌術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移的獨立危險因素。結(jié)合通過蛋白組學篩選出復發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異蛋白，通過免疫組織化學檢測蛋白的相對表達量，通過多因素logistic回歸分析，得出一個預測巨塊型肝癌術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移的數(shù)學方程，通過回代性分析判斷該方程的靈敏度、準確度、特異性，判斷該方程能夠預測巨塊型肝癌術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移。
[0009]各因素的統(tǒng)計變量賦值
[0010]

【權(quán)利要求】
1.一種用于預測巨大肝癌患者術(shù)后復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的數(shù)學模型P = ι/α+γ)，P為巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率，且P為6個月內(nèi)的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時:Y = exp (4.092+2.073*Χ12-2.719*Χ14-2.58*Χ17+3.039*Χ19) ；Ρ 為 6-12 個月的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率時，Y = e xp (2.528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17);其中 Χ8 為術(shù)中癌栓，若有則 Χ8 = 1、若無則 X8 = O ；X12 為腫瘤分級，I 級時 X12 = 1、I1-1II 級時 X12 = 2、IV 級時 X12 = 3 ；X14 為 IQGAP-2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X14 = 2、低表達時X14 = I ；X17為S100A12蛋白免疫組化表達情況，高表達時X17 = 2、低表達時X17 = I ；X19為APOA2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X19 = 2、低表達時X19 = I。
2.一種預測巨大肝癌患者術(shù)后近期復發(fā)轉(zhuǎn)移概率的方法，所述方法包括: (1)取巨大肝癌患者活檢組織或術(shù)中、術(shù)后的病理取材作為病理標本，并對病理標本的術(shù)中癌栓、腫瘤分級情況進行記錄分析； (2)采用免疫組化SP染色法，分別獲得病理標本IQGAP-2蛋白的免疫組化評分、S100A12蛋白的免疫組化評分和APOA12蛋白的免疫組化評分； (3)將上述取值分別代入6個月內(nèi)的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率數(shù)學模型P= I/ (1+Y), Y = exp (4.092+2.073*X12-2.719*X14_2.58*X17+3.039*X19);和 6 ?12 個月的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率數(shù)學模型 P = 1/(1+Y)，Y = e xp (2.528+1.633*Χ8+0.971*Χ12_1.517*Χ17)，分別進行計算獲得 6個月內(nèi)和6?12個月的復發(fā)轉(zhuǎn)移概率；其中Χ8為術(shù)中癌栓，若有則Χ8 = 1、若無則Χ8 =O ；Χ12 為腫瘤分級，I 級時 Χ12 = UI1-1II 級時 Χ12 = 2、IV 級時 Χ12 = 3 ；X14 為 IQGAP-2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X14 = 2、低表達時X14 = I ；X17為S100A12蛋白免疫組化表達情況，高表達時X17 = 2、低表達時X17 = I ；X19為APOA2蛋白免疫組化表達情況，高表達時X19 = 2、低表達時X19 = I。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述免疫組化SP染色法方法如下: (a)取病理標本制備肝癌組織石蠟切片，60°C烤箱過夜； (b)切片脫臘；二甲苯I:10min ;二甲苯 II:10min ;二甲苯 III:10min ； (c)切片水化；依次浸泡:無水乙醇:3min;90%乙醇:3min ;80%乙醇:3min ;75%乙醇:3min ； (d)PBS清洗3次,每次5min ； (e)EDTA抗原高壓修復:切片放入0.0lM EDTA修復液浸泡，沸水浴5min，冷卻至室溫，PBS清洗3次,每次5min ； (f)加入300μ L的3%過氧化氫水溶液，370C 1min, PBS清洗3次，每次5min ； (g)加入300μ L的3% BSA封閉液，37°C Ih ；PBS清洗3次，每次5min ； (h)加入一抗，相應蛋白的一抗抗體濃度如下:IQGAP-2蛋白抗體濃度為1:300，S100A12蛋白的抗體濃度為1:50，APOA2蛋白抗體濃度為1:300 ;4°C冰箱放置16h后取出，室溫復溫15min，然后PBS洗4次，每次5min ； (i)滴加二抗，所述的二抗為辣根過氧化物酶標記的相應二抗，37°C45min ;PBS洗4次，每次5min ； (j)PBS洗3次，每次5min ；DAB顯色2?lOmin，鏡下觀察；雙蒸水洗止顯色，蘇木素復染10s，用自來水沖洗浸泡； (k)脫水；依次浸泡:75%乙醇:2min ;80%乙醇:2min ;90%乙醇:2min ;無水乙醇:2min ； (I)用電吹風吹干，加入中性樹膠，蓋玻片覆蓋； (m)以染色強度和陽性細胞率的得分之和作為判斷標準:根據(jù)染色強度分為四級，細胞無染色記O分，弱染色記I分，中等染色記2分，強染色記3分；根據(jù)陽性細胞率也分為四級，O彡陽性細胞率彡5%記為O分，5% <陽性細胞率彡25%記為I分，25% <陽性細胞率(50%記為2分，陽性細胞率> 50%記為3分；上述兩項積分相加，O分為陰性，I?2分為弱陽性，3?4分為中等陽性，5?6分為強陽性，將陰性和弱陽性定義為低表達，中等陽性和強陽性則為高表達。
【文檔編號】G01N33/574GK104200060SQ201410368338
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月30日
【發(fā)明者】劉景豐, 黃愛民, 劉小龍, 林承杰 申請人:福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院, 福州市傳染病醫(yī)院