一種測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，采用液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)測(cè)定，先取待測(cè)樣品，加入一定量的有機(jī)溶媒蛋白沉淀劑進(jìn)行蛋白沉淀，預(yù)處理后，經(jīng)色譜柱分離，用質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，本發(fā)明方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便，適合于測(cè)定血漿中球毛殼堿甲的濃度。
【專利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方 法。 一種測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法

【背景技術(shù)】
[0002] 球毛殼堿甲（Chaetoglobins A)是從藥用植物白茅的內(nèi)生真菌球毛殼菌 (Chaetomium globosum)中分離得到的生物堿類新化合物。體外實(shí)驗(yàn)證明Chaetoglobins A具有顯著的抗腫瘤作用，能抑制原癌基因表達(dá)及癌細(xì)胞擴(kuò)散，對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和 結(jié)腸癌細(xì)胞株SW1116均有明顯抑制，是一種具有良好開(kāi)發(fā)前景的新藥源化合物。其結(jié)構(gòu)式 如下：
[0003]

【權(quán)利要求】
1. 一種測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，血漿樣品經(jīng)預(yù)處理后經(jīng)液質(zhì) 聯(lián)用系統(tǒng)檢測(cè)其濃度，具體方法包括如下步驟： (1) 血漿樣品預(yù)處理：取血漿樣品，加入內(nèi)標(biāo)替硝唑甲醇溶液和乙酸水溶液，加入甲醇 或乙腈進(jìn)行蛋白沉淀，離心后取上清液； (2) 將步驟（1)預(yù)處理后的血漿樣品進(jìn)行液相色譜分離：色譜條件中色譜柱為安捷倫 ZORBAX SB-C18柱；流動(dòng)相：體積比為50:50的甲醇與水；流速：0. 2-0. 5mL · min-1 ;柱溫： 30-40°C ;進(jìn)樣量10 μ L ;洗脫方式為等度洗脫； (3) 質(zhì)譜測(cè)定，條件為：離子源：電噴霧離子化電離源ESI ;離子檢測(cè)方式：多反應(yīng) 監(jiān)測(cè)MRM;離子極性：正離子；毛細(xì)管電壓：3.0KV;離子源溫度：80-120°C ;脫溶劑溫度： 340-360°C ;脫溶劑氣：400L/h ;錐孔電壓：45V ;錐孔氣：35L/h ;脫溶劑氣和錐孔氣均為高純 氮?dú)?；檢測(cè)對(duì)象的離子通道：球毛殼堿甲，[M_H]+，m/z637. 30 - 549. 20，Dwell0. 5，Cone45， Collision Energy35 ;內(nèi)標(biāo)替硝唑，[M-H]+，m/z248. 20 - 121. 00, DwellO. 5, Cone30， Collision Energyl5 ； (4) 計(jì)算：采用內(nèi)標(biāo)法，以球毛殼堿甲和內(nèi)標(biāo)替硝唑的峰面積比值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 計(jì)算球毛殼堿甲的濃度。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，步驟（1) 中，取血漿樣品50μ L，加入內(nèi)標(biāo)1000ng · ml/1替硝唑甲醇溶液10μ L和20v/v%乙酸水溶 液5 μ L，加入190 μ L甲醇或乙腈，振蕩3min，12000rpm離心10min，離心后取上清液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，步驟（2) 中，色譜柱長(zhǎng)度為150mm，內(nèi)徑為2. 1mm，填料粒徑為5 μ m。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述的血 漿為給予了含球毛殼堿甲藥物的血漿。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述血漿 為人或動(dòng)物的血漿。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定血漿中球毛殼堿甲濃度的方法，其特征在于，所述血漿 為大鼠血漿。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK104101665SQ201410380612
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年8月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月4日
【發(fā)明者】?jī)?chǔ)繼紅, 李長(zhǎng)印, 居文政, 劉史佳, 張軍, 許美娟, 吳婷 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)院